Ramiprila ietekme uz nierēm, plaušām un sirdi ACE2 diabēta peļu modelī
Mar 28, 2022
KOPSAVILKUMSPamatinformācija: Smags akūts respiratorā sindroma koronavīruss 2 (SARS-CoV-2) ir atbildīgs par pašreizējo 2019. gada koronavīrusa slimību (COVID-19). Galvenais šīs infekcijas skartais orgāns ir plaušas, un vīruss izmanto angiotenzīnu konvertējošo enzīmu 2 (ACE2) kā receptoru, lai iekļūtu mērķa šūnās. Šajā kontekstā radās domstarpības par renīna-angiotenzīna sistēmas (RAAS) blokatoru lietošanu, jo šīs zāles var palielināt ACE2 ekspresiju dažos audos un potenciāli palielināt SARS-CoV{11}} infekcijas risku. Tas jo īpaši attiecas uz pacientiem ar cukura diabētu, jo diabēts ir Covid riska faktors-19. Metodes: 12-nedēļu vecas diabēta peles (db/db) 8 nedēļas tika ārstētas ar ramiprilu vai nesēja kontroli. Peles bez diabēta db/m tika iekļautas kā kontroles. ACE2 ekspresija un aktivitāte tika pētīta plaušās,nieresun šo dzīvnieku sirdis. Rezultāti:NieresACE2 aktivitāte tika palielināta db/db pelēm, salīdzinot ar db/m (143,2 procenti ± 23 procenti pret 100 procentiem ± 22,3 procenti, p=0.004), turpretim ramiprilam nebija būtiskas ietekmes. Plaušās ACE2 atšķirības netika konstatētas, salīdzinot db/db peles ar db/m, un arī ramiprilam nebija būtiskas ietekmes. Sirdī diabēts samazināja ACE2 aktivitāti (par 83 procentiem ± 16,8 procentiem, salīdzinot ar 100 procentiem ± 23,1 procentiem p=0.02), un ramiprils ievērojami palielināja ACE2 (par 83 procentiem ± 16,8 procentiem pret 98,2 procentiem ± 15 procentiem, p=0.04). Secinājumi: 2. tipa cukura diabēta peļu modelī ramiprilam nebija būtiskas ietekmes uz ACE2 aktivitātinieresvai plaušās. Tāpēc ir maz ticams, ka RAAS blokatori vai vismaz angiotenzīnu konvertējošā enzīma inhibitori palielina SARS-CoV-2 infekcijas risku, palielinot AKE2.
Atslēgvārdi:COVID{0}}; Diabēts; RAAS blokāde; Plaušas; nieru slimības; nieres
CISTANCHE UZLABOS NIERU/NIeru SLIMĪBU
IevadsPandēmija, ko izraisīja smaga akūta respiratorā sindroma koronavīruss 2 (SARS-CoV-2), kas sākās 2019. gada decembrī Uhaņā, Ķīnā, ir izraisījusi sanitāro krīzi visā pasaulē. Plaušas ir galvenais koronavīrusa slimības-19 (COVID-19) skartais orgāns. SARS-CoV-2 izmanto transmembrānu proteīnu angiotenzīnu konvertējošo enzīmu 2 (ACE2) kā vienu no receptoriem, lai iekļūtu mērķa šūnās (Hoffmann et al., 2020), kas ir kopīga ar SARS-CoV (vīrusu, kas 2002. gadā izraisīja SARS epidēmiju) (Li et al., 2003). ACE2 ir karboksipeptidāze, kas pārveido angiotenzīnu-I (Ang-I) un angiotenzīnu-II (Ang-II) par angiotenzīnu-1-9 (Ang-1-9) un angiotenzīnu-1-7 (Ang{23). }}), attiecīgi. Šis enzīms ir daļa no renīna-angiotenzīna-aldosterona sistēmas (RAAS) alternatīvā ceļa. Tās aktivizēšanai ir vazodilatatora iedarbība pati par sevi, un tā negatīvi regulē RAAS (vazokonstriktora) klasisko roku (Obukhov et al., 2020; Romero et al., 2015). ACE2 ir plaši ekspresēts proksimālajās cauruļveida šūnāsnieres(Lely et al., 2004). Mazākā mērā tas izpaužas arī plaušās (2. tipa pneimocītos) (Hamming et al., 2004; Serfozo et al., 2020) un sirdī (kardiomiocītos) (Oudit et al., 2009). Ieskats, ko sniedza pirmā SARS-CoV pandēmija 2002. gadā, atklāja, ka SARS-CoV infekcija izraisīja ACE2 ekspresijas samazināšanos plaušās. Akūta plaušu bojājuma gadījumā ACE2 deficīts ir saistīts ar pastiprinātu audu bojājumu, ko var saistīt ar pārmērīgu RAAS (ACE/Ang-II/Angiotenzīna-II 1. tipa receptoru ass) vazokonstriktora rokas aktivāciju (Kuba et al. , 2006). Tāpēc šķiet, ka RAAS ir svarīga loma plaušu bojājuma smaguma pakāpē saistībā ar SARS-CoV{15}} infekciju. Turklāt RAAS deregulācija ir klasiski novērota diabēta gadījumā, un ACE2 ekspresijas izmaiņas ir konstatētasnieresun diabēta pacientu sirds (Reich et al., 2008). Metaanalīzes dati atklāja, ka SARS-CoV-2 inficētiem pacientiem nav augstāka diabēta izplatība, lai gan diabēta pacientiem ir paaugstināts risks saslimt ar smagām SARS-CoV-2 infekcijas formām un sliktākiem rezultātiem. (Fadini et al., 2020). Aptuveni 40 procenti 2. tipa cukura diabēta pacientu ir hipertensīvi ("Hypertension in diabetes study (HDS): I. Prevalence of hypertension in newly presenting 2. Type diabēts pacienti un saistība ar kardiovaskulāro un diabēta komplikāciju riska faktoriem", 1993), un tāpēc tie ir. ārstēti ar RAAS blokatoriem: angiotenzīnu konvertējošā enzīma inhibitoriem (ACEis) vai angiotenzīna-II 1. tipa receptoru blokatoriem (ARB). Turklāt šīs zāles plaši izmanto arī hipertensijas un proteīnūrijas ārstēšanai, kas nav saistīta ar diabētunieru slimības(García-Carro et al., 2019).
COVID{0}} pandēmijas pirmā viļņa laikā radās domstarpības par RAAS blokatoru lietošanu, jo daži pētījumi eksperimentālos modeļos liecina, ka ārstēšana ar šīm zālēm palielināja ACE2 ekspresiju sirds audos (Ferrario et al., 2005). Ishiyama et al., 2004; Ocaranza et al., 2006) unnieruasinsvadu sistēma (Soler et al., 2009). Šo preklīnisko pierādījumu dēļ ir ierosināts, ka ārstēšana ar RAAS blokatoriem varētu palielināt uzņēmību pret SARS-CoV-2 infekciju, radot paradoksu, jo paaugstināts ACE2 līmenis parasti tiek uzskatīts par audu aizsargājošu (Aleksova et al., 2020). Sparks et al., 2020; Wang et al., 2020). Neskatoties uz iepriekšminēto pētījumu rezultātiem (Ferrario et al., 2005; Ishiyama et al., 2004; Ocaranza et al., 2006; Soler et al., 2009), nav pietiekami daudz pierādījumu, lai apstiprinātu, ka šīs zāles veicina ACE2 ekspresiju kā citi autori, kas izmanto līdzīgus eksperimentālos modeļus, nav novērojuši RAAS blokatoru izraisītu ACE2 modulāciju (Burchill et al., 2012; Burrell et al., 2005). Turklāt RAAS blokatoru ietekme uz plaušu ACE2 modulāciju ir tikko novērtēta. Nesenajā ziņojumā Wysocki un līdzstrādnieki aprakstīja ACE2 modulācijunieresun peļu plaušas (C57BLKS/J), kas ārstētas ar RAAS blokatoriem (telmisatānu vai kaptoprilu) (Wysocki et al., 2020). Šeit mēs pētām ACEi (ramiprila) ietekmi uznieres, plaušu un sirds ACE2 2. tipa diabēta peles modelī.
CISTANČE UZLABOS NIeru/NIeru INFEKCIJU
2. Materiāli un metodes
2.1.Procedūras ar dzīvniekiemAstoņas nedēļas veci cukura diabēta peļu tēviņi ar leptīna receptoru deficītu (db/db) un bezdiabēta heterozigotu metiena biedri (db/ plus ) tika iegādāti no Charles River (BKS.Cg-Dock7m plus / plus Lepr"J. Celma kods: 607 ).Peles tika izmitinātas ne vairāk kā 4 grupās katrā būrī ar ad libitum piekļuvi parastajām pelēm čau un ūdenim 12 h gaismas:12 h tumšā ciklā. Pēc 4 nedēļām (12-nedēļas vecas peles) grupa db/db (n =7) tika ārstēti ar ramiprilu (8 mg/kg/dienā), kas atšķaidīts dzeramajā ūdenī (20 mg/L) 8 nedēļas. Transportlīdzekļa db/db (n=7 ) un db/m (n=7) tika izmantotas kā kontroles. Svaru un glikozes līmeni asinīs kontrolēja reizi divās nedēļās, kā arī asinsspiedienu pirms un pēc ārstēšanas (skatīt papildu metodes). Pēc ārstēšanas perioda dzīvnieki tika nonāvēti nātrija atmosfērā. pentobarbitāla anestēzija. Pēc tam peles 1x perfūzēja ar aukstu PBS un ar sirds punkciju tika iegūtas pilnas asinis. Asins paraugi tika savākti mēģenēs ar recēšanas aktivatora gēlu (41.1378.005, Sarstedt, Vācija), lai iegūtu s ērums. Pēc tam,nieres,sirds un plaušas tika izņemtas, ātri sasaldētas šķidrā slāpeklī un uzturētas -80 ° C temperatūrā līdz lietošanai. Turklāt daļa nonieresun sirds tika fiksēta 10 procentu formalīnā un parafīnā, kas tika iestrādāts histoloģiskai analīzei. Eksperimentālo protokolu apstiprināja Vall d'Hebron Research Institute (47.18 CEEA) Eksperimentu ar dzīvniekiem ētikas komitejas. Visas procedūras tika veiktas saskaņā ar Katalonijas ģenerāldirektorāta vadlīnijām saskaņā ar Eiropas Padomes direktīvām par aizsardzību un pētniecībā un citos zinātniskos nolūkos izmantoto dzīvnieku aprūpe (2010/63/ES).
2.2. ACE2 analīzeTika analizēta ACE2 gēna un olbaltumvielu ekspresija, kā arī ACE2 aktivitātenieres, plaušu un sirds ekstrakti. Serumā tika novērtēta tikai ACE2 aktivitāte. ACE2 gēna ekspresija tika mērīta ar RT-qPCR, un relatīvai kvantitatīvai noteikšanai tika izmantota A△Cr metode, izmantojot hipoksantīna fosforiboziltransferāzi 1 (HPRT) kā mājturības gēnu. ACE2 proteīna līmenis tika novērtēts ar Western blot, un ACE2 aktivitāte tika noteikta, izmantojot fluorescējošu enzīmu testu, izmantojot ACE2-reducētu fluorogēnu substrātu (Mca-Ala-Pro-Lys (Dnp)-OH: Enzo Life-Sciences), kā aprakstīts. iepriekš(Riera et al.2016). Turklāt sadaļānieresun sirdī mēs atklājām ACE2 ar imūnhistoķīmiju. Metodoloģija ir detalizēti aprakstīta papildu metodēs.
2.3. Statistiskās analīzesNormālais sadalījums tika pārbaudīts, salīdzinot mūsu datus ar prognozēto normālo sadalījumu kvantil-kvantil (QQ) diagrammā un apstiprināts ar normalitātes testiem (Šapiro-Vilks un/vai Kolmogorovs-Smirnovs). Grupas tika salīdzinātas (db/m vs db/db). un db/db vs db/db plus Ramipri) ar Velča t-testiem, kad tika ievērota norma, vai ar Manna-Vitnija testu, kad dati sekoja nenormālam sadalījumam. Dati ir izteikti kā vidējā ± standarta novirze (SD). P vērtības ir detalizētas, lai novērtētu salīdzinājumu ticamību, un statistiskais nozīmīgums tika ņemts vērā, ja p ir mazāks par vai vienāds ar 0,05. Visas statistiskās analīzes un diagrammas tika veiktas ar GraphPad Prism versiju 8.2.1.
3. Rezultāti
3.1. Ramiprils pazemina asinsspiedienu db/db pelēmŠī pētījuma galīgie mērķi bija novērtēt (1) kā modulējas diabēta kontekstsnieru, plaušu un sirds ACE2 (SARS-CoV-2 receptoru, lai inficētu mērķa šūnas), un (2) vai ACEi ārstēšana varētu mainīt ACE2 uzvedību diabēta gadījumā. Šim nolūkam 12-nedēļu vecas diabēta peles (db/db) 8 nedēļas tika ārstētas ar ramiprilu (8 mg/kg/dienā), ACEi. Transportlīdzekļa db/db un peles bez diabēta (db/m) tika iekļautas kā kontroles. Kā gaidīts, visām diabēta pelēm, abas ārstētas ar ramiprilu un nesēju, eksperimenta beigās bija hiperglikēmija un palielināts svars, salīdzinot ar todb/m pelēm (1. tabula). Mūsu eksperimentālajā vidē db/db pelēm bija pazemināts sistoliskais un diastoliskais asinsspiediens, salīdzinot ar kontroles db/m pelēm (skatīt 1. tabulu). Kā gaidīts, Ramiprila ievadīšana 8 nedēļas ievērojami samazināja sistolisko asinsspiedienu, salīdzinot ar nesēja db/db un/vai db/m grupu (1. tabula), kas liecina, ka ārstēšana ar ramiprilu bija efektīva.
3.2. ACE2 ir palielināts db/db peļu nierēs, kuras nav modificētas ar ramipriluMēs pētījām ACE2 modulācijunieresno db/m, nesēja db/db un db/db pelēm, kas apstrādātas ar ramiprilu, izmantojot divas pieejas: (1) ACE2 gēna ekspresija ar qPCR un (2) ACE2 aktivitātes tests, izmantojot fluorescējošu substrātu. Transportlīdzekļa db/db pelēm bija paaugstināta nieru ACE2 gēna ekspresija, salīdzinot ar db/m(1.011 ± 0.16 pret 1582 ± 0.18, p<0.0001), this="" effect="">
pretēja ar ramiprila ievadīšanu (1,280 ± 0,18, p=0,01) (1. att., A). Nieru ACE2 aktivitātei (100 procenti ± 14,2 procenti pret 114 procentiem ± 31,9 procenti, p=0.2) arī bija tendence palielināties līdzekļa db/db, tomēr ramiprils nemainīja savu aktivitāti (114 procenti ± 31,9 procenti pret 109,3 procenti ± 18,6 procenti ) (1. D attēls)). Ar membrānu bagātinātos proteīna ekstraktos kļuva skaidrs, ka db/db dzīvniekiem ir palielinājusies ACE2 aktivitāte, salīdzinot ar db/m (100 procenti ± 22,3 procenti pret 143,2 procenti ± 23,1 procenti, p=0,004) un , atkal ramiprils nemainīja ACE2 aktivitātinieresar membrānu bagātināti ekstrakti (2.A att.). Iekšnieresaudu sekcijās ACE2 ekspresija tika lokalizēta cauruļveida šūnu otas robežās, un krāsojums bija izteiktāks db/db, salīdzinot ar db/m (3. att.). Mēs nenovērojām būtiskas izmaiņas ACE2 izplatībānieresar ramiprilu ārstētiem dzīvniekiem, salīdzinot ar neārstētajiem db/db (3. att.).
3.3. Ramiprils nemodificēja plaušu ACE2 db/db pelēm Plaušās mēs veicām tādu pašu pieeju kānieresizpētīt ACE2. Mēs neatradām nekādas atšķirības starp db/m un nesēja db/db attiecībā uz ACE2 gēna ekspresiju (1. att., B), galvenokārt saistībā ar ACE2 mRNS ekspresijas lielo mainīgumu (0.97 ± {{6}). }.8 pret 1.{10}}7 ± 0.71, p=0.63). Mēs nevarējām atrast atšķirības starp plaušu un ACE2 aktivitāti (ne arī kopējos proteīna ekstraktos vai ar membrānu bagātinātos ekstraktos) (attiecīgi 1. E un 2. B att. un 1. un 2. att.). Turklāt db/db plaušās ārstēšana ar ramiprilu neizraisīja izmaiņas ACE2 gēna ekspresijā un aktivitātē (1.B un E. attēls, 2.B attēls un 1. un 2. papildu attēls).
3.4 ACE2 tiek samazināts dienas un dienas centrā, un ramiprils normalizē ACE2 līmeniMēs analizējām arī ACE2 sirdī Sirds audos ACE2 ievērojami samazinājās db/db salīdzinājumā ar db/m, kas ietekmē abus mRNS līmeņus (1.01±{6}}.12ws {{8). }},84±0,16,p=0.05)(1. C att.) un ACE2 aktivitāte (100 procenti ±23,1 procenti ir 83 procenti ±16,8 procenti, p=0.02), (臣g.1F）) .Ar membrānu bagātinātos ekstraktos ACE2 aktivitāte arī ievērojami samazinājās db/db, salīdzinot ar db/m (att.2O. Ārstēšana ar ramiprilu ievērojami atjaunoja ACE2 aktivitāti novērotajām db/m kontroles pelēm (83 procenti ±16,8 procenti pret 98,2). procenti ±15 procenti ,p=0.04)(1. att. E). Tomēr ramiprils nespēja mainīt ACE2 gēna ekspresiju sirdī (att., IC). Turklāt mēs novērtējām ACE2 sadalījumu sirds audos, kur ACE2 krāsojums uzrādīja difūzu sadalījumu ar palielinātu ACE2 krāsojumu dažos apgabalos. Mēs atzīmējām, ka krāsošanas intensitāte db/db bija maigāka, salīdzinot ar db/m. Šķiet, ka ramiprils atjauno iekrāsošanās intensitāti (Hig 3).
3.5. Seruma ACE2 aktivitāte ir palielināta db/db, un ramiprils to nemainīja.Visbeidzot, mēs izmērījām ACE2 aktivitāti db/m, db/db un db/db seruma paraugos, kas apstrādāti ar ramiprilu. Seruma ACE2 aktivitāte bija ievērojami palielināta db/db, salīdzinot ar db/m (99,9 procenti ± 29,3 procenti bija 146 procenti ±57,2 procenti, p= 0.03), un ramiprils šo efektu nemazināja (146 procenti). ±57,2 procenti pret 128 procentiem ±55,7 procenti ,p= 0.5)(4. att.).
4. Diskusija
Pašreizējā SARS-CoV-2 izraisītā pandēmija ir izraisījusi pretrunas saistībā ar RAAS blokatoru lietošanu COVID-19 pacientiem. Neskatoties uz pierādītajiem ieguvumiem, ko sniedz ACEi vai ARB lietošana sirds un asinsvadu slimniekiem (Fegan et al., 2000; Romero et al., 2015), ir ierosināts, ka šīs zāles var palielināt ACE2, SARS-CoV receptora, ekspresiju. 7}}, tādējādi palielinot COVID risku un smagumu-19 (Aleksova et al, 2020; Sparls et al, 2020; Wang et al, 2020).
Ar šo pētījumu mēs centāmies izgaismot šo strīdu, un šim nolūkam mēs analizējām ACE2 nieru, plaušu, sirds un seruma paraugos diabēta peļu modelī (db/db), kas 8 nedēļas tika ārstēti ar ramiprilu. Mēs izmantojām diabēta modeli, lai noteiktu RAAS blokādes ietekmi, jo diabēta vide ir per jūras riska faktors sliktai prognozei COVID-19 pacientiem (Fadini et al, 2020; Williamson et al, 2020). Mēs atklājām palielinātu nieru ACE2 gēna ekspresiju un aktivitāti membrānas ekstraktos db/db pelēm (attiecīgi 1.A un 2.A att.). Iepriekšējie pētījumi ir pierādījuši arī nieru kanāliņu ACE2 palielināšanos db/db diabēta pelēm (Wysocki et al, 2006; Yeet al, 2004, 2006), kā arī citos diabēta peļu modeļos (Riera et al, 2016; Wysocki et al, 2006). ). Ramiprils spēja atjaunot ACE2 pieaugumu gēnu ekspresijas līmenī, kas liecina, ka tā ievadīšana aizsargā pret diabēta kaitīgo ietekmi nierēs. Mūsu atklājumi nierēs kontrastē ar rezultātiem, kas publicēti nesenajā Wysocki un līdzstrādnieku ziņojumā (Wysocldi et al.2020), jo viņi aprakstīja RAAS blokādi C57BLKS/J pelēm, kas veicina ACE2 ekspresijas samazināšanos kopā ar proteīna internalizāciju. Mūsu pētījumā, izmantojot db/db peļu modeli, mēs neatradām, ka ramiprils samazināja ACE2 aktivitāti nierēs (1. un 2. att.), un mēs arī nenovērojām proteīnu internalizāciju (3. att.). Tomēr mēs atklājām, ka ārstēšana ar ramiprilu izraisīja ACE2 gēna ekspresijas samazināšanos db / db (att., 1A). Gēnu un olbaltumvielu ekspresija var nebūt korelē, jo proteīnu sintēzei un degradācijai ir dažādi laiki, taču ACE2 gēna ekspresijas (Fg.1A) rezultāti liecina, ka RAAS blokāde veicinātu ACE2 samazināšanos nierēs, kā ierosināja Wysocki un līdzstrādnieki. Wysocldi et al.2020). Mūsu pieeja, atšķirībā no Wysocki un kolu pētījuma (Wysocldi et al.2020), atdarināja pacientus ar cukura diabētu, kuri parasti saņem RAAS blokatorus, lai aizkavētu diabētiskās nefropātijas progresēšanu (Garcia-Carro et al.. 2019). Inline, nesenais Batchu et al. ir skaidri parādījis nierēs un plaušās komorbīdu diabēta peļu (novecošanās, augsta tauku satura diēta un streptozotocīna izraisīts diabēts) ACE2 regulēšana. tomēr RAAS blokāde nespēja to mainīt (Batchu et al.2020). Tādējādi. vismaz nierēm. mūsu rezultāti neatbalsta domu, ka RAAS blokāde veicinātu ACE2 pārmērīgu ekspresiju. Divos neatkarīgos pētījumos cilvēkiem tika aprakstīts, ka diabēta slimniekiem ir samazināta tubulārā ACE2 gēna un olbaltumvielu ekspresija
nefropātija, salīdzinot ar veseliem indivīdiem (Mizuiri et al., 2008; Reich et al, 2008), lai gan cits autors nespēja atrast nekādas atšķirības (Lelyet al. 2004). Attiecībā uz RAAS blokādes ietekmi uz cilvēkiem ir daži pierādījumi, ka tā ietekmē ACE2 ekspresiju nierēs (Lely et al, 2004; Reich et al, 2008).
Mēs arī analizējām ACE2 plaušu un sirds audos, kur ACE2 klātbūtne ir daudz zemāka nekā nierēs (papildu attēls S1 un S2). Attiecībā uz plaušām mēs ieguvām augstu ACE2 gēna ekspresijas mainīgumu starp indivīdiem (1. att.), ko daļēji varētu izskaidrot ar to, ka ACE2 ekspresija plaušās ir ļoti zema un aprobežojas ar 2. tipa pneimocītiem (Ziegler et al, 2020). Mēs ieguvām pārliecinošus rezultātus, kad ACE2 tika novērtēts ar enzīmu aktivitātes mērījumiem. Plaušu ACE2 aktivitāte bija līdzīga starp kontroles db/m un diabēta db/db, un atšķirības netika novērotas db/db, kas tika ārstēts ar ramiprilu, salīdzinot ar nesēju db/db (Fgs.IE un 2B). Lai gan ACE2 plaušās nav plaši pētīta dzīvnieku modeļos, ir ziņots, ka NOD pelēm un to metiena biedriem, kuriem nav cukura diabēta, ir līdzīga ACE2 aktivitāte plaušās (Roca-Ho et al.2017). Pretēji tam, streptozotocīna un augsta tauku satura diētas izraisītām diabēta pelēm bija paaugstināta plaušu ACE2 aktivitāte, salīdzinot ar pelēm, kurām nav cukura diabēta (Batchu et al., 2020). Attiecībā uz RAAS blokādes ietekmi uz plaušu ACE2, mūsu rezultāti atbilst Wysockiet al un Batchu et al ziņojumiem. jo viņi nekonstatēja atšķirības, tostarp ACE2 aktivitāti, kad peles tika ārstētas ar ARB vai ACEi (Batchu et al.2020; Wysocldi et al. 2020). Pētījumā ar cilvēkiem 1051 pacientam atklājās, ka plaušu ACE2 gēna ekspresija tika samazināta ilgstoša ACEi ārstēšana, lai gan ARB to nemainīja (Milne et al, 2020), lai gan nebija pieejami dati par ACE2 proteīna līmeni vai aktivitāti.
Sirds ACE2 gēna ekspresija un aktivitāte bija ievērojami samazināta db/db mikrofonā, salīdzinot ar db/m (attiecīgi 1. un F att.). Šajā gadījumā ārstēšana ar ramiprilu palielināja ACE2 aktivitāti (1. F. att. ka db/db modelī diabētiskais profils veicina sirds ACE2 samazināšanos, kas tiek atjaunota RAAS blokādes laikā. db/db diabēta pelēm sirds ACE2 samazināšanās, šķiet, notiek laika gaitā, kā to dara jaunāki dzīvnieki (8 nedēļas veci). neuzrāda samazinātu ACE2 aktivitāti sirdī (Ye et al, 2004). Sirds ACE2 ir samazinājies arī streptozotocīna izraisītām diabēta žurkām (Qiao et al, 2015; Shin e al. 2017), lai gan citos diabētiskās peles modeļos ir paaugstināts sirds ACE2 līmenis salīdzinot ar viņu metiena biedriem, kuriem nav cukura diabēta (Patel et al, 2012; Roca-Ho et al., 2017). Tomēr in vitro eksperimenti liecina, ka glikoze var tieši pazemināt ACE2 sirds asinsvadu gludās muskulatūras šūnās (Lavrentjevs un Maliks). , 2009). ACE2 modulācija sirdī, kā arī RAAS bloka ietekme kade ir galvenokārt pētīts miokarda infarkta (MI) gadījumā gan žurku modeļos, gan cilvēkiem. MI žurku modelī Ocaranza un līdzstrādnieki parādīja, ka sirds ACE2 aktivitāte ir samazināta MI un RAAS blokādes gadījumā.
ar enalaprilu to mainīja (Ocaranz et al, 2006), līdzīgi kā tas notiek mūsu pētījumā. Tomēr citos pētījumos, kas veikti līdzīgos MI žurku modeļos, nav izdarīti tādi paši secinājumi (Burrell et al. 2005; Ishiyama et al, 2004). Šķiet, ka cilvēkiem pēc MI ir paaugstināts ACE2 līmenis sirdī (Burrell et al, 2005). un idiopātiskas un išēmiskas kardiomiopātijas gadījumā (Goulter et al, 2004). Cik mums zināms, RAAS blokādes ietekme uz sirds ACE2 ekspresiju cilvēkiem nav pētīta. Visbeidzot, mēs analizējām ACE2 aktivitāti serumā. ACE2 var atrast gan audu šūnu šūnu membrānās, gan šķīstošs (sACE2); kas rodas no membrānas saistītā ACE2 izdalīšanās ar ADAM metalopeptidāzes domēnu 17 (ADAM17) (Lambert et al, 2005). ACE2 darbojas tikai kā SARS-CoV-2 receptors orgānu līmenī, taču tiek uzskatīts, ka sACE2 varētu samazināt vīrusa inficēšanās spēju, darbojoties kā māneklis (Balle et al, 2020; Monteil et al, 2020; Wysocl et al, 2021), lai gan zemais sACE2 līmenis asinīs diez vai radītu šo labvēlīgo efektu. Tomēr ir interesanti uzzināt, vai ACE2 līmenis serumā tiek modulēts (vai nē) cukura diabēta gadījumā, vai arī RAAS blokatori var būt signāls par audu ACE2 izmaiņām. konkurē par ACE2 šķelšanos ar serīna proteāzes transmembrānu serīna proteāzi 2 (TMPRSS2), kas ir SARS-CoV-2 internalizācijas pamatproteāze (Palau et al.2020). Mēs atklājām, ka ACE2 līmenis serumā ir palielināts db/db. salīdzinot ar db/m, un ramiprils šo efektu neatgrieza (Fg,.3). Citos pētījumos ir aprakstīts arī ACE2 līmeņa paaugstināšanās asinīs diabēta peļu modeļos (Riera et al.2016; Roca-Hoet al, 2017;
Wysocki et al., 2013) un 1. tipa cukura diabēta pacientiem (Soro-Paavonen et al. 2012), lai gan RAAS blokādes ietekme nav plaši pētīta. Šajā sakarā pierādījumi cilvēkiem nav viendabīgi. Pētījumā par Soro-Paavonenu un kols. (Soro-Paavonen et al, 2012), ACEi terapija paaugstināja ACE2 līmeni asinīs gan vīriešiem, gan sievietēm, un ARB terapija tikai sievietēm. Turpretim nesenā preprintā tika novērots neliels ACE2 samazinājums asinīs, ārstējot ARB, bet ACEi neizraisīja izmaiņas (Emilsson et al, 2020).
CISTANČE UZLABOS NIERU/NIERES SĀPES
Sakarā ar iepriekšminētajām atšķirībām attiecībā uz ACE2 modulāciju starp dažādiem diabēta dzīvnieku modeļiem un cilvēkiem, ir grūti iegūt galīgu atbildi uz jautājumu: "Vai RAAS blokāde izraisa ACE2 pārmērīgu ekspresiju?". Vispārējā pārskatā, ņemot vērā mūsu datus un citu autoru pierādījumus, rodas iespaids, ka diabēta konteksts vairumā gadījumu maina ACE2 ekspresiju gan nierēs, gan sirdī (pazemina vai paaugstina, atkarībā no modeļa vai sugas). ) un ka RAAS blokāde: (1) samazina vai nemaina nieru ACE2 (gan eksperimentālos modeļos, gan necilvēcīgos), (2) nemaina plaušu ACE2 (lai gan šeit ir vajadzīgi vairāk pierādījumu), (3) veicina ACE2 ekspresiju sirdij (lielākajā daļā eksperimentālo modeļu) un (4) ir mainīga ietekme uz ACE2 līmeni asinīs (atkarībā no kohortas un RAAS blokatora veida). Tādējādi izvirzītais priekšnoteikums "RAAS blokāde izraisa ACE2 pārmērīgu ekspresiju un līdz ar to palielina SARS-CoV-2 infekcijas risku" neatbilst sirdij, nierēm un, vēl svarīgāk, ne plaušām. . Lai gan šis pieņēmums ir strīdīgs jautājums, jo tas sniedz tikai vienkāršotu redzējumu par ACE2 ekspresijas regulēšanu un neņem vērā, ka ACE2 ir aizsargājošs vairumā kontekstu (Batlle et al, 2012; Oudit et al, 2010; Zhong et al. , 2010). Ir pierādīts, ka ACE2 ir labvēlīga H7N9 gripas vīrusa (Yang et al, 2015) vai LPS (Ye un Liu, 2020) izraisītu plaušu bojājumu eksperimentālos modeļos. Peļu modelī ar plaušu traumu, SARS. -CoV infekcija samazināja plaušu ACE2 ekspresiju, bet ārstēšana ar losartānu uzlaboja plaušu bojājumus un vienlaikus palielinājās ACE2 ekspresija (Kuba et al, 2005), kas liecina, ka ACE2 bija labvēlīgs vīrusu infekcijas atrisināšanai. Turklāt iekaisuma konteksts, piemēram, citokīnu vētra, kas notiek corvid-19 pacientu apakškopā (Mehta et al, 2020), arī var regulēt ACE2 ekspresiju, lai gan nav skaidrs, kādā virzienā (de Lang et al., 2006). ; Wet al.2020). Jebkurā gadījumā gan ACE2 regulēšana, gan pazemināšana varētu būt kaitīga SARS-CoV-2 infekcijas laikā, kas liecina, ka ACE2 līmenim jābūt līdzsvara diapazonā (South et al.2020).
Visbeidzot, šeit mēs demonstrējam diabēta peļu modelī, ka AKE inhibīcija rada tikai ACE2 regulēšanu diabēta sirdī, kur ACE2 ir samazināts sekundāri diabēta dēļ. Tas nenotiek nierēs vai plaušās, pastiprinot domu, ka lielākajā daļā audu RAAS blokāde nepalielina ACE2 ekspresijas līmeni. Pat pēc rezultātiem, ko ieguvām sirdī, var apspriest, vai ārstēšana ar ARB vai ACEi rada reālu COVID-19 infekcijas palielināšanās risku un pasliktina tās prognozi. RAAS blokādei ir nepārprotami kardiovaskulāri ieguvumi (Fegan et al, 2000; Romero et al, 2015), taču maz ticams, ka zems ACE2 līmenis ir labvēlīgs COVID-19 izšķirtspējai.
