Mutes un nagu sērgas vakcīnas izstrāde un izaicinājumi ilgstošas ​​imunitātes izveidē: tendences un pašreizējās perspektīvas

Anotācija:

Mutes un nagu sērga (FMD) ir ārkārtīgi lipīga mājlopu vīrusu slimība, ko izraisa pēdu un peļu slimības vīrusa ģints: Aftovīruss, kas rada nopietnu ekonomisku ietekmi gan uz atsevišķiem lauksaimniekiem, gan uz valsts ekonomiku. Daudzi mēģinājumi izstrādāt vakcīnu pret mutes un nagu sērgu nav spējuši izraisīt sterilu imunitāti. Klasiskās vakcīnu ražošanas metodes bija saistītas ar selektīvu mutāciju uzkrāšanos ap antigēnu un saistīšanās vietām. Aģenta reversija ar pozitīvu atlasi un kvazi-sugu baru, šīs metodes izmantošana nav izmantojama neendēmiskajos apgabalos. Ķīmiskā vājināšanās, izmantojot bināro etilēnimīnu (BEI), aizsargāja kapsīda integritāti un radīja izteiktu imunitāti pret izaicinājuma celmu.

Mutes un nagu sērga ir vīrusu slimība, kas ietekmē dzīvnieka imūnsistēmu. Mutes un nagu sērgas vīruss var iebrukt dzīvnieku šūnās, iznīcināt šūnu membrānas un iekšējos orgānus, pasliktināt dzīvnieku imūno funkciju un padarīt to uzņēmīgu pret citu patogēnu infekciju.

Tajā pašā laikā vakcinācija pret mutes un nagu sērgas vakcīnu var uzlabot dzīvnieku imunitāti un padarīt tos imūnus pret vīrusu. Pēc veiksmīgas vakcinācijas dzīvnieks ražos antivielas, un, atkārtoti saskaroties ar mutes un nagu sērgas vīrusu, tas spēs ātri radīt imūnreakciju, efektīvi novēršot vīrusa turpmāku inficēšanos un slimības izraisīšanu. rasties.

Tāpēc dzīvnieku imunitātes uzlabošana, īpaši vakcinējot pret mutes un nagu sērgu, ir svarīgs līdzeklis mutes un nagu sērgas profilaksei. Tajā pašā laikā zinātniska barošanas pārvaldība un sanitārija, kā arī epidēmijas profilakses pasākumi var arī palīdzēt samazināt vīrusa izplatību un mutes un nagu sērgas izplatību. No šī viedokļa mums ir jāpārdomā, vai cilvēka organismam jāpievērš uzmanība imunitātes uzlabošanai. Cistanche var ievērojami uzlabot cilvēka imunitāti. Cistanche piemīt arī pretvīrusu un pretvēža iedarbība, kas var stiprināt imūnsistēmas spēju cīnīties un uzlabot organisma imunitāti.

Click cistanche tubulosa priekšrocības

Dzīvnieku vakcinācijā tika izmēģināti vīrusu antigēni, kas ir ķīmiski sintezēti vai ekspresēti vīrusos, plazmīdos vai augos. Ir izmēģinātas DNS vakcīnas, kas ekspresē strukturālus vai nestrukturālus proteīna antigēnus, lai imunizētu dzīvniekus. Interleikīnu kā DNS vakcīnu ģenētiskā adjuvanta izmantošanai ir daudzsološs efekts. Lai gan sterilas imunitātes ierosināšanas izaicinājumi ir saistīti ar FMDV nestrukturālajiem (NS) proteīniem, kas ir atbildīgi par dendritisko šūnu apoptozi un negatīvi ietekmē limfoproliferatīvās reakcijas, kas izraisa pārejošu imūnsupresiju. Turklāt saimniekproteīnu tirdzniecības iznīcināšana ar nestrukturāliem proteīniem nomāca CD8 un T-šūnu proliferāciju. Šajā pārskatā tika mēģināts aplūkot vairākas pieejas vakcīnu izstrādes izmēģinājumiem un sterilas imunitātes radīšanas vājās vietas.

Atslēgvārdi:

Mutes un nagu sērgas vakcīna, ilgstoša imunitāte, sterila imunitāte.

Fons

Mutes un nagu sērga (FMD) ir ārkārtīgi lipīga mājlopu vīrusu infekcija, ko izraisa Mutes un peļu slimības vīruss, ģints: Aphthovirus un Picornaviridae ģimene; kas rada nopietnus ekonomiskus zaudējumus.1,2 Mājas un savvaļas nagaiņus ļoti ietekmē mutes un nagu sērga.3–5 5S protomērus spontāni ražo atsevišķi nobrieduši proteīni; VP1, VP3 un VP0, no kuriem pieci tiek apvienoti 12S pentamerā. Lai gan 75S vīrusa kapsīds veidojas, savienojoties 12 pentamēriem,6,7 ir ziņots, ka pilnīgam mutes un nagu sērgas vīrusa (FMDV) 146S antigēnam ir ļoti līdzīga antigēna specifika kā vīrusa kapsīdam.8,9 -Mutes slimības vīrusam ir plašs saimnieku diapazons, augsts ģenētisko variāciju līmenis un lielas antigēnu atšķirības, un tam ir septiņi serotipi (A, O, C, Asia1, SAT1, SAT2 un SAT3) un vairāk nekā 100 serotipi.10 Kvazi-sugu spieta dēļ katru gadu parādās arī daudzi jauni varianti. Septiņu serotipu izraisītas krusteniskās imunitātes nav. Pastāv arī tikai daļēja krusteniskā imunitāte starp dažādiem viena serotipa apakštipiem.11 FMDV mainīgums un polimorfisms ir ļoti apgrūtinājuši FMD profilaksi un kontroli.10 Adenovīrusa rekombinantā FMDV, kas ekspresē dažādu serotipu P12A un 3C proteīnus, ir parādīts aizsargājošs efekts.12–14

Klasiskajām inaktivētajām vakcīnām ir daudz trūkumu, tostarp termiskā nestabilitāte, īslaicīga imunitāte, augstas izmaksas, rekombinācijas risks ar savvaļas celmiem un patogenitātes reversija.11,15,16

Neraugoties uz 90 gadu pētījumiem, nav efektīvas vakcīnas, kas radītu sterilu un stabilu imunitāti pret mutes un nagu sērgu, taču slimība joprojām ir enzootiska lielās pasaules daļās. Daudzi mēģinājumi izstrādāt vakcīnu pret mutes un nagu sērgu nav spējuši izraisīt sterilu imunitāti ar nelielu krustenisko serotipu aizsardzību un nepietiekamu imunitātes ilgumu.17 Klasiskās vakcīnas ražošanas metodes, piemēram, vīrusa sērijveida pasāža uz šūnu kultūru18 neatļautā veidā. dzīvnieki, un tā dabiskais saimnieks spēja novājināt vīrusu. Tas ir saistīts ar selektīvu mutāciju uzkrāšanos ap antigēnu un saistīšanās vietām.19–21 Tomēr ierosinātāja reversijas izmantošana ar pozitīvas selekcijas un kvazi-sugas spieta metodi nav piemērojama lietošanai neendēmiskos apgabalos.22 DNS un proteīnu tehnoloģijas ir uzlabojušas pētījumus, modificējot integrīna receptorus23, izmantojot sintētiskos peptīdus, kas var izraisīt dzīvnieka izteiktu imūnreakciju.24 T-palīgu šūnu epitopi, kas ir raksturīgi G-H cilpas reģionam, ir spēcīgi B-šūnu epitopi, kas izraisīt humorālo imunitāti.25 Rekombinantā interferona (IFN ) un liellopu interleikīna 18 (IL-18) kā adjuvanta izmantošana ir uzlabojusi ilgtermiņa imunitāti laboratorijas dzīvniekiem.26,27

Nesen rekombinantās dzīvu vektoru DNS vakcīnas ir spēcīgi citotoksisku T limfocītu (CTL) induktori28,29 Lai šo efektu izteiktu mutes un nagu sērgas gadījumā, ir nepieciešams atbilstošs adjuvants.30 Lai pārvarētu šo efektu, saimnieka Ig virsģimenes un mutes un nagu sērgas epitopa rekombinācija ir uzlabojusi humorālo stāvokli. un dzīvnieka šūnu imūnreakcija.

Sašaurinājuma problēmu sterilas un ilgstošas ​​imunitātes izraisīšanā kavē saimniekproteīnu tirdzniecības iznīcināšana, ko veic nestrukturālie (NS) proteīni, īpaši 3A, tāpēc tas neizraisa klasteru diferenciācijas 8 pozitīvu (CD8 plus ) T-šūnu reakciju, ko izraisa vājš CTL un vīruss saglabājas dzīvniekā.31 Integrīna receptori, kas izraisīja kaulu smadzenēs iegūto dendritisko šūnu (DC) apoptozi, kavēja saimniekorganisma iedzimto imunitāti.32 Guzmans et al33 un Joshi et al34 analizēja CTL nogalināšanas surogātreakcijas, piemēram, proliferāciju. vai IFN ražošanu CD8 ekspresējošās šūnās, bet daudzi CD8 plus ekspresējošie limfocīti, kas nav CTL, ražo IFN, tostarp dabiskās slepkavas (NK) šūnas un gamma delta (δ) T-šūnu apakšgrupas. 35.–37

Saskaņā ar Oh et al38, IFN reakciju var atkārtoti stimulēt vakcinētiem liellopiem, kuriem inficēšanās dienā ir bijis augsts vīrusu neitralizējošu antivielu titra līmenis cirkulācijā, kam ir tieša saistība ar vakcīnas izraisītu aizsardzību ar IFN. - un neitralizējošās antivielas. Turklāt CD4 plus T-šūnas ir galvenais plaukstošais fenotips un IFN ražojošās šūnas. Tomēr dabiskās infekcijas gadījumā bija limfopēnija, kas pārklājās ar maksimālo virēmiju un seruma IFN-reakciju, savukārt in vivo plazmocītu DC (pDC) skaits un in vitro pDC IFN-sekrēcija īslaicīgi samazinājās 2 dienu laikā pēc inficēšanās.39 IFN ražošana no no monocītiem iegūti DC (MoDC) un no ādas iegūti DC (ādas DC) tiek inhibēti cūku infekcijas akūtā fāzē.40 Nenobriedušās dendritiskās šūnās tika ierosināta arī apoptoze ar FMDV.32 Lai pārvarētu vīrusa imūno patoģenēzi. pastiprinot antivielu veidošanos un T-šūnu proliferāciju, augstāks CTL aktivitātes un IFN ekspresijas līmenis CD8 T-šūnās tika sasniegts, izmantojot sintētiskus oligonukleotīdus kā gļotādas vakcīnas adjuvantus.41 Šī raksta galvenais mērķis ir pārskatīt mutes un nagu sērgas vakcīnu attīstības tendences un izaicinājumi sterilas un ilgstošas ​​imunitātes radīšanai.

Vājināta un inaktivēta vakcīna

Bija daudzi mēģinājumi uzlabot dzīvas novājinātas mutes un nagu sērgas vakcīnas ar tradicionālajām metodēm, piemēram, sērijveida pasāžas ar neatļautiem dzīvniekiem vai šūnu kultūru. Vājināšanās tika panākta, pasējot ar nejutīgām sugām, piemēram, pelēm, trušiem un embrionētām olām, līdz tā zaudēja virulenci liellopiem. FMDV C-S8c1 sērijveida pasāžas ar lielu infekciju skaitu šūnu kultūrā izraisīja defektīvu genomu (C-S8p260), kas pilnībā aizsargāja peles pret nāvējošo FMDV C-S8c1 infekciju un bija drošs cūkām pēc vakcinācijas ar vienu devu. C-S8p260.42 Tas arī izraisīja augstu neitralizējošu antivielu titrus un aktivizētas T-šūnas cūkām.42

Ļoti patogēnā, cūkām pielāgotā O Taiwan 97 izolāta sērijveida pārnešana cūkām ievērojami samazina virulenci pēc 14. cūku pasāžas un atcēla to pēc 16. pasāžas.43 Aminoskābju izmaiņas in vivo pasāžas laikā bija ļoti klusa aizstāšana un izmaiņas VP1. (1D) bija pārejoši. Izstrādājot mutes un nagu sērgas vakcīnu neatļautiem saimniekiem, aģents var izmantot citus šūnu receptorus, kas nav Arg-GlyAsp (RGD). BHK 21 testa aplikuma tests var izrādīties negatīvs, kamēr vīruss ir neskarts.43 Aminoskābes aizstāšana sānu ķēdes, kas atrodas netālu no kapsīdu starpsubvienības ar citu aminoskābi, var izveidot jaunas disulfīda saites vai elektrostatiskas mijiedarbības starp apakšvienību saskarnēm, un tiek prognozēts vai ierosināts, ka tās var tikt izlietotas infekcijai, palielinot vakcinācijas celmu karstuma toleranci44, izmantojot pašreizējās mutes un nagu sērgas vakcīnu procedūras. kas ir mazāk atkarīgi no ideālas aukstuma ķēdes. FMDV C-S8p260 celmi ir segmentēti, kā arī replikācijai spējīgi, kas var nodrošināt pamatu vakcīnu vājināšanai ar divām drošības barjerām.45

Lielākā daļa pētījumu liecina, ka dzīvnieku modeļa FMDV inaktivācija, izmantojot aminoskābju aizstāšanu 2C, nebija nosakāma C-S8c1, bet bija sastopama nelielā daļā jūrascūciņām pielāgoto FMDV.46 Šī aminoskābju aizstāšana vīrusu populācijā ātri kļuva par svarīgāku pēc tam, kad jūrascūciņām pielāgotā vīrusa atkārtota ievadīšana cūkām. Šie atklājumi parāda, kā mazākuma vīrusu variantu ieviešana mākslīgā saimniekorganismā var kļūt par dominējošu, kad sākotnējā saimnieksuga tiek atkārtoti inficēta.47 Papildus šai pozitīvajai atlasei un kvazisugas spietam, vakcīnas celms var pārvērsties par patogēnu celmu. 22

Vīrusa inaktivācija, izmantojot formalīnu un endonukleāzi, nespēj inaktivēt vīrusu un attiecīgi noārdīt antigēnās vietas.48 Binārais etilēnimīns (BEI) ir izmantots arī vīrusa vājināšanai, vienlaikus saglabājot kapsīdas integritāti.15,49 BEI- inaktivētie FMD šūnu receptori, integrīni, tiek izmantoti piesaistīšanai un internalizācijai kultivētās šūnās, mijiedarbību veicina aminoskābes atlikums, kas atrodas VP1 kapsīda proteīna GH cilpā.49 FMDV specifiskās monoklonālās antivielas vai sintētiskais peptīds uzrādīja BEI- saistīšanos. inaktivēti mutes un nagu sērgas tika internalizēti, vienlaikus lokalizējoties ar marķiera proteīnu BHK-21, ko veicināja integrīnu saistošais motīvs RGD.50 Turklāt BEI inaktivācija neietekmē GH cilpas antigenitāti.20,51 BEI inaktivācija, saglabātā virionu arhitektūra un receptori veicināja vīrusa internalizāciju kultivētās šūnās, kā arī in vivo, ir saistīta ar integrīna atpazīšanu, 47, 52, 53, tomēr visa vīrusa kvantitatīva noteikšana uzrāda minimālu rezultātu salīdzinājumā ar formalīna rezultātiem. inaktivācija (65–71,6 procenti), savukārt BEI inaktivācija ir 44,2 procenti .49

Secīga C tipa FMDV izdalīšana no cūkām un jūrascūciņām un saglabāšana cūkām un zīdītājpelēm izraisa aminoskābju aizstāšanu (I2483T 2C, Q443R 3A un L1473P VP1). Aizvietotā aminoskābe (L1473P), kas atrodas blakus integrīnu saistošajam RGD motīvam, pārtrauca vīrusa augšanu dažādās šūnu līnijās un mainīja tā antigenitāti.47 Cits pētījums, ko veica Burman et al20, atklāja, ka viena aminoskābes maiņa RGD. Plus 1 un RGD plus 4 vietas kavē vīrusa piesaisti un infekciju, ko veicina v 6 vai v 8, bet vīruss izmanto v 3 šūnu piesaistīšanai. Aizstāšana ar metionīnu vai arginīnu saistīšanās vietā ir efektīvi v 6 inhibitori. Divas leicīna atliekas vietās RGD plus 1 un RGD plus 4 stabilizēja saistīšanos, kas ir atkarīga no struktūras nekavējoties C termināļa līdz RGD.20,54 EDTA rezistenta saistīšanās ar v 6 ir raksturīga iezīme, un bija paredzēts, ka stabilais komplekss ar tā šūnu receptoriem radīs ievērojamu FMDV infekciozitāti.21

Alanīna aizstāšana ar leicīniem pirmajā un ceturtajā pozīcijā RGD plus 1 un RGD plus 4 vietās izraisa vīrusa saistīšanās inhibīciju un vīrusa piesaisti v 6 vai v 8. Tomēr vīruss izmanto v 3 šūnu iekļūšanai.20 Tā kā šūnu kultūrai pielāgoti celmi izmanto heparāna sulfāta proteoglikānus (HSPG) kā alternatīvu receptoru. To ektodomēnu un integrīnu ligandu saistošā stāvokļa apstiprināšana ir svarīgs vīrusu tropisma faktors.

Heparāna sulfātu saistošie vīrusi efektīvi internalizēja DC, bet nesniedza antigēnu limfocītiem, izraisot FMDV specifisku IgG reakciju.55 Šie rezultāti parāda, ka FMDV DC internalizācija ir visefektīvākā vakcīnas vīrusiem ar HS saistīšanās spēju, bet HS saistīšanās nav problēma. ekskluzīva prasība.

Selektīvajam spiedienam, ko rada saimnieka humorālā imūnreakcija, ir svarīga loma gan antigēno FMDV variantu atlasē, gan stabilizācijā, kā rezultātā mainās šūnu tropisms. In vitro testi atklāja, ka paralēla FMDV pasāža subneitralizējošu homologu serumu klātbūtnē izraisīja mutantu saglabāšanos.56 Tomēr FMD A24 tipa pavairošana, kas satur SGD sekvenci šūnu receptoru saistīšanās vietā, tika inokulēta liellopiem. , vīruss slikti auga BHK-21 šūnās, un sekvence tika stabili saglabāta pavairošanas laikā BHK-21 šūnās, kas ekspresē liellopu V 6 integrīnu (BHK3 V 6), kā arī eksperimentāli inokulētiem un kontakta liellopiem. .56

No divām neatkarīgām pārnešanas ķēdēm liellopiem ir vērojamas genoma izmaiņas, kas saistītas ar FMDV BHK{0}}šūnām pielāgotā (saistīšanās ar heparāna sulfātu) celmu. Savvaļas tipa variants ar aminoskābju mutāciju VP1 356 tika ātri atlasīts vīrusa replikācijai in vivo.57

Delēcijas gēni kodē NS proteīnu, kas nav izšķirošs vīrusa replikācijai in vitro, ir alternatīva metode dzīvu novājinātu vakcīnu radīšanai. Tomēr, lai šis dzēšanas vīruss būtu noderīgs kā vakcīna, tam joprojām ir jāspēj vairoties uzņēmīgos dzīvniekos. Šīs pieejas priekšrocība salīdzinājumā ar klasisko vājināšanas metodi, kas parasti ievieš mutācijas ierobežotā skaitā vietu, ir tā, ka ir ievērojami samazināts virulences atjaunošanas risks58, un NS proteīni ir spēcīgi T-šūnu epitopi.

Ietekme ir pierādīta ģenētiski modificētiem FMDV vakcīnas celmiem ar dažām aminoskābju aizstāšanas vietām antigēnu vietās, ar līdzīgām augšanas īpašībām kā savvaļas vīrusam, kas pilnībā aizsargā dzīvnieku no inficēšanās, bet spēj vairoties in vitro.60

Ārkārtas dubultā eļļas adjuvanta FMD vakcīna uzrādīja virēmijas un vīrusu ēnojumu samazināšanos, un tai nebija klīnisku pazīmju. Vakcinētiem dzīvniekiem konsekventi tika konstatēti IL-6, IL-8 un IL-12.61 Savukārt citi citokīni IL-1, IL-2, TNF , TGF un interferoni netika atklāti; tas liecina, ka vakcīna neizraisīja sistēmisku iekaisuma reakciju, kā arī sistēmisku T limfocītu aktivitātes paaugstināšanos, kas ir saistīta ar īslaicīgu aizsardzību pret FMD.61

Rekombinantā cilvēka IL-2 ir spēcīgs humorālās imūnsistēmas induktors peļu modeļa FMD vakcīnā.62 Vakcinētie dzīvnieki saglabā serokonversiju pozitīvi 7–8 mēnešus un citokīnu (IL-6, IL{{5) sistēmiskā līmenī. }} un IL-12) palielinājās pēc vakcinācijas.63

Tukši vīrusu kapsīdi

Tukšas vīrusu kapsīdas, kas pazīstamas arī kā vīrusiem līdzīgas daļiņas (VLP), ietver visu imunogēno vietu repertuāru, kas atrodams neskartos vīrusos, bet tajās trūkst infekciozu nukleīnskābju un ietver vīrusa genoma klonēšanu, kas ir būtiska vīrusu sintēzei, apstrādei un montāžai. strukturālās olbaltumvielas tukšās vīrusu kapsīdos (P1-2A un 3Cpro kodējošie gēni; 1. attēls).64 Tukšās kapsīdas dabiski tiek ražotas in vitro šūnu kultūrā, ir antigēni līdzīgas un ir imunogēnas.65

Tukšas kapsīda vakcīnas izmantošana ir daudzsološs kandidāts, jo tā apiet vīrusa izmantošanu vakcīnu ražošanā un saglabā epitopu konformāciju.45 Turklāt nepastāv vīrusa reversijas un rekombinācijas ar savvaļas celmiem risks. Bezseruma suspensijā augošas zīdītāju šūnas ir izmantotas FMDV rekombinanto tukšo kapsīdu īslaicīgai gēnu ekspresijai (TGE).66 Vakcinētu dzīvnieku identificēšana no inficētiem vai atveseļošanās periodiem ir vienkārša, izmantojot pašlaik pieejamo tehnoloģiju.67–69

Apakšvienības vakcīna

Apakšvienības vakcīna satur vīrusu antigēnus, kas iegūti, ķīmiski ekstrahējot vai bioekspresējot minimālu daudzumu nevīrusu antigēnu barotnē.70 Pētnieki ir atklājuši, ka VP1 ir viens no FMDV kapsīda proteīniem, kam pagājušā gadsimta 70. gados bija ievērojama iedarbība uz virsmu. , un jaunākie sasniegumi strukturālajā virusoloģijā.71

Gēnu inženierija ir izmantota, lai mutētu genoma daļas vai atceltu proteīnus kodējošo VP1 reģionu nesenajos mēģinājumos izveidot novājinātas vakcīnas. Izmantojot rekombinanto DNS, tika izveidots vīruss ar RGD receptoru saistīšanās vietu uz VP1 noņemtā FMDV.72 7- līdz 10-dienu vecām pelēm vai cūkām šis vīruss nespēja pievienoties šūnām un nepielipa. izraisīt infekciju.73

FMDV VP1 kapsīda proteīnam un VP1 karboksi-terminālajam reģionam ir G-H cilpa, kas ir ļoti imunogēna, kas atbilst B šūnu epitopiem. Ķīmiski sintezēts peptīds, kas sastāv no FMDV serotipa O vīrusa pārklājuma proteīna (VP1) reģioniem (atlikumi no 141. līdz 158.), ir izraisījis augstu neitralizējošu antivielu līmeni un pasargājis liellopus pret infekciozā vīrusa intradermolingvālu inokulāciju24, kas liecina par G nozīmi. -H cilpa humorālās imūnās atbildes ierosināšanai. VP1 satur arī hipermainīgo reģionu un imunogēno vietu; vietas izmantošana būtu pamats plašai imunogenitātei.74

IFN kā ģenētiska adjuvanta iekļaušana izraisīja aizkavētu klīnisko pazīmju parādīšanos un virēmijas sākšanos.75 Rekombinants zīdtārpiņa bakulovīruss, kas kodē FMDV Asia 1 P1-2A un 3C proteāzi, spēja ražot specifiskas antivielas. vakcinētiem dzīvniekiem un aizsargāti pēc inficēšanās ar virulentu homologu vīrusu, un klīniskās pazīmes tika atvieglotas un aizkavētas.64

Tika ierosināta viena bojāta adenovīrusa 5 (Ad5) deva, kas satur FMDV serotipa A (Ad5A24) P1 un 3C kodējošo reģionu, neitralizējot antivielas un aizsargājot cūkas pret homologu infekciju.76 Tomēr ietekme uz šūnu imūno grupu netika pētīta. .

Gan vaccinia vīrusa, gan bakulovīrusa izraisītai tukšu A serotipa kapsīdu ekspresijai; kas satur racionāli izstrādātas mutācijas, tika uzlabota stabilitāte eikariotu šūnās.77 Šai vakcīnas antigēna ražošanas metodei ir vairākas perspektīvas priekšrocības salīdzinājumā ar pašreizējām tehnoloģijām ražošanas izmaksu, infekcijas riska un termotolerantas vakcīnas ziņā.45

Cilvēka 5. tipa adenovīrusa vektors, kas ekspresē kapsīda proteīnu (P1-2A un mutācijas vīrusa 3C proteāzi), nodrošina ievērojamu humorālo, šūnu un gļotādas imunitāti, ko izraisa BALB/c pelēm. Jūrascūciņu vakcinācija izraisīja būtiskas neitralizējošas antivielas un anti-FMDV imūnglobulīna A (IgA) antivielas, nodrošinot jūrascūciņu 100% aizsardzību pret inficēšanos.78

Rekombinants suņu 2. tipa adenovīruss (CAV2), kas ekspresē kapsīdu proteīnus (P1/3C) (1. attēls), spēja izraisīt spēcīgu humorālu imūnreakciju jūrascūciņām. Tomēr suņu 2. tipa adenovīrusu (CAV2) ekspresējošais VP1 proteīns neizraisīja noturīgu antivielu reakciju jūrascūciņām vai pelēm.79

Cūkas, kas vakcinētas ar Adenovīrusu 5 ar citomegalovīrusa pastiprinātāju, kas kodē A24-2B (Ad5-CI-A24-2BC), noteica maksimālo neitralizējošās antivielu atbildes reakciju par 7–14 dpv un izraisīja lielāku IgM veidošanos plkst. 7 dpi.14 Modificēts citomegalovīrusa promotors uzlaboja vektora efektivitāti un uzlaboja šūnu inficēšanos šūnu kultūrā, grupa, kas saņēma vakcīnu, bija pilnībā aizsargāta pēc provokācijas.14

Intramuskulāra peļu inokulācija ar rekombinantiem, FMDV bakulovīrusa rekombinanto kapsīdu proteīnu, kas klonēts ar citomegalovīrusa tūlītēju agrīnu pastiprinātāju kā promotoru (CMV-IE), un T-šūnu imunogēnu kodējošo reģionu ar T-šūnu epitopiem, tika efektīvi inducētas neitralizējošās antivielas un gamma interferons ( IFN- ).80 P1- 2A un 3C kodējošie FMD serotipa A reģioni, kas izteikti zīdtārpiņu kūniņās (Bombyx mori), spēja inducēt augstu specifisku antivielu titrus un pilnībā aizsargāti pret virulentiem homologiem vīrusiem.81

Vairāku antigēnu peptīdu sistēma ir ļoti imunogēna, salīdzinot ar vienu lineāro mutes un nagu sērgas vakcīnas antigēnu peptīdu.82 Sintētiskie dendrimēra peptīdi, kas satur divas galvenās FMDV antigēnās B-šūnu antigēnās vietas [VP1 (140–158)] kopijas, kovalenti saistītas uz heterotipisku T-šūnu antigēnu vietu no nestrukturālā proteīna 3A [3A (21–35)], ir pierādīts, ka tas aizsargā cūkas pret vīrusa izraisītu infekciju.83 Dendrimēra peptīds reproducē heterotipisku un ļoti konservētu FMDV 3A (21–35) T-šūnu epitops ir uzlabojis arī neitralizējošo antivielu un IFN atbildes reakciju.84 70 procentiem ar B2T vakcinētu cūku pilnīga aizsardzība — nekādas slimības klīniskas pazīmes — tika novērota, inficējot vīrusu 25. dienā pēc imunizācijas.84

DNS vakcīnas

Encefalomiokardīta vīrusa (EMCV) iekšējās ribosomas ievades vieta (IRES) ir dzēsta, un ir noņemts L gēns, kas ir iesaistīts šūnu slēgšanā ar eIF46,85 proteolīzi, un ir noņemts EMCV IRES, kas, kā pierādīts, palielina ekspresijas efektivitāti. tika ievietota augšpus P1 sekvencēm.86 DNS vakcīna, kas kodē P1-2A un GM-CSF kā adjuvantu izraisītu spēcīgu FMDV specifisku un neitralizējošu antivielu, kā arī indorējošus citokīnus IL-8 un IFN ražošana cūkām.87

DNS vakcīnas, kuru pamatā ir vīrusu mini gēni, kas atbilst trim galvenajiem B- un T-šūnu FMDV epitopiem VP1 (aminoskābju secība 133–156)-3A (aminoskābju secība 11–40) un VP4 (20–34) aizsargāt peles, ja provokācijas brīdī nav specifisku antivielu.88

FMDV DNS vakcīnas intranazāla ievadīšana; izmantojot hitozānu kā ievadīšanas līdzekli un IL-15 kā molekulāro adjuvantu, ir izraisījusi gļotādas un sistēmisku imūnreakciju ar pastiprinātu šūnu mediēto imunitāti (CMI), par ko liecina augstāks T-šūnu proliferācijas līmenis, CTL reakcija, un IFN- ekspresija gan CD4 plus, gan CD8 plus T-šūnās. 73

Pelēm, kas vakcinētas ar plazmīdu, kas ekspresē VP1 un IL9 kā ģenētisku adjuvantu, un ar iedarbinātu antiapoptozes mehānismu, ir attīstījusies spēcīga humorāla reakcija, augsts IFN un perforīna līmenis CD8 un T-šūnās, bet ne ar IL{{6} } šajās T-šūnās. IL-9 pārregulēja Beclin gēna ekspresijas un novērsa T-šūnu apoptozi.89

Cits pētījums atklāja, ka VP1 DNS vakcīnai, kas ekspresē interleikīnu-6 un IFN, ko izmanto kā molekulāros palīglīdzekļus, ir uzlabojusies antigēnu specifiskā šūnu mediētā reakcija. Tas arī izraisīja augstu IgG2a/IgG1, IFN-, IL-4 titru un dendritisko šūnu nobriešanu.90

Izmantojot IL-2 kā ģenētisku adjuvantu DNS vakcīnas kodēšanai, diviem FMDV VP1 epitopiem (aminoskābju atlikumi 141–160 un 200–213), kas satur vairākus epitopus, ir jāizraisa gan T-šūnu proliferācija, gan neitralizējoša antiviela pret mutes un nagu sērgu cūkām. izmantojot IL-2 kā ģenētisku adjuvantu.91,92

Cūkas, kas imunizētas ar anti-FMDV DNS vakcīnas plazmīdu, kas kodē P1-2A3C3D, un plazmīdu, kas ekspresē cūku “B-šūnu aktivācijas faktoru, kas pieder TNF saimei” (BAFF), veicināja B-šūnu nobriešanas aktivāciju un imūnglobulīna klases maiņu.

Uz replikām balstīta DNS vakcīna ar regulāru pastiprināšanu piedāvāja efektīvu vakcīnas stratēģiju pret FMDV.94 Dažādu antigēnu mērķu iekļaušana DNS vakcīnās ir ideāls veids, kā izveidot antigēnu kokteili vienā vakcīnas formulā. Pelēm, kas imunizētas ar trim plazmīdām, kas kodē mutes un nagu sērgas vīrusa (FMDV), pseidorabies vīrusa (PRV) un klasiskā cūku mēra vīrusa (CSFV) antigēnu, ir bijuši daudzsološi rezultāti.95

Intramuskulāra jūrascūciņu inokulācija ar DNS plazmīdām, kas ekspresē FMDV, kas satur inokulētā cūku IgG gēna signālsekvenci, uzrādīja neitralizējošu antivielu reakciju un liesas šūnu proliferācija palielinājās pēc revakcinācijas, bet dzīvnieki nebija pasargāti no vīrusa iedarbības.96

DNS vakcīna, kas kodē T-šūnu epitopu un B-šūnu epitopus no VP1 135.–167. vietas, un 1. vieta ietver 141–160 reģionus (G-H cilpa) un FMDV O tipa VP1 karboksilgalu, ir izraisījusi spēcīgu šūnu imūnreakciju. kā novērots, izmantojot T-šūnu proliferācijas testu.97

Intranazāli ievadot FMDV DNS vakcīnu, kas kodē kapsīda proteīnu, katjonu PLGA (poli(laktīda-ko-glikolīdu) kā nesēju un liellopu IL-6 kā ģenētisku adjuvantu, ir novērota pastiprināta gļotādas un sistēmiskā imūnā atbilde vakcinētiem dzīvniekiem.98

DNS vakcīna, kas ekspresē kapsīda proteīnu (P1-2A, 3C un 3D), kas sagatavota ar pGM-CSF un pastiprināta ar inaktivētu FMDV antigēnu, uzrādīja ievērojamu krustenisko serotipu reaktivitāti vakcinētām cūkām. Vīrusu neitralizācijas un ELISA testos tika ziņots par nozīmīgu savstarpēju serotipu reaktivitātes līmeni pret A, C un Asia1.99 Tomēr DNS vakcīna, kas ekspresē VP1 proteīnu un ražo antisensu RNS, kas mērķēta uz FMDV 5ʹUTR, izraisīja specifisku imūnreakciju vakcinētiem cilvēkiem. peles.72

DNS vakcīna, kas ekspresē VP1 kopā ar IL-15 (molekulāro adjuvantu), palielināja gļotādas izdalīto IgA un seruma IgG un šūnu mediēto imunitāti (CMI), ko pierāda augstāks antigēnu specifisko T-šūnu proliferācijas līmenis, citotoksiskie T limfocīti. (CTL) reakcija un augstāka IFN ekspresija gan CD4 plus, gan CD8 plus T-šūnās, informējot liesu un gļotādas vietas.73

Rekombinantās vakcīnas tiek izgatavotas, rekombinējot saimniekorganismu Ig virsģimeni, un vīrusu epitopi ir uzlabojuši vakcinēto dzīvnieku humorālo un šūnu imūnreakciju. RNS vakcīnas ir spēcīgi IgG klases pārslēdzēji, turklāt vakcinētām pelēm ir novērots arī augsts IgM titrs.100 Plazmīdu DNS, kas satur FMDV epitopus, pelēm ir ideāls audu sadalījums.101

Izaicinājumi ilgstošas ​​imunitātes radīšanā

Pēc inficēšanās ar dažādiem FMDV serotipiem ir vērojamas būtiskas izmaiņas T-limfocītu apakšpopulācijās, funkcionālajā kompetencē un pārpilnībā.102 BoCD4 plus un boCD8 plus T-šūnu līmenis samazinās līdz 48 stundām pēc inficēšanās (pi). Tomēr boWC1 plus T-šūnu pazemināšanās tiek novērota līdz 48 ZS ar FMDV serotipu O. Limfocīti no vakcinētiem dzīvniekiem uzrādīja ievērojamu boCD4 plus , boCD8 plus un boWC1 plus T-šūnu regulējumu pēc FMDV iedarbības. 102

Pēc dabiskās infekcijas ievērojami palielinās 3A-NS proteīna ekspresija limfocītos, kas atšķiras dažādās slimības gaitās, kas izraisa pārejošu CD4 plus un CD8 plus T-šūnu imūnsupresiju. 34

Saimnieka proteīnu tirdzniecības iznīcināšana ar NS proteīniem, īpaši 3A, pilnībā izjaucas, tāpēc neizraisa CD8 plus T-šūnu reakciju31 Vāja CTL dēļ vīruss dzīvniekā saglabājās. Integrīna receptori mediē kaulu smadzenēs iegūto līdzstrāvas apoptozi, kavējot saimnieka iedzimto imunitāti.32 Vēl viena svarīga parādība, kas traucē saimniekorganisma imunitāti, ir Lbpro, ļoti konservēts domēns, kam ir svarīga loma, inhibējot galveno signalizācijas molekulu ubikvitināciju attiecīgā tipa aktivizēšanā. I IFN reakcija, piemēram, ar retinoīnskābi inducējamais gēns I (RIG-I), TANK saistošā kināze 1 (TBK1), ar TNF receptoriem saistītais faktors 6 (TRAF6) un TRAF3.103 Tas samazina tūlītējas un agrīnas IFN ierosināšanas līmeni. mRNS un IFN stimulēti gēnu produkti.102 Turklāt 3Cpro bloķē iekšējo Golgi transportu, noārdot proteīnu, kas nepieciešams iekšējai Golgi transportēšanai.

Guzmans un citi33 ​​un Joshi et al34 analizēja surogātreakcijas CTL nogalināšanai, piemēram, IFN proliferāciju vai ražošanu CD8 ekspresējošās šūnās, par kurām ziņots, bet daudzi CD8 plus ekspresējošie limfocīti, kas nav CTL, kas ražo IFN, ieskaitot NK šūnas un δ T apakškopas. - šūnas. 35–37,39,104

CTL aktivitāte, kas novērtēta 10 dienas pēc inficēšanās ar Ad5-FMDV-3C, liecināja par būtisku CTL aktivitātes palielināšanos 10 dienas pēc provokācijas, salīdzinot ar pastiprināšanas līmeni, bet atgriezās sākotnējā līmenī 17 dienas pēc izaicinājums.17 Tomēr mēģinājums novērtēt CTL aktivitāti 4. dienā neizdevās iegūt pietiekami daudz šūnu. Tas bija saistīts ar limfopēniju un imunopatoloģiju, ko izraisīja FMDV. Pastāv pozitīva saistība starp IFN reakciju un vakcīnas izraisītu aizsardzību, kā arī FMD vīrusa ilgtermiņa noturības samazināšanās.

Saskaņā ar Oh et al 38 CD4 plus T-šūnas ir galvenās vairojošās fenotips un IFN ražojošās šūnas.

Neatkarīgi no FMDV serotipa seruma IFN maksimums sasniedza 2–3 dienas pēc inficēšanās, limfopēnija atbilda maksimālajai virēmijai un seruma IFN reakcijai, un cirkulējošo plazmocītu dendritisko šūnu (pDC) skaits un in vitro pDC IFN ražošana īslaicīgi samazinājās pēc 48 stundām. Neatkarīgi no injicētā FMDV serotipa vai skartā dzīvnieka vecuma, limfocītu vai pDC infekcija nekad netika konstatēta.39

Cūku infekcijas akūtās fāzes laikā tiek nomākta IFN veidošanās no monocītiem iegūtiem DC (MoDC) un no ādas iegūtiem DC (ādas DC). Šī ietekme notiek vienlaikus ar paaugstinātu vīrusu titru asinīs, taču šīs šūnas netiek produktīvi inficētas. Interesanti, ka šo DC spēja uzņemt daļiņas un apstrādāt antigēnus nemainās, parādot, ka antigēni neietekmē to spēju uzņemt daļiņas un apstrādāt antigēnus.35

Secinājums

Pamatojoties uz iepriekš minēto literatūru un pētījumu nepilnībām, tā sniedz šādus ieteikumus. Jāizpēta tradicionālo vakcīnu šūnu internalizācija, glikozilācijas modelis, antigēna prezentācija un pozitīvās atlases mehānismi (patogēno celmu attīstība). Vakcīnas izraisītais CD8 plus T CMI stiprina ilgstošu imūnreakciju un savstarpēju aizsardzību. δ T-šūnu receptoriem ir nozīme imūnsistēmas patoģenēzē, noturībā un CTL veidošanā, kas būtu plaši jāizpēta. Rekombinantais proteīns, izmantojot plūsmas citometru un ELISpot ELISA, lai analizētu vakcīnas daļiņu internalizāciju, antigēnu prezentāciju un antigēnu prezentējošo šūnu savstarpējās sarunas.

Jāizstrādā jauni tīmekļa rīki, kas parādīs sānu ķēžu ietekmi uz B- vai T-šūnu epitopu. Skaidri jāmeklē dzīvnieku modeļu infekcijas un vakcīnu izstrādes un efektivitātes testu izmantošana, jo laboratorijas dzīvniekiem ir ievērojama integrīna receptoru atšķirība, kā arī cūkas un atgremotāji. Genoma mēroga CTL epitopu skaitļošanas novērtēšanai, integrējot epitopu minēšanas rīkus liela skaita vīrusu sekvenču aprēķināšanā un sekojošā in vivo novērtēšanā, ir liela priekšrocība, lai ražotu vakcīnas ar ilgstošu aizsardzību un savstarpējas aizsardzības spēju.

Saīsinājumi

3A, nestrukturāls proteīns; Ad5, Adenovīrusa 5 vektors; 3Cpro, 3C proteāze (nestrukturāls proteīns); BEI, bināri etilēnamīni; BHK šūna, kāmja mazuļa nieru šūna; CD4 plus , Klasteru diferenciācijas koeficients četri pozitīvs; CD8 plus , Klastera diferenciācijas koeficients astoņi pozitīvs; cDNS, komplementārā DNS; CTL, citotoksiskās T-šūnas; DC, dendrīta šūna; ELISA, ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests; Mutes un nagu sērga, mutes un nagu sērga; FMDV, mutes un nagu sērgas vīruss; GM-CSF, granulocītu un monocītu koloniju stimulējošais faktors; IFN-, alfa interferons; IFN-, gamma interferons; Ig, imūnglobulīns; IL, Interleikīns; LTR, Long termināla atkārtojums; NK šūnas, dabiskās killer šūnas; NS proteīns, nestrukturāls proteīns; P1-2A, strukturālā proteīna prekursora gēns; P1-2A3C3D, vīrusa strukturālo proteīnu prekursors P1–2A un nestrukturālie proteīni 3C un 3D; PBMC, perifēro asiņu mononukleāts; RT-PCR, Reversās transkripcijas polimerāzes ķēdes reakcija; SAT, Dienvidāfrikas tips; TGE, pārejoša gēnu ekspresija; TGF, audzēja augšanas faktors; TNF, audzēja nekrozes faktors; Th šūnas, T palīgšūnas; VP1, vīrusa proteīns 1; δ T šūnas, Gamma delta T šūnas.

Paziņojums par datu koplietošanu

Šajā pārskatā izmantotie dati ir sekundāri un ir iekļauti rakstā.

Atzinība

Esmu ļoti pateicīgs Gondaras Universitātes Pētniecības un sabiedrisko pakalpojumu viceprezidenta birojam par materiālu nodrošināšanu un finansiālo atbalstu. Es arī pateicos Gondaras Universitātes Veterinārmedicīnas un dzīvnieku zinātņu koledžai par papildu atbalstu.

Finansējums

Autors pateicas Gondaras Universitātes Pētniecības un sabiedriskā pakalpojuma viceprezidenta birojam.

Atklāšana

Autore paziņo, ka šajā darbā nav interešu konfliktu.

Atsauces

1. Kitching P, Hammond J, Jeggo M u.c. Globālā mutes un nagu sērgas kontrole — vai tā ir iespēja? Vakcīna. 2007;25(30):5660–5664. doi:10.1016/j. vakcīna.2006.10.052

2. Raza S, Siddique K, Rabbani M u.c. Četru aftovīrusu serotipu strukturālo proteīnu mikrobu patoģenēzes in silico analīze atklāja nozīmīgus B un T šūnu epitopus. Mikrobu Patogs. 2019;128 (2018. gada augusts): 254–262. doi:10.1016/j.micpath.2019.01.007

3. Arzt J, Belsham GJ. Mutes un nagu sērgas pārnešana no pastāvīgi inficētiem liellopiem uz naiviem liellopiem, pārnesot orofaringeālo šķidrumu. Vet pasaule. 2018; 3:318. doi:10.1128/ mSphere.{8}}

4. Arzt J, Pacheco JM, Stenfeldt C. Virulentā un novājinātā mutes un nagu sērgas vīrusa patoģenēze liellopiem. Vet pasaule. 2017;14:89. doi:10,1186/s12985-017-0758-759

5. Sobhy NM, Bayoumi YH, Mor SK, El-Zahar HI, Goyal SM. Mutes un nagu sērgas uzliesmojumi Ēģiptē: molekulārā epidemioloģija, evolūcija un sirds biomarķieru prognostiskā nozīme. Int J Vet Sci Med. 2018;6(1):22–30. doi:10.1016/j. tikko.2018.02.001

6. Senthilkumaran C, Yang M, Bittner H u.c. Genoma, antigēna un antivielu noteikšana mutes šķidrumos no cūkām, kas inficētas ar mutes un nagu sērgas vīrusu. Can J Vet Res. 2017;81:82–90.

7. Palinski RM, Bertram MR. Pirmā mutes un nagu sērgas vīrusa serotipa O apakšlīnijas genoma secība Ind2001e no Vjetnamas dienvidiem. Microbiol Resour Nonounc. 2019;8: e01424–18. doi:10.1128/mra.{10}}

8. Pulido MR, Sobrino F, Borrego B u.c. Vājināta mutes un nagu sērgas vīrusa RNS, kas nes deleciju 3′ nekodētajā reģionā, var izraisīt imunitāti cūkām. Dž Virols. 2009;83(8):3475–85. doi:10.1128/JVI.{11}}

9. Saravanan P, Iqbal Z, Selvaraj DPR, Aparna M, Umapathi V. Salīdzinājums ķīmiskās ekstrakcijas metodēm 146S satura noteikšanai mutes un nagu sērgas eļļas adjuvanta vakcīnā. J Appl Microbiol. 2019;1 (Rueckert 1985): 1–9. doi:10.1111/jam.14465

10. Jamal SM, Belsham GJ. Mutes un nagu sērga: pagātne, tagadne un nākotne. Vet Res. 2013;44(1):1–14. doi:10.1186/1297-9716- 44-116

11. Robinson L, Knight-Jones TJ, Charleston B u.c. Globālie mutes un nagu sērgas pētījumu atjauninājumi un nepilnību analīze: 7 - patoģenēze un molekulārā bioloģija. Transbound Emerg Dis. 2016;63(1):63–71. doi:10.1111/tbed.12520

12. Sreenivasa BP, Mohapatra JK, Pauszek SJ u.c. Rekombinants cilvēka adenovīruss-5, kas ekspresē Indijas mutes un nagu sērgas vīrusa vakcīnas celmu kapsīdu proteīnus, izraisa efektīvu antivielu reakciju liellopiem. Vet Microbiol. 2017;203:196–201. doi:10.1016/ j.vetmic.2017.03.019

13. Neilan JG, Schutta C, Barrera J u.c. Ar adenovīrusu pārnēsātās mutes un nagu sērgas vīrusa serotipu A apakšvienības vakcīnas efektivitāte liellopiem, izmantojot tiešā kontakta transmisijas modeli. BMC Vet Res. 2018;14(1):1–9. doi:10,1186/s12917-018- 1582-1

14. Pena L, Pires M, Koster M u.c. Mutes un nagu sērgas vīrusa tukšā kapsīda apakšvienības antigēna piegāde ar nestrukturālu proteīnu 2B uzlabo cūku aizsardzību. Vakcīna. 2008; 26 (45): 5689–5699. doi:10.1016/j.vaccine.2008.08.022

15. Barteling SJ, Cassim NI. Ļoti ātra (un droša) mutes un nagu sērgas vīrusa un enterovīrusu inaktivācija ar bināra etilēnimīna un formaldehīda kombināciju. Dev Biol (Bāzele). 2004;119:449–455

16. Rweyemamu MM, Umehara O, Giorgi W, Medeiros R, Neto DL, Baltazar M. Formaldehīda un binārā etilēnimīna (BEI) ietekme uz mutes un nagu sērgas vīrusa kapsīda integritāti. Rev Sci Tech. 1989;8(3):747–764. doi:10.20506/rst.8.3.425

17. Patch JR, Kenney M, Pacheco JM, Grubman MJ, Golde WT. Citotoksisko T limfocītu funkcijas raksturojums pēc mutes un nagu sērgas vīrusa infekcijas un vakcinācijas. Vīrusu imunols. 2013;26(4):239–249. doi:10.1089/vim.2013.0011

18. Rodriguez-Calvo T, Ojosnegros S, Sanz-Ramos M, Garcia-Arriaza J, Escarmis C, Domingo E, Sevilla N. Jauns vakcīnas dizains, kura pamatā ir defektīvi genomi, kas apvieno novājinātu un inaktivētu vakcīnu iezīmes. PLoS One. 2010;5(4):1–11. doi:10.1371/ journal.pone.0010414

19. Núñez JI, Baranowski E, Molina N u.c. Skābes aizstāšana nestrukturālā proteīnā 3A var veicināt mutes un nagu sērgas vīrusa pielāgošanos jūrascūciņām. Dž Virols. 2001. doi:10.1128/JVI.75.8.3977-3983.2001

20. Burman A, Clark S, Abrescia NGA u.c. Mutes un nagu sērgas vīrusa VP1 GH cilpas specifika v 6 integrīniem. Dž Virols. 2006;80(19):9798–9810. doi:10.1128/JVI.{12}}

21. Dicara D, Burman A, Clark S u.c. Mutes un nagu sērgas vīruss veido ļoti stabilu, pret EDTA rezistentu kompleksu ar tā galveno receptoru, integrīnu v 6: ietekme uz infekciozitāti. Dž Virols. 2008;82(3):1537–1546. doi:10.1128/JVI.{12}}

22. Domingo E, Sheldon J, Perales C u.c. Vīrusu kvazisugu evolūcija. Microbiol Mol Biol Rev. 2012;76(2):159–216. doi:10.1128/MMBR.{8}}

23. Mckenna TS, Lubroth J, Rieder E u.c. Mutes un nagu sērgas (MNS) vīruss, kas saistās ar receptoriem, aizsargā liellopus no mutes un nagu sērgas. Dž Virols. 1995; 69(9): 5787–5790. doi:10.1128/ jvi.69.9.{14}}.1995

24. Dimarchi R, Brooke G, Gale C, Cracknell V, Doel T, Mowat N. Liellopu aizsardzība pret mutes un nagu sērgu, izmantojot sintētisko peptīdu. Zinātne. 1986. gads; 232:639–641. doi:10.1126/science.3008333

25. Gómez N, Salinas J, Escribano JM u.c. Aizsargājoša imūnreakcija pret mutes un nagu sērgas vīrusu ar VP1, kas ekspresēts transgēnos augos, aizsargājoša imūnreakcija pret mutes un nagu sērgas vīrusu ar VP1, kas ekspresēts transgēnos augos. Dž Virols. 1998;72:2–5.

For more information:1950477648nn@gmail.com