Vai jūs zināt, ka oksidatīvais stress var izraisīt nieru bojājumus?

Plašāka informācija:ali.ma@wecistanche.com

Ⅰ daļa: oksidatīvais stress pēc akūta nieru bojājuma izraisa plaušu šūnu skropstu darbības traucējumus un to izdalīšanos bronhoalveolārajā skalošanas šķidrumā un plaušu bojājumus, ko pastiprina Idh2 dzēšana.

Yong Kwon Hana, Ji Su Kim, Gwan Beom Leea, Jae Hang Lim, Kwon Moo Park

1. Ievads

Akūts nieru bojājums(AKI) rodas dažādos klīniskos apstākļos, tostarp šokā, sepsē, orgānu transplantācijā un asinsvadu ķirurģijā [1-3]. AKI (Akūts nieru bojājums) izraisa bojājumus attāliem orgāniem, tostarp plaušām, aknām, sirdij un smadzenēm [4-9]. Šis attālais orgānu bojājums pēc AKI (Akūts nieru bojājums)ir atzīts par galveno sliktu iznākumu riska faktoru [5,9]; tāpēc, lai uzlabotu pacientu ar AKI iznākumu, svarīga ir atbilstoša attālu orgānu bojājumu ārstēšana (Akūts nieru bojājums). Tomēr precīzi mehānismi, kas iesaistīti AKI (Akūts nieru bojājums)- kas saistīti ar attāliem orgānu bojājumiem, vēl jādefinē.

Noklikšķiniet uz Cistanche, lai uzzinātu par akūtu nieru slimību un cistanche blakusparādībām

Skropstas ir centrioles iegūti izvirzījumi no šūnas virsmas, kas satur uz mikrotubuliem balstītu citoskeletu (aksonēmu), ko ieskauj ciliāra membrāna. Skropstas raksturo to struktūra un kustīgums, un tās definē kā nekustīgas skropstas (primārās skropstas) vai kustīgas skropstas. Primārās skropstas ir atsevišķas, nekustīgas, uz mikrotubuliem balstītas 9 plus 0 aksonemālas antenas līdzīgas organellas, kas izvirzītas no šūnas membrānas un pārraida ārpusšūnu signālus šūnā, koordinējot vairākus signalizācijas ceļus [10-12 ]. Kustīgas skropstas ar daudzkārtēju, 9 plus 2 aksonēmu struktūru, galvenokārt atrodamas elpošanas traktā un olšūnā, un tās veic materiālu transportēšanu [10,13]. Arvien vairāk pierādījumu liecina, ka skropstu veidošanās un darbības defekti ir saistīti ar dažādām cilvēku slimībām, tostarppolicistisks nieru slimībasun primārā ciliārā diskinēzija [14-20]. Turklāt jaunākie pētījumi ir parādījuši, ka skropstu bojājumi notiek patoloģisku stāvokļu ietekmē un ka šis traucējums ir saistīts ar šūnu ievainojumu un disfunkcijas starpniecību [15-20].

Uzkrājošie pierādījumi to ir pierādījušinieresišēmija-reperfūzija (IR), kas ir AKI cēlonis (Akūts nieru bojājums), izraisa attālu orgānu bojājumu [6-8,21]. Tālu orgānu traumas ir saistītas ar iekaisuma reakcijām, izmaiņām signalizācijas ceļos, kas saistīti ar šūnu nāvi un izdzīvošanu, unoksidatīvais stress [8,22-24]. Oksidatīvais stressir tieši saistīts ar šūnu komponentu disfunkciju, kas var izraisīt orgānu darbības traucējumus, un ir atzīts par vienu no galvenajiemnieresIR izraisīts attālu orgānu bojājums [21,25,26]. Mēs to esam parādījuši iepriekšnieresIR un cisplatīna izraisīta AKI (Akūts nieru bojājums)maina primāro skropstu garumunieresepitēlija šūnas, saliekot, izjaucot un izjaucot (iznīcinot, izlaižot vai sadrumstalojot) skropstas [17-19]. Šie procesi ir saistīti ar reaktīvajām skābekļa sugām (ROS) unoksidatīvais stress. atkarībā no ūdeņraža peroksīda koncentrācijas un pakāpesoksidatīvsstress; zema H2O2 koncentrācija izraisa primāro skropstu garuma pagarināšanos, savukārt augsta H, O koncentrācija izraisa traucējumus [17-20]. Turklāt mēs noskaidrojām, ka ievainoto primārās skropstas ir bojātasnierescauruļveida epitēlija šūnas tiek izvadītas ar urīnu un ka šo traucējumu un izdalīšanos var novērst ar antioksidantu ārstēšanu [17-20]. Rodrigess-Ribera et al. arī ziņoja, ka reaktīvie karbonila savienojumi, piemēram, malondialdehīds, produkts nooksidatīvais stress, izraisīt primāro skropstu zudumu cilvēkamnieresproksimālās kanāliņu šūnas [27]. Tāpēc mēs izvirzījām hipotēzi, ka AKI (Akūts nieru bojājums)- izraisīts akūts plaušu bojājums (ALD) un šūnu bojājums ir saistīti ar cilijām un plaušu šūnāmoksidatīvsstressun šī profilakseoksidatīvsstresssamazina AKI (Akūts nieru bojājums)- izraisīts plaušu bojājums. Šajā pētījumā mēs pētījām, vainieresIR izraisīts AKI (Akūts nieru bojājums)izraisa plaušu skropstu un šūnu darbības traucējumus, un, ja tā, vai šie traucējumi ir saistīti aroksidatīvsB. Šim nolūkam mēs izmantojām farmakoloģiskās un ģenētiskās pieejas, tostarp izocitrāta dehidrogenāzes 2 (Idh2) dzēsto peles. IDH2 ir enzīms, kas lokalizēts mitohondrijās [28]. Mitohondrijās IDH2 katalizē izocitrāta oksidatīvo dekarboksilāciju par -ketoglutarātu, ko pavada NADP reducēšanās par NADPH, kas ir kritisks faktors tioredoksīna un glutationa antioksidantu sistēmā [29-32]. Turklāt mēs pētījām, vai ciliāru proteīnu un fragmentu klātbūtne bronhoalveolārajā skalošanas šķidrumā (BALF) liecina par plaušu traumu. Šeit mēs pirmo reizi ziņojam, ka AKI (Akūts nieru bojājums)izraisa plaušu šūnu skropstu darbības traucējumus un to izdalīšanos BALF, kā arī plaušu bojājumus, ko pastiprina IDH2 dzēšana.

oksidatīvais stress izraisa nieru bojājumus

2. Materiāli un metodes

Dzīvnieku sagatavošana.

Visi eksperimenti tika veikti, izmantojot 8-10-nedēļu vecus C57BL/6 peļu tēviņus (Koatech, Pyeongtaek, Gyeonggi-do, Koreja), mātītes ar Idh2 gēnu dzēstu (Idh2~/) un savvaļas tipa (dh2 plus / )peles [28]. Pelēm tika atļauta brīva piekļuve ūdenim un standarta peles ēdināšanai. Pētījumu ar dzīvniekiem apstiprināja Korejas Republikas Kyungpook Nacionālās universitātes Institucionālā dzīvnieku kopšanas un lietošanas komiteja. Lai izraisītu divpusēju nieru išēmiju,nierestika pakļauti iegriezumiem sānos, anestēzējot ar nātrija pentobarbitālu (60 mg/kg ķermeņa masas), un pēc tam kāju pēdiņasnierestika pilnībā saspiesti 35 minūtes, izmantojot mikroaneirisma skavas. Tāda pati procedūra, izņemotnierespedikula iespīlēšana, tika veikta fiktīvas operācijas laikā Ķermeņa temperatūra tika uzturēta 36,5 grādi -37 °C visu ķirurģisko procedūru laikā, izmantojot temperatūras regulējamu sildīšanas ierīci (FHC, Bowdoin, ME, ASV). Dažām pelēm tika ievadīts {{4 }}(2,2,6,6-Tetrametilpiperidīns-1-oksil-4-arilamino)-2-oksoetiltrifenilfosfonija hlorīds (Mito--TEMPO,{{14 }},7 mg/kg ķermeņa svara; Sigma, St. Louis, MO, ASV) 17 un 1 h pirms operācijas (priekšapstrāde) vai 6 h pēc operācijas (pēcapstrāde).

Eksperimentu beigās plaušu unnieresaudi tika ātri sasaldēti šķidrā slāpeklī vai perfūzijā, kas fiksēti ar PLP (4 procenti paraformaldehīda, 75 mM L-lizīna, 10 mM nātrija perjodāta: Sigma) šķīdumu attiecīgi bioķīmiskiem un histoloģiskiem pētījumiem. Saldēti audi tika uzglabāti -70 grādu temperatūrā līdz nepieciešamībai.

BALF kolekcija.

BALF tika savākts pēc peļu eitanāzijas ar pentobarbitāla nātrija pārdozēšanas injekciju. Plaušu noplūdes novērtēja, nosakot olbaltumvielu koncentrāciju un šūnu skaitu BALF. Lai savāktu BALF, kreisās plaušas bronhu pilnībā nofiksēja, izmantojot mikroaneirisma skavas. Trahejā tika ievietota adata un 0,8 ml aukstā fosfātu buferšķīduma (PBS) lēnām injicēts labajā plaušu daiviņā. BALF tika savākts, vienu reizi ievelkot šļirces virzuli. Kopējais šūnu skaits un olbaltumvielu koncentrācija BALF tika nekavējoties analizēti, izmantojot attiecīgi hematocitometru un BCA testa komplektu (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Masačūsetsa, ASV). BALF tika turēts -70 grādos, līdz tas bija nepieciešams Western blot analīzei.

Nieresfunkciju. Asinis no pelēm tika savāktas, izmantojot heparinizētu šļirci. Asins urīnvielas slāpekļa (BUN) koncentrācija plazmā tika noteikta, izmantojot Vitros 250 Chemistry Analyzer (Johnson&Johnson, Ņūbransvika, NJ, ASV).

Periodiskā skābes-Šifa (PAS) un hematoksilīna un eozīna (H&E) krāsošana.

PLP fiksētsnieresun plaušu audi tika iestrādāti parafīnā, sagriezti 3- μm biezās daļās, izmantojot mikrotomu (Leica, Bensheim, Vācija), un uzstādīti uz stikla priekšmetstikliņiem.Nieresun plaušu sekcijas tika iekrāsotas ar PAS un H&E. Thenieresbojājumupunktu izmeklētāji akli novērtēja, kā aprakstīts iepriekš [3,19].

Western blot analīze.

Western blotēšana tika veikta, kā aprakstīts iepriekš [3]. Western blotēšanai tika izmantotas šādas antivielas: nominālā anti-4-hidroksi (4-HNE; Abcam, Kembridža, MA, ASV), anti- -tubulīns (Santakrusa, Kalifornija, ASV) , anti-acetilēts tubulīns (ac- -tubulīns, Sigma), no mangāna atkarīgā superoksīda dismutāze (MnSOD; Calbiochem, Sandjego, CA, ASV), antikatalāze (Fitzgerald, Concord, MA, ASV) , anti-ADP-ribosilācijas faktoram līdzīgs proteīns 13B (Arl13B, Proteintech, Čikāga, IL, ASV), antiisocitrāta dehidrogenāze 2 (IDH2; Santa Cruz), anti-optiskā atrofija 1 (Opal; BD Bioscience, Sandjego, CA ), pretšķelšanās 1 (Fis1; Sigma), ar dinamīnu saistīts proteīns 1 (Drpl; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, ASV) un antigliceraldehīda 3-fosfāta dehidrogenāze (GAPDH; NOVUS, Littleton, CO, ASV).

Imunofluorescējoša krāsošana.

Pēc deparafinizācijas sekcijas 1 minūti inkubēja PBS, kas satur {{0}},2 procentus Triton X-100(Sigma), un pēc tam 10 minūtes mazgāja PBS. Lai eksponētu antigēna epitopu, sekcijas tika vārītas 10 mm nātrija citrāta buferšķīdumā (pH 6, 0) 10 minūtes, atdzesētas 20 minūtes un pēc tam trīs reizes mazgātas ar PBS 5 minūtes katrā mazgāšanas reizē. Sekcijas tika bloķētas ar 3 procentiem liellopu seruma albumīna PBS (bloķējošais buferis) 30 minūtes un pēc tam inkubētas ar anti-Arll3b antivielu 4 grādu temperatūrā nakti. Pēc mazgāšanas sekcijas inkubēja ar FITC konjugētu kazu anti-trušu IgG (Vector Laboratories, Burlingame, CA, ASV) 60 minūtes un pēc tam 3 reizes mazgāja ar PBS 5 minūtes. Šūnu kodoli tika iekrāsoti, izmantojot 4'-6-diamidino-2-fenilindolu (DAPI; Sigma).

Superoksīda mērīšana plaušu audos.

Superoksīda līmenis tika mērīts, izmantojot dihidroetīdiju (DHE; Sigma), kā aprakstīts iepriekš 【33, 34】. Īsumā, 10 μM DHE 1 ml iepriekš uzsildīta (37 grādu PBS) tika pievienota 96-iedobes plāksnei, kurā bija 20 ul plaušu audu lizāta. Plāksne tika nolasīta ik pēc 10 minūtēm kopā 30 minūtes pie ierosmes/emisijas filtriem 530 nm/620 nm.

IL-6 mērīšana.

IL-6 līmenis plazmā un BALF tika noteikts, izmantojot ELISA testu, izmantojot ELISA testu komplektu saskaņā ar ražotāja norādījumiem (BD Bioscience).

Statistika.

Visi dati tika analizēti, izmantojot GraphPad Prism 7 programmatūru (Sandjego, CA, ASV). Rezultāti ir izteikti kā vidējā ± standarta kļūda (SEM). Statistiskā analīze tika veikta, izmantojot Stjudenta t-testu un vienvirziena dispersijas analīzi ar Tukey post hoc procedūru. Atšķirības tika uzskatītas par statistiski nozīmīgām, ja bija p vērtības<>

3. Rezultāti

1. Nieru IR izraisa plaušu bojājumu.

Kā gaidīts, būtiski morfoloģiski bojājuminieres(1.A un B att.) un BUN palielināšanās plazmā (1.C att.) tika novērota 4 un 24 stundas pēc 35 minūšu abpusējas.nieresišēmija. Plaušās tika novērots neitrofilu skaita pieaugums un alveolu sieniņu sabiezēšana 4 un 24 stundas pēcnieresišēmija (1.D att.). Turklāt limfocītu antigēna 6 kompleksa lokusa G6D (Ly6G, monocītu, granulocītu un neitrofilu marķieris) ekspresijas palielināšanās plaušu audos tika novērota atkarībā no reperfūzijas laika (1E un F att.). Interleikīna-6 (IL-6) koncentrācija plazmā palielinājās pēcnieresIR, maksimums sasniedz 4 stundas pēc išēmijas (1. G attēls). I-6 un olbaltumvielu koncentrācija, kā arī kopējais šūnu skaits BALF pakāpeniski palielinājās 4 un 24 stundas pēc nieru išēmijas (1H-J att.). Izdzīvošanas rādītājs 24 stundās pēc 35 minūtēmnieresIR bija aptuveni 92 procenti (dati nav parādīti).

Kadnieresišēmiskais laiks tika pagarināts līdz 45 minūtēm, pēcišēmiskais BUN koncentrācijas pieaugums plazmā un kopējā proteīna koncentrācija un šūnu skaits BALF bija lielāks nekā pēc 35 minūšu išēmijas (1K-M att.). Šie dati liecina, ka plaušu bojājumu izraisījanieresIR traumas ir atkarīgas no pakāpesnieresievainojums.

1. att. Plaušu histoloģiskie un funkcionālie bojājumi pēc nieru IR. C57BL/6 peļu tēviņi tika pakļauti 35 (A–M) un 45 (K–M) min divpusējai nieru išēmijai vai fiktīvai operācijai. Nieres, plaušas, asinis un BALF tika savākti 4 un 24 stundas pēc operācijas. BALF tika savākts, kā aprakstīts sadaļā Materiāli un metodes. (A – J) Peles tika nogalinātas 4 vai 24 stundas pēc 35 minūšu išēmijas. (A, B)Nieressekcijas (3 μm) tika iekrāsotas ar PAS, unnierestika konstatēti cauruļveida bojājumi. (C, K) BUN koncentrācijas tika mērītas plazmā. (D) Plaušu sekcijas (3 μm) tika iekrāsotas ar H&E. (E, F) Ly6G ekspresija plaušu audos tika analizēta ar Western blot metodi. GAPDH tika izmantots kā iekraušanas kontrole. Joslu blīvums tika mērīts, izmantojot ImageJ programmatūru. (G, H) IL-6 koncentrācija tika mērīta plazmā un BALF. (I, J, L, M) Proteīna koncentrācija un kopējais šūnu skaits tika mērīts BALF. (K – M) Peles tika nogalinātas 4 stundas pēc 35 vai 45 minūšu išēmijas. Rezultāti ir izteikti kā vidējie ± SEM (n=3–6). *p < 0.05="" pret="" viltus.="" †p="">< 0,05="" pret="" 4="" h="" pēc="" išēmijas="" vai="" išēmijas="" 35="">

2. Nieru IRizraisa plaušu epitēlija šūnu skropstu bojājumus, un šie fragmenti tiek izdalīti BALF.

Plaušu audu sekcijas un ar BALF ielādēti priekšmetstikliņi tika imūnkrāsoti ar anti-ADP-ribosilācijas faktoram līdzīgu proteīnu 13B (Arl13B, skropstu marķieris) antivielu. Arll3B pozitīvie signāli tika novēroti alveolu luminālajā daļā un plaušu terminālajos bronhiolos (2.A att.). Arl13B pozitīvā signāla zudums tika novērots plaušāsnieresIR pakļautas peles (Zīm.2A). Šis Arll13B pozitīvā signāla zudums pakāpeniski palielinājās pēc tamnieresišēmija laika gaitā (2.A att.). BALF pēc nieru išēmijas tika novērotas dažāda garuma Arl13B pozitīvās daļiņas, un Arl13B pozitīvo daļiņu skaits BALF pakāpeniski pieauga laika gaitā pēc išēmijas (2.B un C att.). Arl13B, acetilētā tubulīna (ac- -tubulīna, granulocītu un neitrofilu) ekspresija plaušu audos tika novērota atkarībā no reperfūzijas laika (1. E un F att.). Interleikīna-6 (IL-6) koncentrācija plazmā palielinājās pēcnieresIR, maksimums sasniedz 4 stundas pēc išēmijas (1. G attēls). I-6 un olbaltumvielu koncentrācija, kā arī kopējais šūnu skaits BALF pakāpeniski palielinājās 4 un 24 stundas pēc nieru išēmijas (1H-J att.). Izdzīvošanas rādītājs 24 stundās pēc 35 minūtēm nieru IR bija aptuveni 92 procenti (dati nav parādīti).

Kadnieresišēmiskais laiks tika pagarināts līdz 45 minūtēm, pēcišēmiskais BUN koncentrācijas pieaugums plazmā un kopējā proteīna koncentrācija un šūnu skaits BALF bija lielāks nekā pēc 35 minūšu išēmijas (1K-M att.). Šie dati liecina, ka plaušu bojājumu izraisījanieresIR traumas ir atkarīgas no pakāpesnieresievainojums.

2. attēls. Plaušu šūnu skropstu un to fragmentu un proteīnu traucējumi, kas izdalīti BALF pēc nieru IR.C57BL/6 vīriešu dzimuma pelēm tika veikta vai nu 35 minūšu divpusēja nieru išēmija, vai fiktīva operācija. Plaušu audi un BALF tika savākti 4 un 24 stundas pēc operācijas, kā aprakstīts sadaļā Materiāli un metodes. (A) Plaušu sekcijas (5 μm) tika pakļautas imunofluorescējošai krāsošanai, izmantojot anti-Arl13B antivielu; zaļš norāda uz Arl13B pozitīvu. DAPI traips (4′,6-diamidino-2-fenilindols; zils) tika izmantots, lai vizualizētu šūnu kodolus. Bultu uzgaļi norāda uz skropstām. (B) BALF (10 ul) tika uzlikts uz stikla priekšmetstikliņa, kas tika iekrāsots imūnfluorescējoši, izmantojot anti-Arl13B antivielu; zaļš norāda uz Arl13B pozitīvu (n=3). (C) Arl13B pozitīvo daļiņu skaits tika skaitīts fluorescences mikroskopā (n=3). (D–G) Arl13B, acetilētā- -tubulīna (ac- -tub) un -tubulīna (-tub) ekspresijas BALF tika analizētas ar Western blot metodi. Joslu blīvums tika mērīts, izmantojot ImageJ programmatūru. Rezultāti ir izteikti kā vidējie ± SEM (n=3). *p < 0.05="" pret="" viltus.="" †p="">< 0,05="" pret="" 4="" h="" pēc="" išēmijas.="" a:="" alveoli,="" tb:="">

3. Nieru IR palielina superoksīda un oksidatīvā stresa līmeni gan plaušu audos, gan BALF.

NieresIR palielināja superoksīda līmeni plaušu audos (3.A att.), bet samazināja IDH2 (3.B un C att.), bet ne MnSOD un katalāzes ekspresiju (3.B.DE att.). Šie atklājumi liecina, ka nieru IR izraisīts plaušu bojājums ir saistīts ar ROS līmeņa paaugstināšanos unoksidatīvais stressplaušās. Lai to pamatotu, 4-hidroksinominālā (4-HNE), lipīdu peroksidācijas produkta, līmenis plaušu audos ievērojami palielinājās 4 un 24 stundas pēcnieresišēmija(Zīm.3F-D). 4-HNE tika novērots gandrīz visos plaušu audu apgabalos, tostarp alveolos un bronhos (3H un D attēls. Turklāt 8-hidroksi-2'-deoksiguanozīna ({{) 7}}OhdG), labi zināms DNS oksidācijas marķieris kā oksidēts deoksiguanozīna atvasinājums, palielinājās gan citozolā, gan kodolos plaušu epitēlija šūnās pēcnieresišēmija (3J un K att. BALF gadījumā 4-HNE ekspresija palielinājās arī pēcnieresišēmijano reperfūzijas laika atkarīgā veidā (3L, M att.). Turklāt, ja nieru išēmiskais laiks tika pagarināts līdz 45 minūtēm, pēcišēmiskā 4-HNE ekspresijas palielināšanās plaušās bija lielāka nekā pēc 35 minūtēmnieresišēmija (Zīm.3N, O). Šie rezultāti liecina, ka gan mitohondriju DNS, gan kodola DNS ir oksidatīvi ievainotas, palielinoties ROS veidošanās un izņemšanas sistēmu traucējumiem, kas liecina, ka plaušu epitēlija šūnu skropstu bojājumi ir saistīti aroksidatīvais stress.

3. att. Oksidatīvais stress plaušu audos pēc nieru IR. C57BL/6 peļu tēviņi tika pakļauti 35 (A–O) un 45 (N, O) min divpusējai nieru išēmijai vai fiktīvai operācijai.Plaušu unnierestika novāktas 4 un 24 stundas pēc 35 vai 45 minūšu išēmijas. (A – M) Peles tika nogalinātas 4 vai 24 stundas pēc 35 minūšu išēmijas. (A) Superoksīda līmenis plaušu audos tika mērīts, kā aprakstīts sadaļā Materiāli un metodes (n=3–5). (B–E) IDH2, katalāzes un MnSOD ekspresija plaušu audos tika analizēta ar Western blot metodi (n {{10}}). GAPDH tika izmantots kā iekraušanas kontrole. (C – E) Joslu blīvums tika mērīts, izmantojot ImageJ programmatūru. (F, G) 4-HNE ekspresija plaušās tika analizēta ar Western blot metodi, un joslu blīvums tika mērīts, izmantojot ImageJ (n=4). (H–K) Plaušu sekcijas (3 μm) tika imūnhistoķīmiski iekrāsotas, izmantojot anti-4-HNE un 8-OHdG antivielas, un pretkrāsotas, izmantojot hematoksilīnu; brūns norāda uz 4-HNE- un 8-OHdG pozitīvu (n {{20}}). (I, K) 4-HNE- un 8-OHdG pozitīvo signālu intensitātes tika mērītas, izmantojot programmu i-Solution (n=3). (L, M) 4-HNE ekspresija BALF tika analizēta ar Western blot metodi, un joslu blīvums tika mērīts, izmantojot ImageJ (n=3). (N, O) Peles tika nogalinātas 4 stundas pēc 35 vai 45 minūšu išēmijas. 4-HNE ekspresija plaušās tika analizēta ar Western blot metodi, un joslu blīvums tika mērīts, izmantojot ImageJ (n=3). Rezultāti ir izteikti kā vidējie ± SEM (n =3–5). *p < 0,05="" pret="" viltus.="" †p="">< 0,05="" pret="" 4="" h="" pēc="" išēmijas="" vai="" 35="" min="" pēc="" išēmijas.="" (lai="" interpretētu="" šīs="" attēla="" leģendas="" atsauces="" uz="" krāsu,="" lasītājs="" ir="" skatīts="" šī="" raksta="" tīmekļa="">

Šūnās, mitohondrijās. galvenā ROS ražojošā intracelulārā organelle parasti tiek sapludināta un skaldāma, lai pielāgotos fizioloģiskiem un patoloģiskiem apstākļiem. Šo saplūšanas un dalīšanās procesu traucējumi var izraisīt šūnu disfunkciju un bojājumus[36]. Iepriekšējie pētījumi to ir pierādījušioksidatīvsstresspasliktina normālu mitohondriju saplūšanas un dalīšanās dinamiku, izraisot mitohondriju disfunkciju un šūnu bojājumus [32,36-38]. Mēs centāmies novērtēt mitohondriju dinamiku, nosakot mitohondriju dalīšanās un saplūšanas regulējošās olbaltumvielu ekspresijas. Fis1 un Drp1 ekspresijas, kas regulē mitohondriju skaldīšanu, tika ievērojami palielinātas peļu plaušās arnieresišēmija(Zīm.4A-C). Tomēr OPA1 ekspresiju, kas regulē mitohondriju saplūšanu, nieru IR būtiski nemainīja (4A, D att.). Šie dati liecina, ka AKI rezultātā tiek traucēts mitohondriju saplūšanas un dalīšanās līdzsvars plaušu šūnās. (Akūts nieru bojājums).

4. att. Mitohondriju dinamikas izmaiņas plaušās pēc nieru IR. C57BL/6 vīriešu dzimuma pelēm tika veikta 35 minūšu divpusēja nieru išēmija vai fiktīva operācija.Plaušas tika novāktas 4 un 24 stundas pēc išēmijas. (A – D) Drp1, Fis1 un OPA1 ekspresijas plaušu audos tika analizētas ar Western blot metodi. GAPDH tika izmantots kā iekraušanas kontrole. Joslu blīvums tika mērīts, izmantojot ImageJ programmatūru. Rezultāti ir izteikti kā vidējie ± SEM (n=4). *p < 0.05="" pret="" viltus.="" †p="">< 0,05="" pret="" 4="" h="" pēc="">

4. Mitohondrijiem specifiskā antioksidantu apstrāde samazina nieru IR izraisītu plaušu bojājumu un plaušu skropstu bojājumus.

Lai apstiprinātu mitohondriju lomuoksidatīvsstressieslēgtsnieresIR izraisīts plaušu bojājums un plaušu epitēlija šūnu skropstu pārrāvums, mēs pārbaudījām, vai iepriekšēja apstrāde (5.A-D. att. vai pēcapstrāde (5.J-L. att.) ar Mito-TEMPO, mitohondrijiem specifisku antioksidantu, inhibē nieru infrasarkano staru izraisīto darbību.oksidatīvsstress, I-6 ražošana un decilācija C57BL/6 peļu tēviņu plaušās. Iepriekšēja apstrāde (att. 5A-D), bet ne pēcapstrāde (5.J-L att.) ar Mito-TEMPO, ievērojami kavēja BUN un IL-6 koncentrācijas palielināšanos plazmā (5A un B att.), kā kā arī IL-6 koncentrācija, kopējā olbaltumvielu koncentrācija un kopējais šūnu skaits BALF (att., 5C-E). Arl13B, ac- -tubulīna un -tubulīna ekspresija ar Mito-TEMPO iepriekš apstrādātām pelēm BALF bija mazāka nekā pelēm, kas apstrādātas ar nesēju (5.F-I. att.). Šajā pētījumā 6-h pēcapstrāde neaizsargāja plaušas pretnieresIR (5J-L att.). Šie rezultāti liecina, ka agrīna ROS ražošana, tās uzkrāšanās unoksidatīvsstressvar būtiski veicināt AKI (Akūts nieru bojājums)- izraisīts plaušu bojājums. Superoksīda līmenis un 4-HNE ekspresija plaušu audos (6. A-C att.) un BALF (6. D. un E. att.) bija mazāka pelēm, kas iepriekš apstrādātas ar Mito-TEMPO, nekā pelēm, kas ārstētas ar nesēju. Šie rezultāti liecina, kanieresIR izraisīts plaušu bojājums un plaušu epitēlija šūnu decilācija ir saistīta ar mitohondrijuoksidatīvsstress.

5. att.. Nieru IR izraisītu plaušu bojājumu un skropstu bojājumu novēršana ar Mito-TEMPO, uz mitohondrijiem mērķtiecīgu antioksidantu. C57BL/6 vīriešu kārtas peles tika pakļautas 35 minūšu divpusējai nieru išēmijai.Dažām pelēm tika ievadīts Mito-TEMPO (Mito-T, 0.7 mg/kg ķermeņa svara, ip) 17 un 1 stundu pirms išēmijas, divas reizes (A–I) vai 6 stundas pēc išēmijas (J– L). Plaušas, BALF un asinis tika novāktas 24 stundas pēc išēmijas. (A, J) Tika mērīta BUN koncentrācija plazmā. (B, C) IL-6 koncentrācija plazmā un BALF tika mērīta, izmantojot ELISA testa komplektu. (D, E, K, L) Tika izmērīta proteīna koncentrācija un šūnu skaits BALF. (F–I) Arl13B, acetilētā{{10}}tubulīna (ac- -tub) un -tubulīna (-tub) ekspresijas BALF tika analizētas ar Western blot metodi. Joslu blīvums tika mērīts, izmantojot ImageJ programmatūru. Rezultāti ir izteikti kā vidējie ± SEM (n=4). *p < 0,05="" pret="">

SPIED ŠEIT, LAI DALĪTIES Ⅱ