Cistanche Deserticola ekstrakti var antagonizēt imunosescenci un pagarināt dzīves ilgumu pelēm ar paātrinātu novecošanos 8 (SAM-P8)

Lūdzu sazinietiesoscar.xiao@wecistanche.comlai iegūtu vairāk informācijas

Novecošanās paātrinātie peles 8 apakšcelmi (SAM-P8), kas plaši pieņemti kā dzīvnieku modelis novecošanās un pretnovecošanās zāļu pētīšanai, tika izmantoti, lai pārbaudītu uztura bagātinātāju ietekmi ar Cistanche deserticola (ECD) ekstraktiem, kas ir plaši izmantoti tradicionālā ķīniešu medicīna, jo tā spēj veicināt imūno funkciju gados vecākiem cilvēkiem. Astoņus mēnešus vecus SAM-P8 peļu tēviņus 4 nedēļas ārstēja ar ECD, katru dienu lietojot perorāli. Rezultāti parādīja, ka uztura bagātinātājs 150 mg/kg un 450 mg/kg ECD var pagarināt dzīves ilgumu, ko mēra ar Kaplan-Meier izdzīvošanas analīzi atkarībā no devas. Tika pierādīts, ka SAM-P8 peļu uztura papildināšana 4 nedēļas ar 100 500 un 2500 mg/kg ECD izraisīja ievērojamu gan naivo T, gan dabisko killer šūnu skaita pieaugumu asins un liesas šūnu populācijās. Turpretim pelēm, kas katru dienu uzņēma 100 un 500 mg/kg ECD, perifērās atmiņas T šūnas un proinflammatoriskais citokīns IL-6 serumā bija ievērojami samazināts. Turklāt Sca-1 pozitīvās šūnas, atpazītās priekštečiperifērijas naivsT šūnas tika atjaunotas paralēli. Mūsu rezultāti sniedz skaidru eksperimentālu atbalstu ilgstošiem klīniskiem novērojumiem, kas to parādaCistanchedeserticola ir nozīmīga ietekme uz dzīves ilguma pagarināšanu, un tas liecina, ka tas tiek panākts ar antagonizācijuimūnsenescence.

Lūdzu, noklikšķiniet šeit, lai uzzinātu vairāk

1. Ievads

Cistanchedeserticola, kas ir viens no populārākajiem tradicionālajiem ķīniešu augu izcelsmes medikamentiem/veselības produktiem, vairākās vēsturiskās ķīniešu augu farmakopejās ir aprakstīts kā tam piemīt pretnovecošanas īpašības. Līdz ar to Ķīnā to plaši izmanto, lai ārstētu dažādus ar vecumu saistītus traucējumus, tostarp senilu demenci, impotenci, neauglību, hroniskas infekcijas un asinsrades traucējumus gados vecākiem cilvēkiem [1]. Mūsdienu ķīmiskās pieejas ir ļāvušas izdalīt divus galvenos savienojumu veidus, feniletanoīdu glikozīdus un oligosaharīdus, kā galvenās Cistanche deserticola aktīvās sastāvdaļas [1]. Pēdējā desmitgadē Cistanche deserticola un tās ekstrakti ir intensīvi pētīti un pierādīts, ka tie spēj aizsargāt neironus no neirotoksīnu izraisītiem ievainojumiem [2], inhibējot oglekļa tetrahlorīda izraisītus.hepatotoksicitāte[2] un veicināt kaulu smadzeņu šūnu atjaunošanos no Co60 izraisītiem starojuma bojājumiem [3]. Ir pierādīts, ka tam ir arī pretiekaisuma, antioksidanta un pretnovecošanās iedarbība [4]. Tomēr nav stingri pārbaudīts, vai Cistanche deserticola var palielināt dzīves ilgumu un kādi ir pamatā esošie molekulārie mehānismi [3], kas saistīti ar tās pretnovecošanās īpašībām.

Imunosenescence, tas ir, imūnsistēmas izmaiņas ar vecumu, veido fonu, uz kura tiek novērota paaugstināta uzņēmība pret infekcijām, vēzi, neirodeģeneratīvām slimībām un autoimūnām slimībām gados vecākiem cilvēkiem [5]. Ir ziņots, ka terapeitiskās iejaukšanās, piemēram, kaloriju ierobežošana [6] un E vitamīna papildināšana, ir efektīvas, lai aizkavētu imunitātes progresēšanu un tādējādi samazinātu dažu ar vecumu saistītu slimību saslimstību, kā arī pagarinātu gan cilvēku, gan grauzēju dzīves ilgumu. [7, 8]. Tomēr pētījumus šajā jomā sarežģī fakts, ka novecošana ir saistīta ar vienlaicīgu imūndeficīta un hroniska iekaisuma paradoksu [9]. Tas nozīmē, ka vienkārša limfocītu proliferācijas vai pretiekaisuma stimulēšana nav ideāla terapeitiska iejaukšanās, lai risinātu novecošanas un ar vecumu saistītus apstākļus [10]. Līdz ar to, meklējot medicīnisku iejaukšanos, kas spēj novērst vai atvieglot ar vecumu saistītus stāvokļus, tostarp infekcijas, vēzi, autoimūnas slimības, aterosklerozi un neirodeģeneratīvas slimības, kas ir galvenie nāves un invaliditātes cēloņi, un imūnsistēmas defektu novēršanu, ir jāpavada iekaisuma reakcijas. Novecošanās paātrinātā pele [11] ir inbred peles modelis, kas iegūts no AKR/J celma un ko plaši izmanto novecošanas pētījumos. Šo peļu P8 apakšcelmam (SAM-P8) ir ievērojami saīsināts dzīves ilgums, salīdzinot ar R1 apakšcelmu (SAM-R1), kas arī parāda lēnāku novecošanās procesu [12]. Paralēli priekšlaicīgai novecošanai SAM-P8 pelēm ir arī paaugstināta neiroloģiskā novecošanās, imūnnovecošanās un ar vecumu saistītahematopoētisksdeficīti, kas ļoti līdzinās tipiskām cilvēka novecošanās īpašībām [13, 14]. Pamatmehānismu analīze, kas ir atbildīgi par paātrinātu novecošanās procesu un ar vecumu saistītiem traucējumiem, liecina, ka ir iesaistīti mitohondriju disfunkcija [15], oksidatīvais stress un palielināts somatiskās DNS mutāciju ātrums [16, 17]. Tāpēc šī peļu sistēma ar tās viendabīgo ģenētisko fonu nodrošina lielisku eksperimentālu modeli novecošanās un pretnovecošanās terapijas pētīšanai [12]. Šajā pētījumā galvenā uzmanība tika pievērsta tam, lai izpētītu, vai Cistanche deserticola ekstrakti spēj pagarināt SAM-P8 peļu dzīves ilgumu un mainīt to imūnsenescences statusu.

Cistanche var uzlabot imunitāti un novērst nogurumu

2. Materiāli un metodes
2.1. Materiāli. Svaiga Cistanche deserticola YC MA tika savākta no dažādiem apgabaliem Ķīnas ziemeļrietumos, tostarp Xinjiang, Neimenggu un Ningxia autonomajos reģionos. Ekstraktu pagatavošanai izmantotos paraugus autentificēja profesors Pengfei Tu, Pekinas Universitātes Farmācijas zinātņu skolas Dabisko zāļu katedras farmakognozijas speciālists. Izmantotais Cistanche deserticola (numurs CD{2}}) kupona paraugs tika glabāts Ķīnas Pekinas Universitātes Farmācijas zinātņu skolas herbārijā. 2.2. Cistanche deserticola (ECD) ekstraktu sagatavošana un HPLC analīze. Gaisā žāvēta un sagriezta Cistanche deserticola (20 kg) tika saberzta pulverī un divas reizes ekstrahēta ar 70 procentu etanolu 1 stundu. Izmantotā augu/etanola attiecība bija 1/6 (w/w) pirmajā ekstrakcijā un 1/4 (w/w) otrajā. Abus ekstraktus apvienoja un filtrēja, pirms tie tika koncentrēti līdz relatīvajam blīvumam 1,10–1,15 pazeminātā spiedienā 60∘ C temperatūrā. Pēc tam šo koncentrātu žāvēja vakuumā, un iegūtais pulveris bija ekstrakts. Cistanche deserticola (ECD), ko izmantoja visā šajā pētījumā. ECD komponenti tika analizēti, izmantojot HPLC, kā aprakstīts iepriekš [1]. Īsumā, 100 mg ECD pulvera tika izšķīdināts 10,0 ml H2O un pēc filtrēšanas ievadīts HPLC. HPLC analīze tika veikta ar Agilent 1100 šķidruma hromatogrāfijas sistēmu (Agilent Co., ASV). Kustīgā fāze sastāvēja no metanola (A) un 0,10% metanola skābes (B) maisījuma. Tika izmantota gradienta hromatogrāfijas programma; tas bija 26,5 procenti (A) un 73,5 procenti (B) 0–7 minūtēs, 26,5–29,5 procenti (A) un 73,5–70,5 (B) 8–10 minūtēs un 29,5 procenti (A) un 70,5 procenti (B) ) 20–27 minūšu laikā. Plūsmas ātrums tika uzturēts nemainīgs pie 1,0 ml/min, injekcijas tilpums bija 10 ml, un kolonnas temperatūra tika uzturēta 25°C. Lai uzraudzītu kolonnas aizplūšanu un ģenerētu hromatogrammas, tika izmantots UV detektors, kas iestatīts uz 330 nm. Feniletanoīdu glikozīdi un oligosaharīdi tika identificēti pēc to aiztures laikiem un absorbcijas spektriem. Kvantitatīvā noteikšana tika veikta ar ārējām standarta kalibrēšanas līknēm. Cistanche deserticola (ECD) ekstraktu iznākums bija aptuveni 3,33 procenti, un feniletanoīdu saturs bija 17,94 procenti. Akteozīds un ehinakozīds bija divas galvenās šīs frakcijas sastāvdaļas, un to saturs bija attiecīgi 3,80 procenti un 8,25 procenti. Oligosaharīdi veido 82 procentus no kopējā ECD. ECD galveno aktīvo komponentu koncentrācijas parādītas 1. tabulā. 2.3. Dzīvnieku dzīves ilguma analīze. Pekinas SAM-P8 un kontroles SAM-R1 peles tika iegādātas no Pekinas Universitātes Veselības zinātnes centra (Pekina, Ķīna) Laboratorijas dzīvnieku audzēšanas un pētniecības centra. Šo pētījumu apstiprināja Pekinas Universitātes Dzīvnieku pētniecības komiteja, un tas tika veikts saskaņā ar Pekinas universitātes laboratorijas dzīvnieku kopšanas un lietošanas vadlīnijām. Šo peļu sertifikācijas numurs bija SCXK{70}}. Peles tika turētas standarta vielmaiņas būros videi kontrolētos apstākļos (22 ± 2∘ C, 45–60 procentu mitrums un 12 stundu gaismas/tumsas cikls), un tām tika nodrošināta brīva piekļuve pārtikai un ūdenim. Pēc 2 nedēļu aklimatizācijas dzīvnieki tika sadalīti piecās grupās: 3 ECD ārstēšanas grupas, SAM-R1 kontroles grupa un SAM-P8 kontroles grupa bez ārstēšanas. 3 ārstēšanas grupu diēta tika papildināta ar diētu, kas sajaukta ar

dažādas ECD koncentrācijas: zemas (50 mg/kg), vidējas (150 mg/kg) un augstas (450 mg/kg) ECD devas katru dienu. SAM-R1 un SAM-P8 nevienas ārstēšanas kontroles grupas tika barotas ar tādu pašu diētu bez ECD. Visu dzīvnieku barības uzņemšanas mērījumi tika veikti ik pēc trim dienām visā eksperimenta laikā. Eksperimenta laikā ik pēc trim mēnešiem neinvazīvi tika veikta asinsspiediena un sirdsdarbības kontrole, lai noteiktu peļu veselības stāvokli. Katras peles dzīves ilgums tika reģistrēts līdz visu dzīvnieku nāvei. 2.4. Naivo T šūnu, atmiņas T šūnu, NK šūnu un Sca{9}} pozitīvo šūnu analīze perifēro asiņu un liesas šūnu populācijās, izmantojot plūsmas citometriju. Astoņus mēnešus vecas SAM-P8 peles un kontroles SAM-R1 peles tika sadalītas 5 grupās: 3 SAM-P8 peļu ECD ārstēšanas grupas, SAM-P8 bez ārstēšanas kontroles grupā un SAM-R1 kontroles grupā. Trīs ārstēšanas grupu diēta tika papildināta ar ECD ikdienas barošanu ar devām 100 mg/kg, 500 mg/kg vai 2500 mg/kg. Pēc 4 nedēļu ilgas ārstēšanas dzīvnieki tika piesprādzēti 12 stundas un pēc tam anestēzē ar pentobarbitāla nātrija šķīdumu (50 mg/kg, peritoneāla injekcija, ip), un asinis savāca un apstrādāja ar antikoagulantu nātrija citrātu (2 mg/ml). ). Asins limfocīti tika savākti un analizēti. Pēc tam peles tika noslaucītas ar 75% spirtu, un vēdera dobumi tika atvērti īpaši tīrā skapī (velkmes pārsegā). Liesas tika mazgātas ar PBS; pēc tam samaļ un filtrē ar šūnu sietiņu (70 µm). Iegūtā liesas šūnu suspensija tika mazgāta un atkārtoti suspendēta PRMI 1640 barotnē koncentrācijā 2 × 106 /mL. Katras peles liesas šūnas tika sadalītas 6 mēģenēs plūsmas citometrijas analīzei. Liesas šūnu suspensijas galīgā koncentrācija katrā mēģenē bija 2 × 105/100 µL. Perifēro asiņu limfocīti un liesas limfocīti tika atsevišķi inkubēti ar FITC-CD4, PerceCD3, Perce-CD8a, PC-CD28, PE-CD44, FITC-CD45RB, PE CD49b/rozā un FITC-ly-6A/E ( Sca-1) (visas iegādātas no BD Biosciences, Sandjego, Kalifornija, ASV) monoklonālās antivielas istabas temperatūrā 30 minūtes. Lizēšanas šķīdums, kas ir īpaši paredzēts sarkano asins šūnu lizēšanai, vienlaikus saglabājot leikocītu saglabāšanu, tādējādi novēršot traucējošās šūnas plūsmas citometriskajai analīzei, tika inkubēts ar asinīm tumsā istabas temperatūrā 5 minūtes. Pēc centrifugēšanas pie 500 x g 5 minūtes, supernatants tika dekantēts. Pēc tam granulētās šūnas 3 reizes nomazgāja ar PBS, atkārtoti suspendēja ledus aukstā fosfātu buferšķīdumā (PBS, pH 7,4), kas satur 0,01 procentu nātrija azīda, un pakļāva FCM. analīze. Limfocītu apakšpopulācijas tika analizētas ar plūsmas citometriju, izmantojot FACS Calibur plūsmas citometru (BD Biosciences, Sandjego, CA, ASV) un BD CellQuest analīzes programmatūru. 2.5. Perifēro T limfocītu šūnu dzīvotspējas novērtējums ar aneksīna V-FITC un PI dubulto krāsošanu un FACS analīzi. Pēc SAM P8 peļu uztura papildināšanas ar trim ECD devām 4 nedēļas dzīvnieki tika piestiprināti 12 stundas un pēc tam anestēzēti, un asinis tika savāktas un analizētas. Dzīvotspējīgie apoptotiskie un nekrotiskie limfocīti tika kvantificēti, izmantojot Annexin V-FITC komplektu (Beijing Biosea Biotechnology Co., Ltd., Pekina, Ķīna). Limfocīti tika pakļauti dubultai krāsošanai ar fluoresceīna izotiocianāta konjugētu marķētu aneksīnu V (Aneksīns V-FITC) un propīdija jodīdu (PI). Īsumā, limfocītu suspensijas, kas satur aptuveni 106 šūnas/ml, divas reizes nomazgāja ar PBS un suspendēja 200 µL saistīšanas buferšķīdumā (10 mM HEPES/NaOH, pH 7,4, 140 mM NaCl, 2,5 mM CaCl2) un 10 pielikuma V-TCL. tika pievienots šūnu suspensijai. Pēc 15 minūšu inkubācijas tumsā istabas temperatūrā tika pievienoti vēl 300 𝜇L saistīšanas buferšķīduma un 5 𝜇L PI. Tūlīt pēc papildu 5 minūšu inkubācijas tumsā divkārši iekrāsotu limfocītu paraugi tika analizēti, izmantojot plūsmas citometru FACS Calibur (BD Biosciences, Sandjego, CA, ASV). 2.6. Plazmas citokīnu noteikšana ar citometrisko lodīšu masīvu (CBA) imūntestu. Citokīnu līmenis plazmā tika kvantificēts, izmantojot citometrisko lodīšu masīva (CBA) testu komplektu (BD Biosciences, Sandjego, Kalifornija, ASV), kas spēj vienlaicīgi noteikt IFN-𝛾, TNF-𝛼, IL-6, IL{96. }}, IL-10, GM-CSF un IL-3 vienā paraugā. Tāpēc šis multipleksais imūntests ļāva noteikt imūnstimulējošos citokīnus (IL{101}}), proinflammatoriskos citokīnus (IFN-𝛾, TNF-𝛼 un IL-6), iekaisumu inhibējošos citokīnus (IL{105). }}), un hematopoētiskie citokīni (IL{106}} un GM-CSF). Īsumā, 50 𝜇L plazmas tika sajauktas ar 50 𝜇L PE konjugētu citokīnu uztveršanas lodītēm, kas bija pārklātas ar uztveršanas antivielām, kas specifiskas IFN-𝛾, TNF-𝛼, IL-6, IL-2, IL. -10, GM-CSF un IL-3 olbaltumvielas. Pēc 2 stundu inkubācijas istabas temperatūrā paraugus mazgā ar ledus aukstu fosfātu buferšķīdumā (PBS, pH 7,4), kas satur 0,01% nātrija azīda, pēc tam fiksēja 0,5 ml 1% paraformaldehīda PBS un turēja 4 °C temperatūrā. tumsā līdz analīzei un pēc tam analizēja ar FACS Calibur plūsmas citometru (BD Biosciences, Sandjego, CA, ASV). 2.7. Statistiskā analīze. Dati ir parādīti kā vidējās vērtības ± SD. Dažādu grupu salīdzinājumi tika veikti ar vienvirziena ANOVA ar post hoc testu. Dzīves ilguma pētījumā datiem tika veikta Kaplan-Meier izdzīvošanas analīze, kas ietvēra gan Log-rank (Mantel-Cox), gan Gehan-Breslow Wilcoxon testu izmantošanu. Statistiskā analīze tika veikta, izmantojot Windows sociālo zinātņu statistikas pakotni (SPSS, Chicago, IL), un 𝑃 vērtība, kas mazāka par 0,05, tika uzskatīta par nozīmīgu.

3. Rezultāti
3.1. Potenciālo aktīvo komponentu analīze Cistanche deserticola (ECD) ekstraktos. Kā parādīts 1. tabulā, ECD sastāv galvenokārt no divu veidu savienojumiem, feniletanoīdu glikozīdiem un oligosaharīdiem. Feniletanoīdu glikozīdos ir identificēts ehinakozīds, acetonīds un 8-epilogānskābe, savukārt oligosaharīdos tika identificēts tikai galaktitols.

1. attēls: Cistanche deserticola (ECD) ekstraktu ietekme uz SAM-P8 peļu dzīves ilgumu. Astoņus mēnešus veci peles tēviņi ar paātrinātu novecošanos 8 (SAM-P8) peles tika nejauši sadalītas 4 grupās (katrā grupā, 𝑛 {{10}}): 3 ārstēšanas grupas un nē. -ārstēšanas kontroles grupa. Peļu bezjēdzīgais apakšcelms (SAM-R1) tika izmantots kā eksperimentāla kontrole. Eksperimenta laikā ar 3-dienu intervāliem tika uzraudzīta visu dzīvnieku uzņemtā barība. Trīs ārstēšanas grupas tika ad libitum barotas ar diētām, kas papildinātas ar zemām (50 mg/kg), vidējām (150 mg/kg) un lielām (450 mg/kg) Cistanche deserticola devām. ekstrakts (ECD). Abas kontroles dzīvnieku grupas tika barotas ar vienu un to pašu diētu bez ECD papildinājuma. (a) Kaplan-Meier izdzīvošanas līknes SAM-P8 pelēm, kurām bija ECD vai transportlīdzekļa kontrole. Kaplan-Meier izdzīvošanas analīze tika veikta, izmantojot Log-rank (Mantel-Cox) un Gehan-Breslow-Wilcoxon testus. b ) peļu grupu vidējā dzīves ilguma histogramma. Kļūdu joslas parāda, ka standarta novirze no vidējā un statistiskā nozīmīguma tika veikta, izmantojot ANOVA analīzi, kam sekoja post hoc 𝑡 tests. ###𝑃 < 0,001="" sam-p8="" pret="" sam-r1;="" ∗∗𝑃="">< 0,01="" lielas="" devas="" ārstētā="" grupa,="" salīdzinot="" ar="" sam-p8;="" ∗𝑃="">< 0,05="" ar="" vidēju="" devu="" ārstētu="" grupu="" pret="" sam-p8="" (katrā="" grupā,="" 𝑛="">

3.2. Cistanche deserticola ekstraktu ietekme uz SAM-P8 peļu vidējo dzīves ilgumu. Šim un turpmākajiem pētījumiem astoņus mēnešus veci SAM-P8 peles tēviņi tika sadalīti 4 grupās. Tostarp viena peļu grupa tika barota ar parastu uzturu bez ECD, pārējās 3 grupas ir atsevišķi uzņēmušas barību, kas satur dažādas ECD proporcijas. Visos eksperimentos kā kontroles grupa tika izmantotas peles no SAM-R1 apakšcelma, kurām ir normāls novecošanās process un dzīves ilgums. Salīdzinot ar kontroles SAM-R1 grupu, SAM-P8 peļu vidējais dzīves ilgums bija ievērojami saīsināts (1. attēls (a); 𝑃 < 0.001).="" lai="" gan="" diētas="" papildināšana="" ar="" zemu="" ecd="" devu="" (50="" mg/kg)="" nespēja="" būtiski="" palielināt="" sam-p8="" peļu="" dzīves="" ilgumu,="" vidēja="" (150="" mg/kg)="" un="" augsta="" (450="" mg/ml)="" papildterapija.="" devām="" bija="" no="" devas="" atkarīgs="" dzīves="" ilguma="" pieaugums="" (1(a)="" un="" 1(b)="" attēls;="" 𝑃="">< 0,05–0,01),="" ko="" apstiprināja="" kaplan-meier="" izdzīvošanas="" analīze,="" kas="" ietvēra="" gan="" log-rank="" (="" mantel-cox)="" un="" gehan-breslow-wilcoxon="" testi.="" 3.3.="" imunosenescences="" maiņa="" sam-p8="" pelēm,="" izmantojot="" cistanche="" deserticola="" (ecd)="" ekstraktus.="" perifēro="" naivo="" t="" limfocītu="" skaita="" samazināšanās="" un="" vienlaicīga="" perifērās="" atmiņas="" t="" limfocītu="" palielināšanās="" ir="" ievērojamas="" imūnnovecošanās="" pazīmes,="" kas="" tiek="" plaši="" uzskatītas="" par="" galvenajiem="" ar="" vecumu="" saistītu="" imunoloģisko="" anomāliju="" iemesliem.="" šī="" imūnnovecošanās="" sam-p8="" attiecībā="" pret="" sam-r1="" dzīvniekiem="" bija="" skaidri="" redzama,="" kad="" facs="" analīze="" tika="" izmantota,="" lai="" uzskaitītu="" (cd3="" plus="" cd44low="" cd45rbhigh)="" limfocītus="" kā="" naivu="" t="" šūnu="" indikatoru="" un="" (cd3="" plus="" cd44high="" cd45brlow)="" limfocītus="" kā="" atmiņas="" t="" indikatoru.="" šūnas.="" tādējādi="" gan="" perifērajās="" asinīs="" (2.="" attēls),="" gan="" liesas="" šūnās="" (3.="" attēls)="" sam-p8="" pelēm="" tika="" novērots="" samazināts="" naivu="" t="" šūnu="" līmenis="" un="" paaugstināts="" atmiņas="" t="" šūnu="" līmenis.="" tika="" konstatēts,="" ka="" sam-p8="" peļu="" uztura="" papildināšana="" ar="" ecd="" spēj="" mainīt="" šos="" imūnsenescences="" rādītājus="" atkarībā="" no="" devas="" gan="" perifēro="" asiņu="" (2.="" attēls),="" gan="" liesas="" šūnu="" (3.="" attēls)="" populācijās.="" kā="" papildu="" indikators="" imūnnovecošanās="" maiņai,="" papildinot="" diētu="" ar="" ecd,="" tika="" analizēts="" dabisko="" killer="" [18]="" šūnu="" līmenis,="" kas="" ir="" iedzimtas="" imūnsistēmas="" galvenais="" šūnu="" marķieris.="" tas="" parādīja,="" ka="" ecd="" diētas="" papildināšana="" izraisīja="" no="" devas="" atkarīgu="" nk="" (cd3="" plus="" cd49="" plus="" )="" šūnu="" pieaugumu="" gan="" perifēro="" asiņu="" (4.="" attēls),="" gan="" liesas="" šūnu="" (5.="" attēls)="" limfocītu="" populācijās.="" 3.4.="" cistanche="" deserticola="" ekstrakti="" pastiprina="" sca{68}}="" pozitīvo="" šūnu="" relatīvo="" fluorescences="" intensitāti="" sam-p8="" pelēm.="" cilmes="" šūnu="" antigēns-1="" (sca-1)="" ir="" viens="" no="" redzamākajiem="" hematopoētisko="" cilmes="" šūnu="" (hsc)="" biomarķieriem="" kaulu="" smadzeņu="" šūnu="" populācijās.="" sca-1="" pozitīvās="" šūnas="" ir="" arī="" limfocītu="" priekšteči,="" kas="" tikko="" eksportēti="" no="" kaulu="" smadzenēm="" perifērajās="" asinīs,="" kur="" tie="" tiek="">

4. Diskusija

Imūnā aizsardzība pret jauninvazīviem mikroorganismiem vai endogēnām audzēju šūnām ir atkarīga no T šūnu repertuāra daudzveidības, kas savukārt ir atkarīga no naivu T šūnu veidošanās un uzturēšanas [19]. Ir pierādīts, ka novecošanas procesa laikā T-šūnu repertuāra daudzveidība krasi samazinās, jo perifēro rezervju baseinā pakāpeniski samazinās naivas T šūnas. Tiek uzskatīts, ka tieši reaģējošu naivu T šūnu trūkums ir atbildīgs par vecāka gadagājuma cilvēku uzņēmību pret infekcijām, vēzi un sliktiem rezultātiem pēc vakcinācijas [20]. Lai veiksmīgi papildinātu naivās T šūnas un tādējādi pagarinātu dzīves ilgumu un samazinātu infekciju un vēža rašanos gados vecāku cilvēku vidū, ir izmantotas dažādas iejaukšanās, tostarp kaloriju ierobežošana [7], fiziskā slodze [21] un E vitamīna piedevas [8]. Šajā pētījumā mēs parādījām, ka ECD spēj palielināt naivu T šūnu līmeni perifērajā baseinā, un vienlaikus tika pagarināts dzīves ilgums un samazināts audzēju veidošanās biežums pelēm ar paātrinātu novecošanos (ECD terapeitiskā grupa pretstatā). SAM-P8, 0 pret 1/6). Tāpēc šķiet pamatoti secināt, ka ECD spēja mainīt no vecuma atkarīgo perifēro naivo T šūnu samazināšanos var veicināt tā zināmo ietekmi, samazinot ar vecumu saistītu slimību, kas izriet no ilgtermiņa klīniskiem novērojumiem.

5. Materiāli un metodes

5.1. Materiāli. Normālā imūnreakcijā pēc sveša antigēna ierobežošanas un izvadīšanas lielākā daļa kloniski paplašināto T šūnu tiek pakļautas apoptozei, un tikai neliela daļa tiek saglabāta kā atmiņas T šūnas. Līdz ar to imūnkompetentam organismam novecojot, perifērās atmiņas T šūnas uzkrājas, visu mūžu pakļaujot svešiem antigēniem, pārvēršot naivās T šūnas atmiņas šūnās [22, 23]. Vairāki pētījumi liecina, ka limfocītu apoptozes defekti vecākiem dzīvniekiem un cilvēkiem arī veicina atmiņas T šūnu nodalījuma paplašināšanos [24, 25]. Turklāt nesen veikts pētījums parādīja, ka pārmērīgs perifērās atmiņas T šūnu daudzums var kavēt naivu T šūnu homeostātisko proliferāciju [26]. Šie nesenie pētījumi arī liecina, ka atmiņas T šūnas var izdalīt augstu iekaisuma citokīnu līmeni, kas var veicināt pastāvīgus iekaisumus dažādos gados vecāku cilvēku audos. Līdz ar to atmiņas T šūnu līmeņa samazināšanai vajadzētu būt labvēlīgai gan naivu T šūnu homeostatiskajai proliferācijai, gan arī atvieglot pārmērīgu iekaisuma stāvokli, kas novērots vecākiem organismiem. Šajā pētījumā tika pierādīts, ka uztura bagātināšana ar ECD spēj samazināt perifērās atmiņas T šūnu līmeni un palielināt naivu T šūnu līmeni. Turklāt ECD papildināšana palielināja apoptozi perifēro limfocītu populācijās, potenciāli radot vietu jauniem naiviem limfocītiem. Tika kavēta arī perifēro limfocītu nekroze, ko galvenokārt izraisa oksidatīvais stress seniliem dzīvniekiem. Ir plaši pierādījumi, kas liecina, ka organisma novecošanos raksturo ne tikai imūndeficīts, bet arī hroniska iekaisuma palielināšanās [27]. Proinflammatoriskais stāvoklis visspilgtāk izpaužas kā paaugstināts proinflammatorisko citokīnu līmenis, tostarp IL-6, TNF-𝛼 un IL-1𝛽, kopā ar paaugstinātu hronisku iekaisuma slimību biežumu, kas saistītas ar novecošanos, piemēram, Alcheimera slimība, Parkinsona slimība un ateroskleroze. Viens no visievērojamākajiem iekaisuma citokinēzes IL-6 un tā koncentrācija plazmā palielinās līdz ar vecumu un ar vecumu saistītām slimībām [18, 28, 29], un epidemioloģiskie pētījumi liecina, ka IL-6 ir labs ilgmūžības biomarķieris, jo ir cieši saistīts ar mirstību gados vecāku pacientu grupās [30, 31]. Līdz ar to vairākas terapeitiskas iejaukšanās, kas samazina IL-6 koncentrāciju, var atvieglot ar vecumu saistītas slimības [18]. Ņemot to vērā, bija svarīgi, ka šajā pētījumā uztura bagātināšana ar ECD spēja samazināt perifēro IL-6 koncentrāciju, kas nozīmē, ka šī ietekme var veicināt ar vecumu saistītu slimību biežuma samazināšanas pamatā esošos mehānismus. ir iegūti, ilgstoši izmantojot ECD klīniskajā praksē. Līdzās izmaiņām adaptīvajā imūnreakcijā, kas rodas ar vecumu, ir arī būtiskas izmaiņas iedzimtajā imunitātē, organismam novecojot. Tostarp izmaiņas dabiskajās killer [18] šūnās, kas ir pirmā šūnu komponentu līnija, kas nodrošina tiešu audzēja šūnu un vīrusu inficētu šūnu citotoksisku līzi, ir bijušas plašas, jo gados vecākiem cilvēkiem ir paaugstināta jutība gan pret audzēju attīstību, gan vīrusu infekcijām. 32]. Šis pētījums norādīja, ka CD3 plus Ly49 plus NK šūnas senilām SAM P8 pelēm bija ievērojami zemākā līmenī, salīdzinot ar SAM-R1 kontroles dzīvniekiem, kas var būt vēl viens pamatā esošais faktors, kas nosaka vecāka gadagājuma peļu paaugstinātu jutību pret vēzi un vīrusu infekciju. Šajā pētījumā novērotais NK šūnu līmeņa pieaugums pēc uztura papildināšanas ar ECD tāpēc varētu būt labvēlīgs gados vecākiem organismiem, palielinot rezistenci pret audzēju attīstību un vīrusu infekciju. Tomēr ir nepieciešami turpmāki pētījumi, lai noskaidrotu ECD ietekmes lomu uz NK šūnām novecojušos organismos. Noslēgumā jāsaka, ka šis pētījums parādīja, ka novecošanās paātrinātā peles apakšcelma SAM P8 apstrāde ar ECD var izraisīt būtisku ar vecumu saistītu imūnsenescences izmaiņu maiņu. Tika samazināti naivu T šūnu un NK šūnu perifēro un liesas šūnu populāciju trūkumi, kā arī tika samazināts lieko atmiņas T šūnu līmenis. Turklāt uztura bagātināšana ar ECD spēja nomākt gan nekrozes perifērajos limfocītos, gan proinflammatoriskā citokīna IL-6 līmeni. Visbeidzot, papildus izmaiņām senilajā imūnsistēmā, ECD uztura bagātinātājs ievērojami pagarināja senilu SAM-P8 peļu dzīves ilgumu.

Atsauces
[1] Y. Jiang un P.-F. Tu, "Cistanche sugu ķīmisko sastāvdaļu analīze", Journal of Chromatography A, sēj. 1216, Nr. 11, 1970.–1979., 2009. lpp.
[2] Q. Xiong, K. Hase, Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba un S. Kadota, "Hepatoprotective activity of phenylethanoids from Cistanche deserticola", Planta Medica, sēj. 64, Nr. 2, 120.–125. lpp., 1998. gads.
[3] "Imunoloģija un novecošana Eiropā. Proceeding of the 2nd Conference on Basic Biology and Clinical Impact of Immunosenescence. March 22-26, 2001, Cordoba, Spain", Experimental Gerontology, vol. 37, Nr. 2-3, 183.–473. lpp., 2002. gads.
[4] G.-D. Xuan un C.-Q. Liu, "Pētījumi par Cistanche deserticola feniletanoīdu glikozīdu (PEG) ietekmi uz pretnovecošanos vecām pelēm, ko izraisa D-galaktoze", Ķīniešu medicīnas materiālu žurnāls, sēj. 31, Nr. 9, 1385.–1388. lpp., 2008. gads.
[5] D. Aw, AB Silva un DB Palmer, "Immunosenescence: emerging challenges for an aging society", Immunology, vol. 120, Nr. 4, 435.–446. lpp., 2007. gads.
[6] M. Alizadeh, H. Pohla, A. Rehbein un G. Pawelec, "Ilgtermiņa monoklonālo cilvēka T limfocītu kultūra: imūnsenescences modeļi?" Novecošanās un attīstības mehānismi, sēj. 83, Nr. 3, 171.–183. lpp., 1995. gads.
[7] EH Greeley, E. Spitznagel, DF Lawler, RD Kealy un M. Segre, "Modulation of canine immunosenescence by life-long kaloriju ierobežojums", Veterinary Immunology and Immunopathology, sēj. 111, 287.–299. lpp., 2006. gads.
[8] SN Meydani, SN Han un D. Wu, "E vitamīns un imūnreakcija gados vecākiem cilvēkiem: molekulārie mehānismi un klīniskās sekas", Immunological Reviews, vol. 205, 269.–284. lpp., 2005. gads.
[9] SG Deeks, "HIV infekcija, iekaisums, imūnsistēmas novecošanās un novecošanās", Annual Review of Medicine, sēj. 62, 2011. gada 141.–155. lpp.
[10] M. Capri, D. Monti, S. Salvioli et al., "Complexity of anti immunosenescence straties in humans", Artificial Organs, vol. 30, Nr. 10, 730.–742. lpp., 2006. gads.