Cistanche Deserticola un tās rīsu vīna tvaicēšanas produktu neiroendokrīni imūnā funkcija glikokortikoīdu izraisītā žurkas modelī-Ⅱ

3.2.4. Imūnhistoķīmija

Neironu apoptozi kontrolē daudzi apoptotiski un antiapoptotiski gēni, galvenokārt apoptozi veicinošais gēns Bax un Bcl-2 gēnu saimes antiapoptotiskie gēni. Bcl-2 ir lokalizēts reaktīvās skābekli ražojošās organellās, piemēram, mitohondrijās, endoplazmatiskajā retikulumā un kodola membrānās. Bcl-2 maz ietekmē skābekļa brīvos radikāļus, bet varnovērst oksidatīvos bojājumus šūnās. Bakss transportē no citoplazmas uz mitohondriju membrānu, maina mitohondriju membrānas struktūru un veicina citohroma c izdalīšanos un apoptozes indukciju.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA SEKSUĀLĀS FUNKCIJAS UZLABOŠANAI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Virsnieru citoplazmā bija Bax un Bcl-2 proteīna ekspresija. Krāsojumā bija visas dzeltenās daļiņas. Salīdzinot ar BC grupu, Bax proteīna vidējais optiskais blīvums MC grupā ievērojami palielinājās (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

5(b) attēlā redzams, ka salīdzinājumā ar BC grupu Bcl-2 proteīna vidējais optiskais blīvums MC grupā ievērojami samazinājās (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

Kaspāzes-3 proteīns sākotnējā formā ir lokalizēts galvenokārt citoplazmā normālos audos, un tam ir zema ekspresija. Pozitīvie signāli ir gaiši dzelteni vai brūngani dzelteni. Salīdzinot ar BC grupu, kaspāzes -3 ekspresija MC grupā ievērojami palielinājās (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

Normālos audos Fas gēna ekspresija tika samazināta, un pozitīvais signāls in situ hibridizācijai bija brūngani dzeltens. Kā parādīts 5(d) attēlā, salīdzinot ar BC grupu, Fas proteīna vidējais optiskais blīvums MC grupā palielinājās (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

FasL proteīns galvenokārt atrodas šūnu membrānā vai citoplazmā, un tā pozitīvie signāli ir brūni. Salīdzinot ar BC grupu, FasL gēna vidējais optiskais blīvums MC grupā ievērojami palielinājās (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

Rezultāti parādīja, ka CD un WCD varētuizraisīt apoptozi iekaisuma šūnāsun samazināt virsnieru bojājumus, veicinot FasL proteīna ekspresiju un saistīšanos ar Fas proteīnu, aktivizējot kaspāzes-3 proteīnu un izraisot kaspāzes kaskādi. WCD-HD grupas efekts bija vislabākais.

3.3. Imūnās funkcijas noteikšana

3.3.1. Imūno orgānu indekss

Salīdzinot ar BC grupu, aizkrūts dziedzera koeficients un liesas indekss MC grupā ievērojami samazinājās (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better. 

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA SEKSUĀLĀS FUNKCIJAS UZLABOŠANAI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. T limfocītu apakšgrupu noteikšana perifērās asinīs

CD{0}} šūnu procentuālais daudzums augšējā kreisajā kvadrantā un CD8+ šūnu procentuālais daudzums labajā apakšējā kvadrantā BC un katrā zāļu grupā bija augstāks nekā MC grupā. Salīdzinot ar BC grupu, CD4+ThCD8+ attiecība ievērojami samazinājās MC grupā (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α un IFN-C līmeņa noteikšana serumā

8. attēlā parādīts, ka salīdzinājumā ar BC grupu IL-6, TNF- un IFN-c līmenis ievērojami palielinājās (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. Laimusa audu mikroskopa novērošanas eksperimenta rezultāti

9. attēlā parādīts, ka BC grupā bija liels skaits limfocītu. Limfocīti un retikulocīti bija brīvi izvietoti centrā ar izkliedētiem apaļiem vai ovāliem timocītiem. Nebija nekrozes, nebija iekaisuma šūnu infiltrācijas un nebija patoloģisku izmaiņu.

MC grupa uzrādīja lielu limfoīdo nekrozes audu daudzumu ar limfocītu un retikulocītu nesakārtotu izvietojumu centrā. Pazuda apaļi vai ovāli timocīti, bija acīmredzama masīva šūnu deģenerācija vai nekroze, un bija iekaisuma šūnu infiltrācija ar patoloģiskām izmaiņām.

CD grupās limfocītu morfoloģiskās īpašības bija normalizējušās, un centrālo limfocītu un retikulocītu izvietojums bija gandrīz normāls. Apaļi vai ovāli timocīti bija atjaunojušies, bet neliels skaits deģeneratīvu vai nekrotisku limfocītu un infiltrējošu iekaisuma šūnu palika.

WCD grupās un PC grupā limfocītu morfoloģiskās īpašības tika labāk salabotas. Limfocīti un retikulocīti centrā bija labi izlīdzināti, apaļie vai ovālie timocīti bija gandrīz normāli, bet saglabājās neliels skaits infiltrējošu un deģeneratīvu limfocītu.

3.4. CaM proteīna gēnu ekspresija

RQ vērtība (CaM mRNS-aktīna mRNS) tika uzskatīta par CaM mRNS ekspresijas pārbaudi. BC grupas RQ bija 1. CaM mRNS ekspresija hipotalāmā MC grupā ievērojami palielinājās (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. Diskusija

Ķīnas farmakopejā [2] teikts, ka CD un WCD var izmantot klīnikā kā galvenos dekocēšanas veidus. Pēc tvaicēšanas ar rīsu vīnu,pretnovecošanās un tonizējoša nieru-jaņ iedarbībatika uzlaboti. Izmantojot UPLC-QqQ-MS, mēs atklājām kvantitatīvās izmaiņas ķīmisko materiālu bāzē rīsu vīna tvaicēšanas procesā. Iridoīdie glikozīdi bija nestabili, un šo glikozīdu saturs samazinājās, pat kļuva nenosakāms. Mainījās arī feniletanola glikozīdu saturs, kas var izraisīt izmaiņas farmakodinamikā un klīniskajā efektā.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA SEKSUĀLĀS FUNKCIJAS UZLABOŠANAI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Klasiskais nieru-jaņ deficīta modelis tika atkārtots ar kortikosterona subkutānu injekciju [19]. Kortikosterona pārdozēšana var kavēt CRH izdalīšanos hipotalāmā. Tikmēr tika kavēts arī AKTH noslēpums. Samazinājās virsnieru garozas hormona līmenis, un tādējādi HPA ass funkcija tika samazināta. HPA ass hipofunkcija ir bieži sastopama nieru-jaņ deficīta pazīme [20]. Tad žurkām parādās "izsīkuma" parādības, un simptomi ir saskaņā ar nieru-jaņ deficīta simptomiem klīnikā.

MC grupā CRH, AKTH, T un CORT līmenis žurku serumā ievērojami samazinājās (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Bcl-2 ģimenes locekļu proporcijas modulēšana ir viens no galvenajiem mehānismiem, ar kuru palīdzību FasThFasL mediē nāves receptoru ceļu, bet Bcl-2 saime regulē mitohondriju ceļu [21]. Apoptozi inhibējošais faktors Bcl-2 un apoptozi inducējošie faktori, piemēram, Bax, pieder Bcl-2 saimei [22]. Šūnu apoptozi var noteikt pēc apoptozi inhibējošo faktoru un apoptozi izraisošo faktoru relatīvās attiecības [23]. Mitohondrijiem ir centrālo kontrolpunktu funkcija daudzām apoptozes formām [24]. Šis pētījums parādīja, ka CD-MD un WCD var secināt par Baksa ekspresiju un palielināt Bcl{13}} līdzuzlabo nieru-jaņ deficītu. Fas ir galvenais nāves receptors, kas izraisa apoptozi, saistot to ar Fas ligandu (FasL) [25]. Fas un FasL ekspresija MC grupā palielinājās, savukārt šī ekspresija ievērojami palielinājās WCD-MD grupā (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

Imūnās funkcijas trūkums ir viena no svarīgākajām nieru-jaņ deficīta izpausmēm [28]. Šajā pētījumā mēs atklājām, ka WCD-MD grupas liesas un aizkrūts dziedzera indekss ievērojami atjaunojās (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

HPA ass ir vissvarīgākā regulējošā sistēma, jo tā regulē glikokortikoīdu sekrēciju un endokrīno sistēmu, lai uzturētu virsnieru garozas sekrēcijas funkciju [32]. CaM mRNS pārmērīga ekspresija hipotalāma audos bija saistīta ar nieru yang deficītu. CD un WCD var bloķēt kalcija kanālus, inhibēt CaM mRNS ekspresiju hipotalāmā un samazināt kalcija pieplūdumu, tādējādi samazinot Ca2+·CaM kompleksa aktivitāti.

Nieru-jaņ deficīta veidošanās ir hronisks slimības attīstības process. Nieres vairs nav tikai anatomisks jēdziens, un tas ir vispārīgs termins neiroendokrīnai imunitātei un uroģenitālās sistēmas. Neiroendokrīni imūnsistēmas (NEI) tīkls ir svarīga integrēta regulēšanas sistēma [33]. CD un WCD var regulēt HPAT ass darbību un uzlabot nieru-yang deficīta atjaunošanos. Šis rezultāts nodrošina eksperimentālu pamatu nieru-jaņ deficīta klīniskai profilaksei un ārstēšanai.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA SEKSUĀLĀS FUNKCIJAS UZLABOŠANAI PHGS75% ECH 30% ACT 12%