Cilvēka amnija mezenhimālās cilmes šūnas atvieglo AGVHD pēc Allo-HSCT, regulējot mijiedarbību starp zarnu mikrobiotu un zarnu imunitāti
Oct 18, 2023
Abstrakts
Akūta transplantāta pret saimniekorganismu slimība (aGVHD) pēc alogēnas hematopoētisko cilmes šūnu transplantācijas ir viens no satraucošākajiem izaicinājumiem. Zarnu mikrobiotas disbioze var turpināties ar aGVHD, un mezenhimālajām cilmes šūnām (MSC) ir daudzsološs aGVHD terapeitiskais potenciāls. Tomēr joprojām nav zināms, vai hAMSC ietekmē zarnu mikrobiotu aGVHD mazināšanas laikā. Attiecīgi mēs centāmies definēt no cilvēka amnija membrānas iegūto MSC (hAMSC) ietekmi un pamatā esošos mehānismus, kas regulē zarnu mikrobiotu un zarnu imunitāti aGVHD. Izveidojot humanizētus aGVHD peles modeļus un ārstēšanu ar hAMSC, mēs atklājām, ka hAMSC ievērojami uzlaboja aGVHD simptomus, mainīja T šūnu apakšgrupu un citokīnu imūno nelīdzsvarotību un atjaunoja zarnu barjeru. Turklāt, ārstējot ar hAMSC, tika uzlabota zarnu mikrobiotas daudzveidība un sastāvs. Spīrmena korelācijas analīze parādīja, ka pastāv korelācija starp zarnu mikrobiotu un ciešā savienojuma olbaltumvielām, kā arī imūnšūnām un citokīniem. Mūsu pētījumi liecināja, ka hAMSCs atviegloja aGVHD, veicinot zarnu mikrobiotas normalizāciju un regulējot mijiedarbību starp zarnu mikrobiotu un zarnu barjeru, imunitāti.
cistanche priekšrocības vīriešiem - stiprina imūnsistēmu
Atslēgvārdi
Akūta transplantāta pret saimnieku slimība · Amnija mezenhimālās cilmes šūnas · Zarnu mikrobiota · Zarnu barjera · Zarnu imunitāte
Ievads
Alogēnās hematopoētiskās cilmes šūnu transplantācijas (allo-HSCT) galvenā priekšrocība ir spēcīga pretvēža reakcija, ko izraisa transplantāta pret leikēmiju (GVL) efekts, ko izraisa peptīdu atpazīšana, kas rodas no genoma polimorfisma atšķirībām starp pacientiem un pacientiem. donors. Tomēr akūta transplantāta pret saimniekorganismu slimība (aGVHD) ir saistīta ar recipienta audu bojājumu attīstību alloreaktīvo donoru T šūnu uzbrukuma dēļ, un tā ir dzīvībai bīstama galvenā alloHSCT komplikācija [1, 2]. Ir ziņots, ka zarnu mikrobu traucējumi izraisa iekaisuma reakcijas un korelē ar ar iekaisumu saistītām slimībām [3, 4]. Daudzi pētījumi liecina, ka zarnu mikrobiotas perturbācijas ir būtisks faktors, kas izraisa aGVHD pēc allo-HSCT, un kļūst par jaunu ārstēšanas mērķi [5, 6]. Konkrēti, zarnu mikrobiotas disbiozi aGVHD parasti raksturo zarnu baktēriju daudzveidības zudums un oportūnistisku patogēnu izaugums [6]. Kuņģa-zarnu trakta GVHD gadījumā kompromitētā gļotādas barjera ierosina saimnieka antigēnu prezentējošo šūnu un donoru T šūnu aktivāciju, kas beidzas ar T-šūnu diferenciāciju atbilstoši patogēna tipa-1 un tipa-17 paradigmām uz tolerogēnās regulējošās T-reklāmas rēķina. šūnu modeļi [7]. Galvenokārt, pamatojoties uz 16S ribosomu RNS (16S rRNS) sekvencēšanu, tika norādīts, ka vairākas zarnu mikrobiotas sugas ir saistītas ar GVHD, un, piemēram, butirātu ražojošās klostridijas ir saistītas ar epitēlija barjeras funkcijas uzturēšanu un akūtas GVHD vājināšanu [8 ]. Pēdējo desmit gadu laikā mezenhimālās cilmes šūnas (MSC) ir ieguvušas lielu uzmanību to pašatjaunošanās un daudzlīniju diferenciācijas potenciāla, kā arī imūnmodulējošo īpašību dēļ [9]. Tiek uzskatīts, ka MSC nodrošina bojātus audus no līdzsvarotas iekaisuma un reģeneratīvās mikrovides spēcīga iekaisuma klātbūtnē, un tie ir plaši izmantoti imūnsistēmu traucējumu ārstēšanai, kuros visveiksmīgākais klīniskais pielietojums ir saistīts ar GVHD ārstēšanu [10]. Cilvēka amnija mezenhimālās cilmes šūnas (hAMSC) ir perinatālās cilmes šūnas, kurām piemīt embriju cilmes šūnām līdzīga diferenciācijas spēja un pieaugušo cilmes šūnām līdzīgas imūnmodulējošas īpašības. Kopīgojot fenotipus, kas līdzīgi tipiskiem MSC, hAMSC ir kļuvuši par daudzsološu cilmes šūnu avotu audu iegūšanas viegluma, neinvazīvas un drošības, bagātīgās šūnu ražas un ļoti zemo ētisko un morālo strīdu dēļ, salīdzinot ar cilmes šūnām no citiem avotiem. Cilvēka AMSC priekšrocības ir zema imunogenitāte un nav audzēja ģenēzes, padarot tās par ideālu šūnu avotu šūnu terapijai [11, 12]. In vitro eksperimenti ir apstiprinājuši, ka hAMSC ir lielāka proliferācijas spēja un lielāka ilgtermiņa augšanas spēja nekā no kaulu smadzenēm iegūtiem MSC [13, 14]. Daudzi pētījumi ir parādījuši, ka hAMSC ir potenciāls uzlabot daudzas iekaisuma slimības, tostarp iekaisīgu zarnu slimību, osteoartrītu un autoimūno slimību [11]. Mūsu nesenais pētījums parādīja, ka hAMSC uzlaboja aGVHD, regulējot T efektora un Treg šūnu līdzsvaru [15]. Tomēr hAMSC ietekme un mehānisms uz zarnu mikrobu traucējumiem GVHD nav zināms. Šeit mūsu mērķis ir izpētīt hAMSC iespējamo ietekmi uz aGVHD, kā arī zarnu mikroekosistēmu. Tas būtu pirmais pētījums, kas atklātu zarnu mikrobiotu un tās korelāciju ar zarnu imunitāti pēc hAMSC ārstēšanas ar aGVHD.
Materiāli un metodes
HAMSC izolācija, kultūra un identifikācija
HAMSC tika ekstrahēti, kā aprakstīts iepriekš [15]. Trešās pasāžas (P3) šūnas tika iegūtas no fenotipa identifikācijas, krāsojot ar antivielām pret CD34 (581, BD Pharmingen, ASV), CD45 (HI30, BD Pharmingen, ASV), HLA-DR (G46-6, BD Pharmingen). , ASV), CD11b (ICRF44, BD Pharmingen, ASV), CD90 (5E10, BD Pharmingen, ASV), CD73 (AD2, BD Pharmingen, ASV) un CD105 (SN6, biozinātne, ASV), un pēc tam analizēti ar plūsmas citometru ( BD FACS Canto II). Šūnām tika pārbaudīta to daudzlīniju diferenciācija, izmantojot īpašu indukcijas barotni (BGscience, Ķīna), un attiecīgi iekrāsotas ar Oil Red-O un Alizarin Red, lai iegūtu attiecīgi adipoģenēzi un osteogēnu diferenciāciju. Eksperimentos tika izmantoti hAMSC 3. līdz 6. fragmentos.
cistanche tubulosa-uzlabo imūnsistēmu
Cilvēka PBMC kolekcija
Plazmas paraugi tika iegūti no veseliem brīvprātīgajiem ar rakstisku informētu piekrišanu. Cilvēka perifēro asiņu mononukleārās šūnas (PBMC) tika izolētas no perifērajām asinīm ar Ficoll-Hypaque (Tianjin Haoyang, Ķīna) blīvuma centrifugēšanu, mazgātas ar PBS, suspendētas sarkano asins līzes buferšķīdumā (Solarbio, Ķīna) 4 grādos 15 minūtes. Vēlreiz nomazgājiet un pēc tam suspendējiet PBS, lai injicētu NPG pelēm astes vēnā.
Peles
8–10 nedēļas vecas un 25–30 g NPG peļu tēviņi un mātītes tika iegādātas no Beijing Vitalstar Biotechnology Co., Ltd. un audzētas SPF apstākļos 12 h gaismas-tumsas ciklā ar nemainīgu temperatūru un mitrumu. Visas procedūras ar dzīvniekiem apstiprināja Dienvidu Medicīnas universitātes Institucionālā dzīvnieku kopšanas un lietošanas komiteja (Nr. L2019132) saskaņā ar Ķīnas Nacionālās veselības un medicīnas pētījumu padomes vadlīnijām par eksperimentiem ar dzīvniekiem.
Akūts GVHD dzīvnieku modelis un ārstēšana
AGVHD peles modelis tika izveidots, kā aprakstīts iepriekš [15]. Ārstēšanai 5 × 105 hAMSC uz vienu peli (šeit hAMSCs grupa) un PBS (šeit aGVHD grupa) tika injicēts caur astes vēnu katrā peles trešajā dienā pēc transplantācijas. Visos peļu modeļos peles tika pārbaudītas ik pēc divām dienām, lai noteiktu saslimstību un svara izmaiņas. Katrai pelei tika novērtētas patoloģiskās pazīmes, tostarp svara zudums, izliekta poza, izlocītas kažokādas, ādas bojājumi, ierobežota mobilitāte un caureja, un pēc tam tika novērtēta atbilstoši aGVHD klīniskajai vērtēšanas sistēmai, kas pielāgota no tās, kuru sākotnēji aprakstīja Kuka [16]. Dažos gadījumos peles aGVHD grupā cieta no smaga aGVHD, un peles hAMSCs grupā trešajā dienā pēc ārstēšanas tika nogalinātas, lai savāktu perifērās asinis un mērķa orgānus, tostarp aknas, liesas, plaušas un zarnas. Šo peļu izkārnījumi tika savākti pirms upurēšanas.
Ar GFP marķēti hAMSC un in vivo izsekošana
Ar GFP marķēti hAMSC tika izveidoti un identificēti, kā aprakstīts iepriekš [15]. Īsāk sakot, mēs transfektējām zaļās fluorescences proteīna (GFP) gēnu hAMSCs ar lentivirus kā vektoru. 5 × 105 GFP marķēti hAMSC, kas suspendēti 500 μL PBS, tika injicēti aGVHD pelēm caur astes vēnu. Pēc 24 stundām un 72 stundām peles tika eitanizētas, lai novāktu zarnas, un pēc tam tika izveidotas saldētas sekcijas. Lai atšķirtu saņēmējas šūnas, tika izmantota DAPI pretkrāsošana.
Histopatoloģiskais novērtējums
AGVHD mērķa orgāni tika savākti autopsijas laikā un pēc tam apstrādāti parafīnā iestrādātos blokos, lai izveidotu 5- μm biezas sekcijas hematoksilīna un eozīna krāsošanai (H&E). Histoloģiskie rādītāji tika novērtēti, pamatojoties uz audu struktūras iznīcināšanu un limfocītu infiltrāciju [17]. Imūnhistoķīmijai sekcijas tika deparafnizētas, rehidrētas un apstrādātas ar 3% H2O2 metanolā 20 minūtes, lai inaktivētu endogēno peroksidāzes aktivitāti. Pēc tam sekcijas tika pakļautas antigēna iegūšanai un 1 stundu apstrādātas ar seruma albumīnu. Pēc tam sekcijas tika inkubētas ar trušu anti-cilvēka CD45 antivielām (EP322Y, Abcam, Anglija) vai ZO-1 antivielām ((EPR19945-296, Abcam, Anglija) 1 stundu 37 grādu temperatūrā. antivielas tika noteiktas ar HRP konjugētu sekundāro antivielu (Genentech, ASV) un vizualizētas ar DAB. Pozitīvais apgabals tika analizēts ar attēlu J.
cistanche augu paaugstinošā imūnsistēma
Fekālo mikrobiotas 16S rRNS sekvencēšana
Fekāliju genoma DNS tika ekstrahēta no 0,1 g saldētu fekāliju paraugu, izmantojot EZNA® izkārnījumu DNS komplektu (Omega BioTek, Norcross, GA, ASV), ievērojot ražotāja protokolu. Izmantojot genoma DNS kā veidni, tika izmantoti specifiski primeri (338F: 5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′ un 806R: 5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′) ar svītrkodiem un PremixTaq)ify (TaKaRaampl, China). baktēriju 16S rRNS gēna V3-V4 hipermainīgie reģioni. Pēc pastiprināšanas un attīrīšanas Magigene Technology Co., Ltd. (Guandžou, Ķīna) visu parauga genomu sekvencēja Illumina Hiseq vai Miseq augstas caurlaidības sekvencēšanas platformā, lai iegūtu neapstrādātus datus FASTQ formātā. Secību datu analīze galvenokārt tika veikta, izmantojot Magicand platformu.
Plūsmas citometriskā analīze
AGVHD mērķa orgāni un peļu perifērās asinis tika iegūti un sagatavoti vienas šūnas suspensijā. Šūnas tika iekrāsotas ar monoklonālām antivielām pret CD3 (UCHT1, Biolegend, ASV), CD4 (RPA-T4, Invitrogen, ASV), CD8 (RPA-T8, Biolegend, ASV), CD25 (BC96, Biolegend, ASV) vai atbilst izotipam. kontrolēt IgG (eBioscience, ASV) 30 minūtes istabas temperatūrā tumsā. Pēc tam šūnas 15 minūtes apstrādāja ar lizēšanas buferi (BD Pharm Lyse™) 4 grādu temperatūrā tumsā. Intracelulārā Foxp3 (236A/E7, Invitrogen, ASV) krāsošana tika veikta saskaņā ar ražotāja ieteikumiem (Fixation/Permeabilization Solution Kit; eBioscience). Pēc tam ar plūsmas citometru tika veiktas polihromatiskās plūsmas citometriskās analīzes.
Citokīnu kvantitatīvā noteikšana
Citokīnu līmenis peļu serumā un audu supernatantā tika noteikts, izmantojot Citometric Bead Array (CBA) cilvēka Th1/Th2/Th17 citokīnu komplektu (BD Pharmingen, ASV) saskaņā ar ražotāja norādījumiem. Īsumā, 50 μL no katra supernatanta parauga tika inkubēti ar 50 μL jauktu cilvēka Th1/Th2/Th17 citokīnu uztveršanas lodītēm un 50 μL cilvēka Th1/Th2/Th17 PE noteikšanas reaģenta istabas temperatūrā tumsā, pēc tam suspendēti. plūsmas citometrijas analīzei 3 stundas vēlāk.
Kvantitatīvā reālā laika PCR
Kopējā RNS tika ekstrahēta no peles resnās zarnas audiem pēc izolācijas, izmantojot Trizol Reagent (TaKaRa, Ķīna). Kopējā RNS tika izmantota kā veidne cDNS reversai transkribēšanai. -aktīns tika izmantots kā iekšēja atsauce. MRNS ekspresija tika mērīta ar qPCR, izmantojot šādus primerus: ZO-1-F, 5'-ACCCACCAACCCGAGAAGAC-3' un ZO- 1-R, 5'-CAGGAGTCATGGACGCACA-3 '; Occludin-F, 5'-TTGAAAGTCCACCTCCTTACAGA-3' un OccludinR, 5'-CCGGATAAAAAGAGTACGCTGG-3'; -aktīns-F, 5'-GGCTGTATTCCCCTCCATCG-3' un -actin-R, 5'-CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3'. RNS ekspresijas līmeņu mērīšanai tika izmantota 2-ct metode.
Ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests (ELISA)
D-LA un DAO līmenis plazmā tika mērīts, izmantojot ELISA komplektus (Jingmei, Ķīna) saskaņā ar ražotāja norādījumiem. Īsi sakot, savāktie plazmas supernatanti tika ievietoti attiecīgi 96-attiecīgi ar antivielām pārklātās plāksnēs. Absorbcija tika reģistrēta pie 450 nm, izmantojot mikroplašu lasītāju (Multiskan MK3, Thermo Fisher Scientific).
Statistiskā analīze
Dati tika parādīti kā vidējais ± SD. Neatkarīgu paraugu t-tests tika veikts un vizualizēts, izmantojot GraphPad Prism8.0. 16S rRNS sekvencēšanas datu analīze tika veikta, izmantojot Magichand platformu (http://cloud.magigenecom/). Korelācijas analīze starp zarnu mikrobiotu un imunitāti tika veikta, izmantojot R pakotnes (v3.6.3), lai parādītu korelācijas matricu. P vērtības<0.05 were considered statistically significant. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001, n.s. not signifcant.
Rezultāti
HAMSC identifikācija
HAMSC kultūrā uzrādīja daudzstūrveida vai fibroblastiem līdzīgu morfoloģiju (1. att. A) un bija izteikti pozitīvi attiecībā uz MSC specifisko marķieru CD90, CD105 un CD73 virsmas ekspresiju, bet negatīvi attiecībā uz CD34, CD45, HLA-DR un CD11b (att. 1C). Runājot par daudzlīniju diferenciāciju, mūsu rezultāti parādīja, ka hAMSC ir adipocītiska un osteoblastiska diferenciācija (1. B att.).
hAMSC ievērojami atviegloja aGVHD simptomus pelēm
Vispirms mēs novērtējām hAMSC terapeitisko iedarbību uz aGVHD. Salīdzinot ar aGVHD grupu, hAMSCs ievērojami uzlaboja aGVHD, par ko liecina ievērojami samazināts svara zudums (2.B att.) un samazināts aGVHD klīniskais rādītājs (2.C att.). Turklāt hAMSCs grupai bija ievērojami augstāks izdzīvošanas rādītājs, salīdzinot ar aGVHD pelēm (att. 2D). Patoloģiskā histoloģiskā analīze parādīja, ka aGVHD izraisīja smagus audu bojājumus un leikocītu infiltrāciju. hAMSCs, kā to pierāda H&E, mazināja audu bojājumus un eksogēno T šūnu infiltrāciju aGVHD mērķa orgānos (2. att. E). Konsekventi IHC rezultāti apstiprināja arī to, ka hAMSC uzlaboja patoloģiskas izpausmes (2. att. F). Šie rezultāti liecināja, ka hAMSC bija potenciāls uzlabot aGVHD simptomus aGVHD pelēm.
hAMSC ietekmēja saimnieka imunitāti aGVHD pelēm
Lai saprastu pamatā esošos imūnmodulējošos mehānismus, ar kuriem hAMSC samazina aGVHD, mēs izmērījām T šūnu aktivāciju un paplašināšanos perifērajās asinīs un mērķa orgānos. Plūsmas citometrijas tests atklāja, ka hAMSC ievērojami kavē CD3+CD4+T un CD3+CD8+T šūnu skaitu asinīs un mērķa orgānos (3.A att., B). Turklāt CD4+CD25+Foxp3+Treg īpatsvars peļu asinīs un mērķa orgānos hAMSCs grupā bija ievērojami augstāks nekā aGVHD grupā (3. C attēls). . Tālāk mēs pētījām hAMSC ietekmi uz citokīnu profilu (4. att.). hAMSC ievadīšana izraisīja acīmredzamu IL-17A, IFN-, TNF, IL-6 un IL-2 līmeņa pazemināšanos mērķa orgānos un asinīs, salīdzinot ar aGVHD grupas līmeni, izņemot TNF līmeni liesā. Pa to laiku, papildus IL-10 līmenim aknās, ar hAMSC ārstētajām pelēm mērķa orgānos un asinīs bija ievērojami paaugstināts IL-10 un IL-4 līmenis. Kopumā hAMSC spēlēja aizsargājošu lomu aGVHD, mainot T šūnu apakšgrupu imūnsistēmas nelīdzsvarotību un citokīnu vētru.
Citanche tubulosa priekšrocības- stiprināt imūnsistēmu
Noklikšķiniet šeit, lai skatītu Cistanche Enhance Immunity produktus
【Jautājiet vairāk】 E-pasts:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
hAMSCs uzlaboja zarnu barjeras bojājumus aGVHD pelēm
Lai izpētītu, vai hAMSC varētu labot zarnu barjeru aGVHD, mēs vispirms novērojām, vai hAMSC varētu migrēt uz zarnām. Kā parādīts 5.A attēlā, ar GFP iezīmēti hAMSC tika konstatēti zarnās pēc injekcijas hAMSCs un varēja ieaugt un infiltrēties zarnās. Pēc tam mēs izstrādājām tievo zarnu audu histopatoloģisku novērtējumu. AGVHD grupā zarnas bija erozijas un nekrotiskas, zarnu bārkstiņas bija acīmredzami iznīcinātas, bārkstiņas bija salauztas un masīvi leikocīti iefiltrējās zarnu gļotādā, submucosa un lamina propria. Zarnu bārkstiņas tika regulāri sakārtotas, un pēc ārstēšanas ar hAMSCs nebija zarnu bārkstiņu lūzuma vai kaļķakmens epitēlija atdalīšanās (5.B att.). Cilvēka limfocītu infiltrācija tika novērota arī ar imūnhistoķīmiju zarnās aGVHD grupā, bet ārstēšana ar hAMSCs varēja samazināt to infiltrāciju (5. C att.). Lai novērtētu hAMSC aizsargājošo iedarbību uz zarnu gļotādas integritāti, mēs veicām imūnhistoķīmiju, lai noteiktu ietekmi uz ZO-1. HAMSCs ārstēšanas grupā ciešā savienojuma proteīna ZO-1 ekspresijas līmenis bija ievērojami paaugstināts, salīdzinot ar aGVHD grupu (5. att.). Mēs arī pārbaudījām zarnu saspringto savienojumu proteīnu (TJ) mRNS ekspresijas līmeni un D-pienskābes (D-LA) un diamīnoksidāzes (DAO) līmeni plazmā, lai noteiktu zarnu barjeras funkciju un zarnu caurlaidību. Ievadot intravenozi, hMASCs var ievērojami palielināt ZO-1 un Occludin, galveno TJ proteīnu, mRNS ekspresijas līmeni (5. E, F att.), vienlaikus samazinot D-LA un DAO līmeni (5. G. att., H). Tādējādi, kad notika aGVHD, zarnu barjera tika bojāta, samazinot zarnu saspringto savienojumu proteīnus un palielinot zarnu caurlaidību. Tikmēr hAMCS varētu ievērojami mainīt zarnu barjeras traucējumus.
1. att. hAMSC fenotipiskais un funkcionālais raksturojums. (A) Reprezentatīvi hAMSC mikrogrāfi no 0 līdz 3. fragmentam (bez krāsošanas, 100 ×). (B) HAM SC daudzrindu diferenciācijas spēja. HAMSC adipogēnā diferenciācija (pa kreisi) tika iekrāsota ar Oil Red-O, un hAMSC osteoblastiskā diferenciācija (pa labi) tika iekrāsota ar Alizarin Red (krāsošana, 100 ×). (C) Plūsmas citometriskā analīze, kas norāda, ka hAMSC ir pozitīvi attiecībā uz CD90, CD105 un CD73, bet negatīvi attiecībā uz CD34, CD45, CD11b un HLA-DR
2. att. hAMSCs atviegloja aGVHD NPG pelēm. (A) Shematiska diagramma, kas ilustrē hAMSC ievadīšanas grafiku aGVHD peles modeļos. (B) Ķermeņa svara izmaiņas dažādās grupās (n=10). (C) aGVHD klīniskais rādītājs (pamatojoties uz svara zudumu, izliektu stāju, nobrāztu kažokādu, ādas bojājumiem, ierobežotu mobilitāti un caureju) dažādās grupās (n{2}}). (D) Izdzīvošana starp dažādām grupām (n=10). (E) Reprezentatīvi mikroskopiski attēli ar H&E krāsojumu (400 ×) un histoloģisko punktu skaitu (pamatojoties uz audu struktūras iznīcināšanu un limfocītu inflāciju) (n=4). (F) Reprezentatīvi imūnhistoķīmijas mikroskopiski attēli (400 ×) un CD45 pozitīvā laukuma proporcija (n =4). Vērtības tika uzrādītas kā vidējās ± SD
3. attēls hAMSCs inhibēja donora T šūnu paplašināšanos, vienlaikus uzlabojot Tregs veidošanos vai paplašināšanos in vivo. (A) CD3+CD4+T šūnu(n=6) plūsmas citometrijas analīze, (B) CD3+CD8+ plūsmas citometrijas analīze. T šūnas(n=6), (C) CD4+CD25+Foxp3+Tregs (n=6) plūsmas citometrijas analīze. Vērtības tika uzrādītas kā vidējās ± SD
4. attēls: hAMSC pazemināja pro-iekaisuma citokīnu IL-17A, IFN-, TNF, IL-6, IL-2 un paaugstināja pretiekaisuma citokīnu IL-10 un IL regulējumu. -4 in vivo (n=5). Vērtības tika uzrādītas kā vidējās ± SD
Zarnu mikrobiotas maiņas pēc hAMSC ārstēšanas aGVHD pelēm
16S rRNS sekvencēšana tika veikta fekālo baktēriju DNS, kas izolēta no dažādām peļu grupām. -Daudzveidības indeksi, tostarp OUT, Chao1 un Shannon indeksi, izpaudās līdzīgas tendences, un hAMSCs ārstēšanas pelēm bija mikrobiota ar ievērojami augstāku daudzveidību salīdzinājumā ar aGVHD grupu (6. att.). Galvenā koordinātu analīze (PCoA), kas balstīta uz Unifraka attālumu, Manhetenas attālumu un Breja-Kērtisa metrisko attālumu, sniedza izkliedētus datu punktus abu grupu gabalos, lai gan atšķirība nebija nozīmīga (6. B att.). Pēc tam mēs novērtējām zarnu mikrobiotas ainavu, lai turpinātu pētīt iespējamo sastāva atšķirību starp abām grupām. Kopā tika aprēķināti 773 OTU, un hAMSCs grupai bija augstāki OTU, salīdzinot ar aGVHD grupu (6. C attēls). Attiecībā uz baktēriju sastāvu patvēruma līmenī Firmicutes un Bacteroidetes bija divi dominējošie patversmi (6. D attēls). Mēs arī organizējām salīdzināšanas siltuma karti zarnu mikrobiotas analīzei starp abām grupām (6. att. E). Odoribacter un Ruminococcus{11}} ģints uzrādīja salīdzinoši lielu daudzumu hAMSC grupā, kas ir svarīgi mikrobi zarnu homeostāzes uzturēšanai (6. F, G att.). Lai apstiprinātu, kuru baktēriju mainīja ārstēšana ar hAMSC un kas savukārt ietekmēja slimības progresēšanu pret aGVHD, mēs veicām augstas dimensijas klases salīdzinājumus, izmantojot efekta lieluma lineāro diskriminācijas analīzi (LEfSe), kas atklāja ievērojamas atšķirības baktēriju kopienu pārsvarā starp. abas grupas. Kā parādīts (6.H, I att.), Streptococcaceae (Streptococcus ģimene un ģints), Paludibacteraceae, F0058 un Delftia bija galvenie baktēriju veidi, kas veicina zarnu mikrobiotas disbiozi aGVHD grupā. Neskatoties uz to, labvēlīgās baktērijas Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter un Clostridia (Clostridiales klase un kārtas) uzrādīja relatīvu bagātināšanos hAMSCs grupā, kas varētu būt saistīta ar hAMSCs mediētu aGVHD mazināšanu. Kopumā zarnu mikrobiotas daudzveidība un sastāvs tika uzlaboti pēc hAMSC ievadīšanas un mainījās vispārējā tendencē, kas bija labvēlīga ķermenim.
cistanche tubulosa-uzlabo imūnsistēmu
hAMSC regulēja mijiedarbību starp zarnu mikrobiotu un zarnu imunitāti
Lai saprastu iespējamo saistību starp zarnu mikrobiotu un zarnu gļotādas barjeru, korelācijas starp TJ un zarnu mikrobiotu ģints līmenī tika analizētas, izmantojot Spīrmena korelācijas analīzi. Kā parādīts 7. attēlā, pastāvēja pozitīva saistība starp ZO-1 un labvēlīgajām baktērijām Ruminococcaceae_UCG.014, Muribaculum, Ruminococcus_1 un Ruminiclostridium_9. Noderīgo baktēriju Roseburia, Odoribacter, Ruminococcus_1 un Ruminococcaceae_UCG.014 relatīvais daudzums uzrādīja dramatiski pozitīvu korelāciju ar Occludin. Pēc tam mēs veicām korelācijas analīzi starp zarnu mikrobiotu un zarnu imūno barjeru, izmantojot Spīrmena rangu korelācijas metodi (7. att.). Mēs novērojām, ka Roseburia, Muribaculum un Ruminococcus _1 pieaugums bija negatīvi korelēts ar CD3 +CD4+T šūnu procentuālo daudzumu. Turklāt labvēlīgo baktēriju Ruminococcus_1 un Ruminiclostridium _9 skaita pieaugums bija pozitīvi korelēts ar Tregu procentuālo daudzumu, bet negatīvi korelēja ar IL-17. Lactobacillus un Candidatus{16}}Arthromitus pārpilnība bija negatīvi korelēta ar IFN-. Bija negatīva korelācija starp Muribaculum pārpilnību un IL-2. Candidatus{19}}Saccharimonas skaita pieaugums un Escherichia skaita samazināšanās. Shigella pārpilnība bija pozitīvi korelēta ar IL-10 līmeni (7. attēls). Korelācijas analīzes rezultāti liecināja, ka hAMSC uzlaboja saimnieka iekaisuma vidi un regulēja zarnu homeostāzi, kas var būt saistīta ar zarnu mikrobiotas modulāciju, un tādējādi novērsa aGVHD.
5. attēls hAMSCs uzlaboja zarnu barjeras disfunkciju aGVHD pelēm. (A) GFP marķēti hAMSC, kas infiltrēti zarnās. (B) Reprezentatīvi mikroskopiski attēli ar zarnu H&E krāsošanu (400 ×) un histoloģijas punktu skaitu (pamatojoties uz audu struktūras iznīcināšanu un limfocītu infiltrāciju) (n=4). (C) reprezentatīvi mikroskopiski zarnu imūnhistoķīmijas attēli (400 ×) un CD45 pozitīvā laukuma proporcija (n =4). (D) Reprezentatīvi mikroskopiski zarnu imūnhistoķīmijas attēli (400 ×) un ZO-1 pozitīvā laukuma proporcija (n=4). (E) ZO-1 un Occludin (n=3) mRNS ekspresijas līmeņi. (F) D-LA un DAO līmenis plazmā (n=4).Vērtības tika uzrādītas kā vidējās ± SD
Diskusija
Uzlabotā mikrobu analīze ir sniegusi jaunu ieskatu sarežģītajā mijiedarbībā starp saimniekorganismu un zarnu mikrobiotu [18]. Zarnu mikrobiota var tikt mainīta pēc allo-HSCT, un tā ir cieši saistīta ar aGVHD, kas liecina, ka zarnu mikrobiota var būt jauns aGVHD ārstēšanas mērķis [5]. Daudzi pētījumi, tostarp mūsu nesenais pētījums, ir izpētījuši un apstiprinājuši MSC terapeitisko iedarbību uz aGVHD [15, 19, 20]. Tomēr ietekme uz zarnu mikrobiotu šajā periodā joprojām nav skaidra. Šajā pētījumā mēs pētījām hAMSC ietekmi uz aGVHD un tā iespējamos mehānismus in vivo. Saskaņā ar iepriekšējiem pētījumiem [15, 21–23], mūsu rezultāti liecināja, ka hAMSC ir labvēlīga aizsargājoša iedarbība uz aGVHD pelēm, par ko liecina novājināti aGVHD simptomi un ilgstoša izdzīvošana. Mēs arī parādījām, ka hAMSCs parādīja imūnsupresīvu efektu, samazinot donora T šūnu paplašināšanos, vienlaikus uzlabojot Tregs veidošanos aGVHD. Tikmēr hAMSCs var pazemināt iekaisuma citokīnus un paaugstināt pretiekaisuma citokīnus in vivo, lai kavētu iekaisuma reakcijas. Zarnu barjera, blīva struktūra, kas sastāv no zarnu epitēlija šūnu monoslāņa, saglabā savu integritāti un novērš luminālās mikrobiotas pārvietošanos veselīgā stāvoklī [24]. Allo-HSCT laikā kondicionēšanas pulki bojā zarnu barjeru, kas ir sākotnējais solis aGVHD attīstībā, jo tas ļauj baktērijām pārvietoties pāri barjerai un izraisa zarnu imūnās homeostāzes traucējumus [24, 25]. Uzkrājošie pierādījumi liecina, ka MSC piemīt spēja atjaunot audus, kas, kā pierādīts, labo zarnu barjeras integritāti kolīta pelēm [26]. Stingras savienojuma olbaltumvielām, tostarp ZO-1 un Occludin, ir būtiska loma zarnu barjeras funkcijā, un zarnu mikrobiotas pārvietošanās pāri traucētajai zarnu barjerai izraisa iekaisumu [27]. D-LA ir iegūts no zarnu baktērijām, un DAO galvenokārt koncentrējas zarnu gļotādā. Tādējādi augsta D-LA un DAO koncentrācija plazmā var daļēji atspoguļot izmaiņas zarnu caurlaidībā un zarnu barjeras funkcijā [28]. Pašlaik mēs noskaidrojām, ka TJ ekspresijas līmenis dramatiski palielinājās pēc hAMSC ievadīšanas, bet D-LA un DAO līmenis plazmā ievērojami samazinājās, norādot, ka hAMSC var uzlabot zarnu barjeras disfunkciju un atjaunot zarnu caurlaidību. Zarnas ir viens no orgāniem, ko vissmagāk skārusi aGVHD, un pētījumi ir parādījuši, ka baktērijām, jo īpaši zarnu mikrobiotai, ir galvenā loma aGVHD patoģenēzē un attīstībā [5, 6]. Kā ziņots iepriekšējos pētījumos, allo HSCT pacientu baktēriju daudzveidības zudums bija saistīts ar paaugstinātu mirstību no aGVHD [29, 30]. Oportūnistisku patogēnu Enterococcus un Proteobacteria dominēšana fekālijās ir saistīta arī ar paaugstinātu GVHD [6, 31]. Pēdējo desmitgažu laikā pastiprināta uzmanība ir pievērsta korelācijai starp zarnu mikrobiotu un MSC ārstēšanu iekaisuma slimību gadījumā. Ir pierādīts, ka MSC uzlabo zarnu mikrobiotas disbiozi reimatoīdā artrīta, sepses un iekaisīgas zarnu slimības gadījumā [32–34]. Lai turpinātu izpētīt mehānismu, ar kuru hAMSC uzlabo aGVHD, mēs pētījām hAMSC ietekmi uz zarnu mikrobiotu. Pašreizējā pētījumā hAMSC ievadīšana uzrādīja ievērojamu ietekmi uz mikrobu kopienu daudzveidību, salīdzinot ar transplantācijas neesamību, norādot, ka pēc hAMSC ārstēšanas var mainīties zarnu mikrobiotas pārpilnība. Tomēr daudzveidības mērījumos nebija būtisku atšķirību, iespējams, abu grupu mazā izlases lieluma vai nepietiekama hAMSC ārstēšanas cikla dēļ. Analīze, izmantojot salīdzināšanas siltuma karti ģints līmeņos, liecināja, ka hAMSC ievadīšana palielināja labvēlīgo baktēriju Odoribacter un Ruminococcus_1 daudzumu zarnu florā, kas bija īso ķēžu taukskābju (SCFA) ražotāji ar pretiekaisuma īpašībām [35]. , 36]. Lai identificētu pamatā esošās dominējošās baktērijas, ko izraisa hAMSC transplantācija, starp abām grupām tika veikta LEfSe analīze. Salīdzinot ar aGVHD grupu, ārstēšana ar hAMSC ievērojami palielināja dažu labvēlīgu mikrobu daudzumu, kas saistīti ar pretiekaisuma iedarbību, piemēram, Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, Clostridia, kas visi tika aprakstīti kā labvēlīgi zarnu mikrobiotas ražošanai [ SCFA metabolīts. 37–42]. Tāpēc mūsu novērojumi liecināja, ka pēc hAMSC ievadīšanas tika uzlabota zarnu mikrobiotas disbioze, kas izpaužas kā uzlabota labvēlīgo baktēriju daudzveidība un palielināts relatīvais daudzums.
6. att. Zarnu mikrobiotas izmaiņas aGVHD pelēm. (A) - daudzveidības salīdzinājums. (B) - daudzveidības salīdzinājums. (C) OTU Venna diagramma. (D) Relatīvais baktēriju daudzums patvēruma līmenī. (E) sugu pārpilnības siltuma karte ģints līmenī. (F) Odoribaktēriju relatīvais daudzums ģints līmenī. (G) Ruminococcus_1 relatīvais daudzums ģints līmenī. (H) Kladogramma, kuras pamatā ir LEfSe analīze. (I) LDA rādītājs, kas aprēķināts no pazīmēm, kas ir atšķirīgas starp aGVHD un hAMSCs grupām. (AI) n=3 peles katrā grupā. Vērtības tika uzrādītas kā vidējās ± SD
aGVHD ir sarežģīts iekaisuma process, ko ierosina zarnu barjeras integritātes iznīcināšana, kam seko zarnu mikrobiotas un to komponentu pārvietošana. Ar bojājumiem saistītu molekulāro modeļu un patogēnu molekulāro modeļu atpazīšana, ko veic antigēnu prezentējošās šūnas, izraisa pro-iekaisuma reakciju, tostarp T šūnu aktivizēšanu un citokīnu vētru, lai pastiprinātu zarnu barjeras bojājumus un veicinātu aGVHD attīstību [24, 43]. No otras puses, zarnu mikrobiotai un no mikrobiotas iegūtiem metabolītiem, piemēram, SCFA, ir svarīga loma zarnu barjeras integritātes un zarnu homeostāzes uzturēšanā, kā arī gļotādas imūnsistēmas veidošanā un saimniekorganisma aizsardzības līdzsvarošanā ar mikrobu komponentiem un metabolītiem [24, 44] . Saskarsme starp saimniekorganismu un zarnu mikrobiotu pie zarnu barjeras regulē gļotādas un sistēmiskas imūnās atbildes reakcijas un patoloģiskos stāvokļos var izraisīt GVHD [6, 45, 46]. Tas liecināja, ka zarnu mikrobiota ir cieši saistīta ar saspringto savienojumu proteīnu ekspresiju [47]. Šis pētījums parādīja, ka TJ ZO-1 un Occludin mRNS ekspresija negatīvi korelēja ar kaitīgo baktēriju relatīvo daudzumu, turpretim tai bija pozitīva korelācija ar labvēlīgajām baktērijām, norādot, ka zarnu mikrobiota ir svarīga, lai saglabātu zarnu barjera. Turklāt zarnu mikrobiota ir ļoti svarīga arī zarnu imūnās barjeras uzturēšanā [47]. Mēs novērojām, ka dažas no labvēlīgajām baktērijām bija negatīvi korelētas ar CD3+CD4+T šūnu procentuālo daudzumu, bet pozitīvi korelēja ar Tregu procentuālo daudzumu. Šeit mēs atklājām, ka labvēlīgās baktērijas, galvenokārt SCFA ražotāji, bija negatīvi korelētas ar pretiekaisuma citokīniem, bet pozitīvi korelēja ar pretiekaisuma citokīniem, savukārt kaitīgās baktērijas ir tieši saistītas. Rezumējot, ievērojamā atšķirība zarnu mikrobiotā starp ārstēšanu liecināja par pilnīgu priekšstatu par mijiedarbību starp zarnu mikrobiotu un zarnu barjeru, imunitāti. Mūsu eksperimentos joprojām bija vairāki ierobežojumi, kurus vērts apspriest. Pirmkārt, lai gan mūsu pētījumā tika pētīta hAMSC ietekme uz imunitāti, zarnu barjeru un zarnu mikrobiotu aGVHD, pamatā esošais mehānisms joprojām ir jāpārbauda turpmākajā pētījumā. Otrkārt, ir nepieciešama zarnu mikrobiotas izsīkšana un fekālo mikrobiotas transplantācija, lai novērstu cēloņsakarības starp zarnu mikrobiotu, zarnu barjeru un imunitāti. Treškārt, ir nepieciešami turpmāki pētījumi, kas pēta hAMSC ietekmi uz mikrobiotas iegūtiem SCFA un citiem metabolītiem. Visbeidzot, mūsu pētījums liecināja, ka hAMSC atviegloja aGVHD, veicinot zarnu mikrobiotas normalizāciju un regulējot mijiedarbību starp zarnu mikrobiotu un zarnu barjeru, imunitāti. Mūsu pētījums ir pirmais, kas sistemātiski nosaka hAMSC ietekmi un pamatā esošos mehānismus, kas regulē zarnu mikrobiotu un zarnu imunitāti aGVHD.
7. att. Korelācijas analīze starp zarnu mikrobiotu un zarnu imunitāti. Spīrmena korelācijas analīze tika veikta starp 15 dažādu zarnu mikrobiotu relatīvo pārpilnību (ģints līmenī) un TJ mRNS ekspresijas līmeni, imūno šūnu procentuālo daudzumu, kā arī citokīnu koncentrāciju zarnās starp abām grupām. Spīrmena r vērtības svārstās no -0,5 (zils) līdz 0,5 (sarkans)
Atsauces
1. Schmid, C. (2021). Solis tuvāk GVL bez GVHD. Blood, 137(19), 2565–2566. https://doi.org/10.1182/blood.2020010132
2. Chang, Y., Zhao, X. & Huang, X. (2018). Stratēģijas, lai uzlabotu un saglabātu pretleikēmijas efektu, nepasliktinot transplantāta pret saimniekorganismu slimību. Frontiers in Immunology, 9, 3041. https://doi.org/10.3389/fmmu.2018.03041
3. Zhu, W., Winter, MG, Byndloss, MX, Spiga, L., Duerkop, BA, Hughes, ER, Büttner, L., de Lima Romão, E., Behrendt, CL, Lopez, CA, Sifuentes- Dominguez, L., Huf-Hardy, K., Wilson, RP, Gillis, CC, Tükel, Ç., Koh, AY, Burstein, E., Hooper, LV, Bäumler, AJ, & Winter, SE (2018). Precīza zarnu mikrobiotas rediģēšana uzlabo kolītu. Nature, 553(7687), 208–211. https://doi.org/10.1038/nature25172
4. Zhao, L., Zhang, F., Ding, X., Wu, G., Lam, YY, Wang, X., Fu, H., Xue, X., Lu, C., Ma, J. , Yu, L., Xu, C., Ren, Z., Xu, Y., Xu, S., Shen, H., Zhu, X., Shi, Y., Shen, Q., … Zhang, C (2018). Zarnu baktērijas, ko selektīvi veicina uztura šķiedras, atvieglo 2. tipa cukura diabētu. Science (Ņujorka, NY), 359(6380), 1151–1156. https://doi.org/10.1126/science.aao5774
5. Shono, Y. un van den Brink, MRM (2018). Zarnu mikrobiotas bojājums alogēnās hematopoētiskās cilmes šūnu transplantācijā. Dabas apskati. Cancer, 18(5), 283–295. https://doi.org/10.1038/ nrc.2018.10
6. Stafas, A., Burgos da Silva, M. un van den Brink, MRM (2017). Zarnu mikrobiota alogēnās hematopoētisko šūnu transplantācijā un transplantāta pret saimniekorganismu slimībā. Blood, 129(8), 927–933. https://doi.org/10.1182/blood{10}}
7. Wu, K., Yuan, Y., Yu, H., Dai, X., Wang, S., Sun, Z., Wang, F., Fei, H., Lin, Q., Jiang, H. ., & Chen, T. (2020). Zarnu mikrobu metabolīts trimetilamīna N-oksīds saasina GVHD, izraisot M1 makrofāgu polarizāciju pelēm. Blood, 136(4), 501–515. https://doi.org/10.1182/blood.2019003990
8. Mathewson, ND, Jenq, R., Mathew, AV, Koenigsknecht, M., Hanash, A., Toubai, T., Oravecz-Wilson, K., Wu, S., Sun, Y., Rossi, C. ., Fujiwara, H., Byun, J., Shono, Y., Lindemans, C., Calafore, M., Schmidt, TM, Honda, K., Young, VB, Pennathur, S., … Reddy, P. (2016). No zarnu mikrobiomiem iegūtie metabolīti modulē zarnu epitēlija šūnu bojājumus un mazina transplantāta pret saimniekorganismu slimību. Nature Immunology, 17(5), 505–513. https://doi.org/10.1038/ni.3400
9. Dave, JR, Chandekar, SS, Behera, S., Desai, KU, Salve, PM, Sapkal, NB, Mhaske, ST, Dewle, AM, Pokare, PS, Page, M., Jog, A., Chivte , PA, Srivastava, RK, & Tomar, GB (2022). Cilvēka smaganu mezenhimālās cilmes šūnas saglabā savas augšanas un imūnmodulējošās īpašības neatkarīgi no donora vecuma. Science Advances, 8(25), m6504. https://doi.org/10. 1126/sciadv.abm6504
10. Zhao, K., & Liu, Q. (2016). Mezenhimālo stromas šūnu klīniskais pielietojums hematopoētisko cilmes šūnu transplantācijā. Journal of Hematology & Oncology, 9(1), 46. https://doi.org/ 10.1186/s13045-016-0276-z
11. Liu, Q., Huang, Q., Wu, H., Zuo, G., Gu, H., Deng, K., & Xin, H. (2021). No cilvēka amnija iegūto cilmes šūnu raksturojums un terapeitiskais potenciāls. International Journal of Molecular Sciences, 22(2), 970. https://doi.org/10.3390/ijms22020970
12. Li, J., Zhou, Z., Wen, J., Jiang, F. un Xia, Y. (2020). Cilvēka amnija mezenhimālās cilmes šūnas veicina endogēno kaulu atjaunošanos. Frontiers in Endocrinology, 11, 543623. https://doi.org/10.3389/fendo.2020.543623
13. Dias-Prado, S., Muiños-López, E., Hermida-Gómez, T., Cicione, C., Rendal-Vázquez, ME, Fuentes-Boquete, I., de Toro, FJ, Blanco, FJ ( 2011). Cilvēka amnija membrāna kā alternatīvs cilmes šūnu avots reģeneratīvajai medicīnai. diferenciācija; Pētījumi bioloģiskajā daudzveidībā, 81(3), 162–171. https://doi.org/10.1016/j.dif.2011.01.005
14. Hong, J., Gao, Y., Song, J., Zhuo, W., Sun, H. un Ping, B. (2016). Bioloģisko īpašību un imūnsupresīvās aktivitātes salīdzinājums starp cilvēka amnija mezenhimālajām cilmes šūnām un cilvēka kaulu smadzeņu mezenhimālajām cilmes šūnām. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi, 24(3), 858–864. https://doi.org/10.7534/j.issn.{8}}.2016.03.041
15. Gao, Y., Li, W., Bu, X., Xu, Y., Cai, S., Zhong, J., Du, M., Sun, H., Huang, L., He, Y. ., Hu, X., Liu, Q., Jin, H., Wang, Q. un Ping, B. (2021). Cilvēka amnija mezenhimālās cilmes šūnas inhibē aGVHD, regulējot Treg un T efector šūnu līdzsvaru. Iekaisuma pētījumu žurnāls, 14, 3985–3999. https://doi.org/10.2147/ JIR.S323054
16. Cooke, KR, Kobzik, L., Martin, TR, Brewer, J., Delmonte, JJ, Crawford, JM un Ferrara, JL (1996). Idiopātiskās pneimonijas sindroma eksperimentāls modelis pēc kaulu smadzeņu transplantācijas: I. Mazo H antigēnu un endotoksīna lomas. Blood, 88(8), 3230–3239.
17. Yañez, R., Lamana, ML, García-Castro, J., Colmenero, I., Ramírez, M., & Bueren, JA (2006). No taukaudiem iegūtām mezenhimālajām cilmes šūnām ir in vivo imūnsupresīvas īpašības, kas piemērojamas transplantāta pret saimniekorganismu slimības kontrolei. Cilmes šūnas (Dayton, Ohaio), 24(11), 2582–2591.
18 Hooper, LV, Littman, DR un Macpherson, AJ (2012). Mijiedarbība starp mikrobiotu un imūnsistēmu. Science (Ņujorka, NY), 336(6086), 1268–1273. https://doi.org/10.1126/ science.1223490
19. Kelly, K. un Rasko, JEJ (2021). Mezenhimālās stromas šūnas transplantāta pret saimnieku slimības ārstēšanai. Frontiers in Immunology, 12, 761616. https://doi.org/10.3389/fmmu.2021.761616
20. Macías-Sánchez, MDM, Morata-Tarifa, C., Cuende, N., Cardesa-Gil, A., Cuesta-Casas, M. Á., Pascual-Cascon, MJ, Pascual, A., Martín-Calvo , C., Jurado, M., Perez-Simón, JA, Espigado, I., Garzón López, S., Carmona Sánchez, G., Mata-Alcázar-Caballero, R., & Sánchez-Pernaute, R. (2022) ). Mezenhimālās stromas šūnas pret steroīdiem rezistentu akūtu un hronisku transplantāta pret saimniekorganismu slimību ārstēšanai: daudzcentru līdzjūtīgas lietošanas pieredze. Stem Cells Translational Medicine, 11(4), 343–355. https://doi.org/10.1093/ stcltm/szac003
21. Tago, Y., Kobayashi, C., Ogura, M., Wada, J., Yamaguchi, S., Yamaguchi, T., Hayashi, M., Nakaishi, T., Kubo, H., & Ueda, Y. (2021). No cilvēka amnija atvasinātās mezenhimālās cilmes šūnas mazina ksenogēno transplantāta pret saimniekorganismu slimību, novēršot T šūnu aktivāciju un proliferāciju. Scientifc Reports, 11(1), 2406. https://doi. org/10.1038/s{10}}g
22. Yamahara, K., Harada, K., Ohshima, M., Ishikane, S., Ohnishi, S., Tsuda, H., Otani, K., Taguchi, A., Soma, T., Ogawa, H. ., Katsuragi, S., Yoshimatsu, J., Harada-Shiba, M., Kangawa, K., & Ikeda, T. (2014). Cilvēka no amnija un horiona iegūto mezenhimālo cilmes šūnu angiogēno, citoprotektīvo un imūnsupresīvo īpašību salīdzinājums. PLoS One, 9(2), e88319. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0088319
23. Yamahara, K., Hamada, A., Soma, T., Okamoto, R., Okada, M., Yoshihara, S., Yoshihara, K., Ikegame, K., Tamaki, H., Kaida, K. ., Inoue, T., Ohsugi, Y., Nishikawa, H., Hayashi, H., Ito, YM, Iijima, H., Ohnishi, S., Hashimoto, D., Isoe, T., … Fujimori, Y. (2019). No amnija atvasināto mezenhimālo cilmes šūnu (AM01) drošība un efektivitāte pacientiem ar steroīdiem rezistentu akūtu transplantāta pret saimniekorganismu slimību pēc alogēnas hematopoētisko cilmes šūnu transplantācijas: pētījuma protokols Japānas I/II fāzes pētījumam. BMJ Open, 9(7), e26403. https://doi.org/10.1136/bmjop en-2018-026403
24. Lin, D., Hu, B., Li, P., Zhao, Y., Xu, Y., & Wu, D. (2021). Zarnu mikrobiotas un mikrobu metabolītu loma akūtā GVHD. Experimental Hematology & Oncology, 10(1), 49. https://doi.org/10.1186/s40164-021-00240-3
25. Ghimire, S., Weber, D., Mavin, E., Wang, XN, Dickinson, AM un Holler, E. (2017). GvHD un citu ar HSCT saistītu galveno komplikāciju patofizioloģija. Frontiers in Immunology, 8, 79. https://doi.org/10.3389/fmmu.2017.00079
26. Xu, J., Wang, X., Chen, J., Chen, S., Li, Z., Liu, H., Bai, Y., & Zhi, F. (2020). No embriju cilmes šūnām iegūtās mezenhimālās cilmes šūnas veicina resnās zarnas epitēlija integritāti un reģenerāciju, paaugstinot cirkulējošo IGF-1 kolīta pelēm. Theranostics, 10(26), 12204–12222. https://doi.org/10.7150/thno.47683
27. Zhao, Y., Huang, J., Li, T., Zhang, S., Wen, C., & Wang, L. (2022). Berberīns uzlabo aGVHD, veicot zarnu mikrobiotas pārveidošanu, TLR4 signālu nomākšanu un resnās zarnas barjeras labošanu NLRP3 iekaisuma inhibīcijai. Journal of Cellular and Molecular Medicine, 26(4), 1060–1070. https://doi.org/10. 1111/jcmm.17158
28. Yuan, M., Lin, L., Cao, H., Zheng, W., Wu, L., Zuo, H., Tian, X., & Song, H. (2022). Zarnu mikrobiota piedalās HO-1/BMMSC aizsargājošajā iedarbībā uz aknu transplantāciju ar steatotiskiem aknu transplantātiem žurkām. Frontiers in Microbiology, 13, 905567. https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.905567
29. Taur, Y., Jenq, RR, Perales, M., Littmann, ER, Morjaria, S., Ling, L., No, D., Gobourne, A., Viale, A., Dahi, PB, Ponce , DM, Barker, JN, Giralt, S., van den Brink, M. un Pamer, EG (2014). Zarnu trakta baktēriju daudzveidības ietekme uz mirstību pēc alogēnas hematopoētisko cilmes šūnu transplantācijas. Blood, 124(7), 1174–1182. https://doi.org/10.1182/ blood-2014-02-554725
30. Jenq, RR, Taur, Y., Devlin, SM, Ponce, DM, Goldberg, JD, Ahr, KF, Littmann, ER, Ling, L., Gobourne, AC, Miller, LC, Docampo, MD, Peled, JU, Arpaia, N., Cross, JR, Peets, TK, Lumish, MA, Shono, Y., Dudakov, JA, Poeck, H., … van den Brink, MRM (2015). Zarnu Blautia ir saistīta ar samazinātu mirstību no transplantāta pret saimniekorganismu slimības. Asins un smadzeņu transplantācijas bioloģija: Amerikas Asins un smadzeņu transplantācijas biedrības žurnāls, 21 (8), 1373–1383. https://doi.org/10.1016/j.bbmt.2015.04.016
31. Le Bastard, Q., Chevallier, P. un Montassier, E. (2021). Zarnu mikrobioms alogēnās hematopoētiskās cilmes šūnu transplantācijā un specifiskas izmaiņas, kas saistītas ar akūtu transplantāta un saimnieka slimību. World Journal of Gastroenterology, 27(45), 7792–7800. https:// doi.org/10.3748/wjg.v27.i45.7792
32. Li, X., Lu, C., Fan, D., Lu, X., Xia, Y., Zhao, H., Xu, H., Zhu, Y., Li, J., Liu, H. ., & Xiao, C. (2020). Cilvēka nabas mezenhimālajām cilmes šūnām ir terapeitisks potenciāls reimatoīdā artrīta gadījumā, regulējot mijiedarbību starp imunitāti un zarnu mikrobiotu, izmantojot Aryl ogļūdeņraža receptoru. Robežas šūnu un attīstības bioloģijā, 8, 131. https://doi.org/10.3389/fcell.2020.00131
33. Sun, J., Ding, X., Liu, S., Duan, X., Liang, H., & Sun, T. (2020). No taukiem iegūtas mezenhimālās cilmes šūnas mazina akūtu plaušu bojājumu un uzlabo zarnu mikrobiotu septiskām žurkām. Stem Cell Research & Therapy, 11(1), 384. https://doi.org/10.1186/ s13287-020-01902-5
34. Soontararak, S., Chow, L., Johnson, V., Coy, J., Wheat, W., Regan, D. un Dow, S. (2018). Mezenhimālās cilmes šūnas (MSC), kas iegūtas no inducētām pluripotentām cilmes šūnām (iPSC), kas ir līdzvērtīgas no taukiem iegūtai MSC, veicinot zarnu dziedināšanu un mikrobioma normalizēšanos peles iekaisuma zarnu slimības modelī. Stem Cells Translational Medicine, 7(6), 456–467. https://doi.org/ 10.1002/sctm.{9}}
35. Li, J., Zou, C. un Liu, Y. (2022). Ovalbumīna izraisītas pārtikas alerģijas uzlabošana pelēm, mērķtiecīgi ievadot cianidīna -3-O-glikozīdu taisnās zarnas un resnās zarnas. Foods (Bāzele, Šveice), 11(11), 1542. https://doi.org/10.3390/foods11111542
36. Maruyama, S., Matsuoka, T., Hosomi, K., Park, J., Nishimura, M., Murakami, H., Konishi, K., Miyachi, M., Kawashima, H., Mizuguchi, K. ., Kobayashi, T., Ooka, T., Yamagata, Z., & Kunisawa, J. (2022). Dislipidēmijas rašanās klasifikācija, pamatojoties uz zarnu baktērijām, kas saistītas ar miežu uzņemšanu. Frontiers in Nutrition, 9, 812469. https://doi.org/10.3389/fnut.2022.812469
37. Lee, SH, Park, H., Kang, CD, Choi, DH, Park, SC, Park, JM, Nam, S., Chae, GB, Lee, KY, Cho, H., & Lee, SJ ( 2022). Lielu devu intramuskulāra D3 vitamīna papildināšana ietekmē zarnu mikrobiotu pacientiem ar klostridioides difcila infekciju. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology, 12, 904987. https://doi.org/10.3389/fcimb.2022.904987
38. Meyer, RK, Lane, AI, Weninger, SN, Martinez, TM, Kangath, A., Laubitz, D. un Duca, FA (2022). Oligofruktoze atjauno īsās ķēdes taukskābju līmeni pēc ēšanas, barojot ar augstu tauku saturu. Aptaukošanās (Silver Spring, Md.), 30(7), 1442–1452. https://doi.org/ 10.1002/oby.23456
39. Sang, J, Zhuang, D, Zhang, T, Wu, Q, Yu, J, Zhang, Z (2022) Konverģenta un atšķirīga vecuma modelēšana zarnu mikrobiotas daudzveidībā cilvēkiem un primātiem, kas nav cilvēkveidīgie primāti. M-Systems: e151221. https://doi.org/10.1128/msystems.{6}}
40. Ge, X., He, X., Liu, J., Zeng, F., Chen, L., Xu, W., Shao, R., Huang, Y., Farag, MA, Capanoglu, E. , El-Seedi, HR, Zhao, C. un Liu, B. (2022). 2. tipa cukura diabēta uzlabošana, izmantojot jauno 6, 8-guanidilluteolīna hinona-hroma koordināciju, izmantojot bioķīmiskos mehānismus un zarnu mikrobiotas mijiedarbību. Journal of Advanced Research, S2090–1232(22), 121–129. https://doi.org/ 10.1016/j.jare.2022.06.003
41. Ding, Q., Cao, F., Lai, S., Zhuge, H., Chang, K., Valencak, TG, Liu, J., Li, S., & Ren, D. (2022). Lactobacillus plantarum ZY08 atvieglo hronisku alkohola izraisītu aknu steatozi un aknu bojājumus pelēm, atjaunojot zarnu foruma homeostāzi. Food Research International (Otava, Ont.), 157, 111259. https://doi.org/10. 1016/j.foodres.2022.111259
42. Rees, NP, Shaheen, W., Quince, C., Tselepis, C., Horniblow, RD, Sharma, N., Beggs, AD, Iqbal, TH un Quraishi, MN (2022). Sistemātisks donoru un saņēmēju paredzamo biomarķieru pārskats, kas reaģē uz fekāliju mikrobiotas transplantāciju pacientiem ar čūlaino kolītu. EBioMedicine, 81, 104088. https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.104088
43. Li, A., Abraham, C., Wang, Y. un Zhang, Y. (2020). Jauns ieskats akūtas transplantāta un saimnieka slimības pamatbioloģijā. Haematologica, 105(11), 2540–2549. https://doi.org/10.3324/haematol. 2019.{12}}. Kayama, H., Okumura, R. un Takeda, K. (2020). Mijiedarbība starp mikrobiotu, epitēliju un imūnšūnām zarnās. Imunoloģijas gada apskats, 38, 23–48. https://doi.org/ 10.1146/Annu rev-immunol-070119-115104
45. Schluter, J., Peled, JU, Taylor, BP, Markey, KA, Smith, M., Taur, Y., Niehus, R., Stafas, A., Dai, A., Fontana, E., Amoretti , LA, Wright, RJ, Morjaria, S., Fenelus, M., Pessin, MS, Chao, NJ, Lew, M., Bohannon, L., Bush, A., … Xavier, JB (2020). Zarnu mikrobiota ir saistīta ar imūno šūnu dinamiku cilvēkiem. Daba, 588(7837), 303–307. https://doi.org/10.1038/ s41586-020-2971-8
46. Yang, J, Yang, H, Li, Y (2022) Trīskāršā mijiedarbība starp zarnu mikrobiotu, mikobiotu un saimnieka imunitāti. Pārtikas zinātnes un uztura kritiskie apskati: 1.–21. https://doi.org/10.1080/10408 398.2022.2094888
47. An, J., Liu, Y., Wang, Y., Fan, R., Hu, X., Zhang, F., Yang, J., & Chen, J. (2022). Zarnu gļotādas barjeras loma autoimūnās slimībās: potenciāls mērķis. Frontiers in Immunology, 13, 871713. https://doi.org/10.3389/fmmu.2022.871713