2. daļa: Autosomāli dominējošās tubulointersticiālās nieru slimības klīniskie un ģenētiskie spektri UMOD un MUC1 mutāciju dēļ

Kontaktpersona: Odrija Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pasts:audrey.hu@wecistanche.com

Lūdzu, noklikšķiniet šeit, lai skatītu 1. daļu

UMOD rādītājs un urīna UMOD līmeņi, lai vadītu ģenētisko testēšanu ADTKD

Rezultāts tika apstiprināts pacientiem, kuri bija UMOD pozitīvi (n ¼ 124) un UMOD negatīvi (n ¼ 183) no ASV ADTKD reģistra, radot līdzīgi augstu jutību un zemu specifiku UMOD mutācijām, izmantojot robežvērtību 5 USD (sensitivitāte). : 97,6 procenti , specifika: 16,4 procenti , NPV: 91.{11}} procenti , PPV: 44,2 procenti , dati nav parādīti), kopumā padarot ADTKD-UMOD ļoti maz ticamu rezultātu iegūšanai<5. we="" tested="" how="" the="" clinical="" score="" separated="" the="" 2="" most="" common="" etiologies="" of="" adtkd="" in="" a="" subset="" of="" patients="" with="" adtkd-umod="" (n="" ¼="" 125)="" and="" adtkd-muc1="" (n="" ¼="" 80)="" from="" the="" us="" registry="" for="" which="" at="" least="" 5="" of="" the="" 8="" clinical="" items="" and/or="" urinary="" umod="" levels="" were="" available.="" the="" clinical="" umod-score="" alone="" separated="" the="" 2="" entities="" with="" an="" auc="" of="" 0.69="" (95%="" ci:="" 0.62–0.77,="" p="" ¼="" 0.037)="" (figure="" 7a,="" left="" panel).="" however,="" the="" specificity="" for="" umod="" increased="" considerably="" with="" higher="" umod-score="" values="" (for="" instance,="" a="" score="" of="" $8="" had="" a="" sensitivity="" of="" 48.8%,="" a="" specificity="" of="" 83.7%,="" and="" npv="" of="" 50.8%="" and="" a="" ppv="" of="" 81.3%="" for="" umod="" mutation)="" (supplementary="" table="" s5).="" only="" a="" few="" patients,="" mostly="" those="" with="" adtkd-muc1,="" had="" score="" results="" of=""><5 (figure="" 7a,="" right="">

Pēc tam mēs pētījām, vai urīna UMOD līmeņu pievienošana klīniskajam rādītājam uzlaboja tā spēju atšķirt ADTKD-UMOD no ADTKD-MUC1. Pamatojoties uz normalizētajām urīna UMOD vērtībām atsauces populācijā [(mg/g kreatinīna)/eGFR] (5.a attēls, labais panelis), mēs attiecīgi piešķīrām þ1 un þ3 punktus urīna UMOD vērtībām starp vidējo un 25. procentili [( 0,14–0,23 mg/g kreatinīna)/eGFR] un zem 25. procentiles. Līdzīgi mēs attiecīgi piešķīrām 1 un 3 punktus urīna UMOD vērtībām starp vidējo un 75. procentili [(0.23–0.35 mg/g kreatinīna)/eGFR] un virs 75. procentile. Piemērots grupai, kurā bija 51 pacients ar ADTKD-UMOD un 35 pacienti ar ADTKD-MUC1, par kuriem bija pieejami urīna UMOD dati, šis kombinētais klīniskais un bioķīmiskais rādītājs atdalīja ADTKD-UMOD no ADTKD-MUC1 ar uzlabotu AUC par 0 .89.

Cistanche var palīdzēt nieru darbībā

5. attēls| UMOD apstrāde autosomāli dominējošā tubulointersticiālānieresslimība(ADTKD) – UMOD un ADTKD-MUC1. (a) UMOD izdalīšanās ar urīnu, kas normalizēta līdz urīna kreatinīnam (creat) (kreisais panelis) un normalizēta līdz urīna kreatinīnam un aptuvenais glomerulārās filtrācijas ātrums (eGFR) (labais panelis) pacientiem ar ADTKD-MUC1 un ADTKD-UMOD un atsauces populāciju (kontroles) . Ir norādītas vidējās, 25. procentiles un 75. procentiles vērtības atsauces populācijā (labais panelis). Zem diagrammas ir norādītas urīna UMOD (uUMOD), eGFR un parauga lieluma skaitliskās vērtības (mediānas un starpkvartiļu diapazoni). Ārējais rādītājs tika noņemts, izmantojot GraphPad (ROUT Q ¼ 1 procenti), 1-dispersijas analīzes P < 0.0001="" abām="" diagrammām,="" un="" tukey="" vairāku="" salīdzināšanas="" testu="" izmantoja="" bez="" nozīmīgas="" (="" ns)="" un="" ***p="">< 0,0001.="" (b)="" imunofluorescences="" krāsošana="" umod="" (zaļš)="" un="" glikozes="" regulētā="" proteīna="" 78="" (grp78;="" sarkans)="" adtkd-muc1,="" adtkd-umod="" un="" normāla="">nieres(NHK) biopsija. Stieņi ¼ 50 mm. DAPI, 40, 6-diamidino-2-fenilindols. Lai optimizētu šī attēla skatīšanu, lūdzu, skatiet šī raksta tiešsaistes versiju vietnē www.kidney-international.org. CI: 0.82–0.96, P < 0,001).="" robežvērtība="" 5 $="" joprojām="" šķiet="" optimālā="" robežvērtība,="" lai="" atšķirtu="" adtkd-umod="" no="" adtkd-muc1="" (youden="" indekss:="" 0,684)="" ar="" jutīgumu="" 94,1="" procenti,="" specifiku="" 74,3="" procenti,="" npv="" 89,7="" procenti,="" un="" ppv="" 84,2="" procenti="" umod="" mutācijai="" (7.b="" attēls;="" s5="" papildu="" tabula).="" pamatojoties="" uz="" klīnisko="" un="" bioķīmisko="" umod="" rādītāju,="" mēs="" piedāvājam="" diagnostikas="" algoritmu,="" lai="" vadītu="" ģenētisko="" testēšanu="" adtkd="" gadījumā="" (8.="">

DISKUSIJA

Šis starptautiskais kohortas pētījums ir lielākā datu kopa par pacientiem ar ADTKD-UMOD un ADTKD-MUC1, par kuriem ziņots līdz šim, sniedzot jaunu ieskatu par ADTKD galveno apakštipu fenotipu un slimības progresēšanu. Autosomāli dominējošās mantošanas un reģionālās ģimenes klasterizācijas dēļ nacionālajās kohortās ir minētas ievērojamas atšķirības ADTKD apakšgrupu izplatībā.2,15,20 Starptautiskajā ADTKD kohortā ADTKD-UMOD pārstāv visvairāk.

biežs ADTKD apakštips ar aptuveno izplatību 37,1 procenti, kam seko ADTKD-MUC1 35,1 procentos ģimeņu, kurās ir UMOD negatīvs, un aptuvenā kopējā izplatība ir 21.0 procenti. Jāatzīmē, ka 133 ģimenēs, kas ir UMOD negatīvas un MUC{15}}negatīvas, un 141 ģimenē, kurās ir UMOD, tiek veiktas sistemātiskas pūles, lai pārbaudītu mutācijas HNF1B, REN, DNAJB11 un SEC61A1. - negatīvs reģistrā.

Pamatojoties uz lielo izlases lielumu, mēs novērojām atšķirīgas iezīmes ADTKD-UMOD un ADTKD-MUC1 klīniskajā prezentācijā, kas attiecas uz klīnisko praksi un pacientu konsultēšanu.Nieresslimībašķiet smagāks pacientiem ar ADTKD-MUC1, ar lielāku ESKD izplatību (58 procenti pret 44 procentiem ADTKD-UMOD gadījumā, P ¼ 0.{{10}}4), un agrāks ESKD sākums (36 gadi pret 46 gadiem ADTKD-UMOD, P < 0,001)="" un="" īsāka="" vidējā="" nieru="" dzīvildze="" (46="" gadi="" pret="" 54="" gadiem="" adtkd-umod,="" p="" ¼="" 0,013).="" iepriekšējie="" pētījumi="" ziņoja,="" ka="" pacientiem="" ar="" adtkd-muc1,8="" ir="" lielāks="" eskd="" vecums="" (vidēji:="" 44,9="" gadi),="" ko="" varētu="" izskaidrot="" ar="">

6. attēls| Klīniskais UMOD rādītājs un veiktspēja Belgo-Swiss ADTKD reģistrā. (a) Klīniskais UMOD rādītājs, pamatojoties uz klīniskiem, bioķīmiskiem, histoloģiskiem un attēlveidošanas datiem. Labajā pusē ir parādīti konkrētu raksturlielumu piešķirtie punkti. pēc rutīnas apstrādes, ieskaitot urīna nogulsnes un urīna analīzi unnieresimaging. interstitial fibrosis, tubular atrophy, thickening and lamellation of tubular basement membranes, tubular dilatation (microcysts), negative immunofluorescence for the compliment, and Igs. proteinuria >300 mg/dl, persistent hematuria (both eumorphic and dysmorphic) in repeated urinalysis. hemoglobin A1c >10 procenti vai atkārtoti asinsspiediena mērījumi > 160/100 mm Hg un/vai atbilstoši hipertensīvas kardiopātijas un/vai nefropātijas klīniskie atklājumi. Vismaz 1 cista jebkurā vietā tiek diagnosticēta ar ultrasonogrāfiju, datortomogrāfiju vai magnētiskās rezonanses attēlveidošanu. Piemērs: 35-gadus vecs pacients, podagra sākās 32 gadu vecumā (þ1); seruma urīnskābe 550 mmol/l (þ3); aptuvenais glomerulārās filtrācijas ātrums 55 ml/min uz 1,73 m2, tukša urīna analīze un nogulsnes,nieresbez cistām un normāla izmēra magnētiskās rezonanses attēlveidošanā, bez diabēta vai hipertensijas (þ2hroniskanieresslimība [CKD] nezināmas izcelsmes); un CKD ģimenes anamnēzē, kas dokumentēta 3 paaudzēs (þ2), kopējais klīniskais UMOD rādītājs ir 8 punkti. (b) klīniskā UMOD rādītāja uztvērēja darbības raksturlīkne Belgo-Šveices reģistrā (n ¼ 211 pacienti ar autosomāli dominējošu tubulointersticiālu).nieresslimība[ADTKD] ar pieejamajiem datiem) ir šādi: laukums zem līknes (AUC): {{0}}.72; 95 procentu ticamības intervāls (TI): 0,66–0,79; P < 0,001;="" robežvērtībai="" usd 5="" ir="" 98,1 procenti="" jutība="" un="" 41,4 procenti="" specifika="" attiecībā="" uz="" umod="" mutāciju;="" negatīva="" paredzamā="" vērtība:="" 94,3="" procenti="" ;="" pozitīva="" paredzamā="" vērtība:="" 59,1="" procenti="" .="" c)="" klīnisko="" umod="" rezultātu="" histogramma="" pacientiem,="" kuri="" ir="" umod="" pozitīvi="" (n="" ¼="" 106)="" un="" umod="" negatīvi="" (n="" ¼="" 105).="" sarkanā="" horizontālā="" līnija="" norāda="" 5.="" vēsturiski="" skarto="" pacientu="" robežvērtību="" (ģenētiski="" diagnosticētu="" pacientu="" klīniski="" skarto="" radinieku),="" bet="" mēs="" iekļāvām="" tikai="" personas="" ar="" noteiktu="" ģenētisko="" diagnozi.="" adtkd-muc1="" neviendabīgums="" attiecībā="" uz="" ckd="" un/vai="" nieru="" slimības="" progresēšanu="" ir="" intriģējošs="" un="" liecina="" par="" ievērojamu="" modifikācijas="">

Podagra ir klasiski aprakstīta pacientiem ar UMOD mutācijām. Patiešām, mūsu dati liecina, ka ADTKD-UMOD podagra ir pārsteidzoši izplatītāka un sākas ievērojami agrāk nekā ADTKD-MUC1. Pacientiem ar ADTKD-UMOD ir aprakstīta bojāta urīna koncentrācija, kas izraisa polidipsiju un poliūriju, visticamāk, uz TAL balstīta Naþ-Kþ-2Cl - kotransportētāja darbības traucējumiem.15,17 Plazmas tilpuma kontrakcija un kompensējoši lielāka reabsorbcija. proksimālo kanāliņu aktivitāte, tostarp ar Naþ saistīto urātu transportētāju regulēšana, visticamāk, izskaidro hiperurikēmijas fenotipu ADTKD-UMOD.25,26 Līdzīgs mehānisms tika parādīts

vecas Umod nokautas peles, kurām bija samazināta Naþ-Kþ-2Cl-kotransportera aktivitāte.26 Lai gan ADTKD-MUC1, domājams, cēlies no distālā kanāliņa, podagra šajā traucējumā bija ievērojami mazāk izplatīta.

7. attēls| UMOD rādītājs, kas salīdzina autosomāli dominējošo tubulointersticiālunieresslimība (ADTKD)–UMOD pret ADTKD-MUC1 ASV ADTKD reģistrā. (a, kreisais panelis) Klīniskā UMOD rādītāja uztvērēja darbības raksturlīkne ASV reģistrā (n ¼ 205 pacienti ar ADTKD-UMOD un ADTKD-MUC1 ar pieejamiem datiem) ir šāda: apgabals. zem līknes (AUC): 0.69; 95 procentu ticamības intervāls (TI): 0,62–0,77; P < 0.037.="" robežvērtībai="" 8 asv dolāru="" jutība="" ir="" 48,8 procenti="" un="" specifika —="" 83,7 procenti="" umod="" mutācijām,="" savukārt="" robežvērtībai="" 5 asv dolāru="" jutība="" ir="" 97,6 procenti="" un="" specifika="" 15.0 procenti="" umod="" mutācijām.="" .="" (a,="" labais="" panelis)="" klīnisko="" umod="" punktu="" rezultātu="" histogramma="" pacientiem="" ar="" adtkd-umod="" (n="" ¼="" 125)="" un="" adtkd-muc1="" (n="" ¼="" 80).="" (b,="" kreisais="" panelis)="" klīniskā="" umod="" rādītāja="" uztvērēja="" darbības="" raksturlīkne,="" ieskaitot="" urīna="" umod="" līmeni="" asv="" reģistrā="" (n="" ¼="" 86="" pacienti="" ar="" adtkd-umod="" un="" adtkd-muc1="" ar="" pieejamiem="" urīna="" umod="" datiem)="" ir="" šādi.="" seko:="" auc:="" 0.89;="" 95 procenti ti:="" 0,82–0,96;="" p="">< 0,001.="" robežvērtībai="" 5="" usd="" ir="" augstākais="" youden="" indekss="" diskriminācijai="" (0,684),="" un="" tās="" jutīgums="" ir="" 94,1="" procenti="" un="" specifika="" 74,3="" procenti="" umod="" mutācijas="" gadījumā;="" negatīva="" paredzamā="" vērtība:="" 89,7="" procenti="" ;="" pozitīva="" paredzamā="" vērtība:="" 84,2="" procenti="" .="" (b,="" labais="" panelis)="" klīniskā="" þ="" urīna="" umod="" rādītāju="" histogramma="" pacientiem="" ar="" adtkd-umod="" (n="" ¼="" 51)="" un="" adtkd-muc1="" (n="" ¼="" 35).="" sarkanā="" horizontālā="" līnija="" norāda="" robežvērtību="" 5.="" q,="">

Mēs pētījām 2 galvenās bioloģiskās pazīmes, kas aprakstītas ADTKD-UMOD ar iespējamu patofizioloģisku nozīmi: aberāciju UMOD eksporta mehānismos un ER stresa indukciju. Pamatojoties uz novērojumu, ka MUC1 ir izteikts distālajā daļāniereskanāliņos, ieskaitot TAL, kur tas kolokalizējas ar UMOD6, un, novērojot, ka MUC1fs uzkrājas citos MUC1-izpaužošos audos (ādā, krūtīs, plaušās, resnajā zarnā), neizraisot ekstrarenālas izpausmes7, varētu izvirzīt hipotēzi, ka MUC1fs varētu mijiedarboties ar UMOD TAL. Tomēr, atšķirībā no ADTKD-UMOD, mēs neatradām nekādas atšķirības UMOD urīna līmenī pacientiem ar ADTKD-MUC1 un normālu populāciju. Turklāt MUC1-mutanta analīzenieresbiopsijas atklāja normālu UMOD sadalījumu TAL šūnās, bez pierādījumiem par ER stresu (GRP78 ekspresija), kas ir ADTKD-UMOD pazīme. Šie jaunie atklājumi liecina, ka UMOD apstrāde netiek mainīta ADTKD-MUC1 un ka ER stress nav galvenais atradums ADTKD-MUC1. Līdzīgi nesen veikts pētījums atklāja MUC1fs iesprūšanu agrīnā sekrēcijas ceļa pūslīšos ADTKD-MUC1.19 modeļos.

Iepriekšējie ziņojumi aprakstīja UMOD intracelulāro uzkrāšanosnieresbiopsijas no pacientiem ar ADTKD-UMOD.1,2 Tomēr šāda krāsošana nav pieejama lielam skaitam pacientu, kas neļauj mums spekulēt par tās nozīmi klīnisko lēmumu pieņemšanā. Pēc mūsu pieredzes,

8. attēls| Diagnostikas algoritms aizdomāmautosomāli dominējošs tubulointersticiālsnieresslimība (ADTKD), pamatojoties uz klīnisko

UMOD rādītājs un urīna UMOD līmenis. progresīvs zaudējumsnierufunkcija, nelīdzenas urīna nogulsnes, normāla līdz viegla albumīnūrija un/vai proteīnūrija, normāla izmēranieresultraskaņā un nedrīkst lietot zāles, kas saistītas ar tubulointersticiālu nefrītu. novērtēts pēc apstiprinātām detaļām. cInformāciju par diagnostikas algoritmiem, tostarp citiem ADTKD gēniem, skatiet Devuyst et al.1 Alternatīvās diagnozes ietver nefronoftizi (autosomāli recesīvu),autosomāli dominējošā policistikanieresslimība (lielas cistiskas nieres), autosomāli dominējošas glomerulopātijas (proteīnūrija un/vai hematūrija), citi tubulointersticiālu cēloņinieresslimība(autoimūns, tubulointersticiāls nefrīts un uveīta sindroms), tostarp zāles un toksīni (nesteroīdie pretiekaisuma līdzekļi, aristolskābe, kalcineirīna inhibitori, litijs). CKD,hroniskanieresslimība.

UMOD krāsošana ir atkarīga no operatora, un tai ir nepieciešama stingra pozitīvā un negatīvā kontrole, un tā var būt atkarīga no pamatā esošās UMOD mutācijas. Turklāt pieejamībanieresbiopsijas ir ierobežotas. Urīna UMOD līmeņa novērtējums pacientiem diagnozes noteikšanas laikā un slimības progresēšanas laikā var piedāvāt neinvazīvu diagnostikas rīku un biomarķieri ADTKD-UMOD. Tā kā urīna UMOD līmenis uzrāda pozitīvu korelāciju ar eGFR (eGFR<90 ml/min="" per="" 1.73="" m2)="" and="" tubular="" mass,23,24="" they="" need="" to="" be="" normalized="" for="" residual="" egfr="" and="" interpreted="" against="" matched="" controls.="" based="" on="" data="" from="" a="" large="" control="" cohort,="" we="" show="" here="" that="" urinary="" umod="" (in="" mg/g="" creatinine="" to="" account="" for="" urine="" concentration)="" normalized="" for="" egfr="" can="" be="" applied="" in="" the="" clinical="" setting="" of="">

Nesen veikts pētījums, kas balstīts uz eksomu sekvencēšanu, ziņoja par UMOD mutācijām, kas veido 3 procentus no visiem pacientiem ar ģenētisku atradi šajā kohortā.13 Tomēr joprojām pastāv ievērojami šķēršļi ADTKD apakštipu diagnostikas pieejā. Tie ietver, bet neaprobežojas ar (i) ierobežotu MUC1 testēšanas pieejamību tehnisku problēmu dēļ, (ii)

apstiprināts diagnostikas vai ģenētiskais algoritms, kas saistīts ar nenovērtētām klīniskām atšķirībām starp ADTKD apakštipiem, un (iii) trūkstošo slimības biomarķieru dēļ mazu un izkliedētu slimību kohortu dēļ. Ikdienas praksei un rentabilitātei praktiski instrumenti, piemēram, vērtēšanas sistēmas, ir ļoti noderīgi, lai vadītu ģenētisko testēšanu.1 Belgo-Šveices reģistram bija liela nozīme klīniskā UMOD rādītāja noteikšanā, jo tas atklāja galvenās diskriminējošās klīniskās pazīmes, tostarp pozitīvu ģimenes vēsturi. HNS un/vai podagra, vecums uzrādīšanas brīdī, izplatībanieresslimība un progresēšana līdz ESKD, un podagras vēsture. Interesanti,nierucistas ir retāk sastopamas pacientiem ar ADTKD-UMOD, kas atbilst iepriekšējiem pētījumiem.8,15,20 Apzīmētais klīniskais UMOD rādītājs uzrādīja lielisku UMOD mutāciju NPV (5 $) Belgo-Swiss (NPV: 94,3 procenti) un ASV (NPV: 91.{17}} procenti) reģistri. Tā kā ADTKD-UMOD un ADTKD-MUC1 ir ievērojama klīniska pārklāšanās, mēs nebijām pārsteigti, ka klīniskais UMOD rādītājs starp šīm divām vienībām atšķīrās nedaudz (AUC: 0, 69). Tomēr augstākas UMOD punktu vērtības uzrādīja stabilu specifiku UMOD mutācijām (piemēram, robežvērtība 8 $: specifika 83,7 procenti un PPV 81,3 procenti UMOD mutācijai). Urīna pievienošana

UMOD mērījumi, ADTKD-UMOD patofizioloģiskais biomarķieris, ievērojami palielināja rezultāta diskriminējošo jaudu (AUC: 0.89) ar PPV 84,2 procentiem UMOD mutācijai (5 $ punktu robeža). Tā kā progresēšananieresslimība un podagras izplatība un sākums, šķiet, ir atkarīgs no pamatā esošās ģenētiskās diagnozes, ir ieteicama ģenētiskā diagnoze, jo tā var ietekmēt pacientu ar ADTKD ārstēšanu (piemēram, novērošanu,nierutransplantācija un podagras profilakses stratēģijas). Turklāt mērķtiecīga terapija varētu būt sasniedzama vismaz attiecībā uz ADTKD-MUC1.

Šī pētījuma ierobežojumi ietver retrospektīvu "reālās dzīves" kohortas dizainu secīgi pieņemtiem pacientiem ar raksturīgām grūtībām, piemēram, ierobežotu piekļuvi pilnai klīniskajai informācijai, trūkstošu DNS paraugu turpmākai ģenētiskai pārbaudei un stingru iekļaušanas un izslēgšanas kritēriju trūkumu. Mēs

ietvēra visus ģenētiski atrisinātos konkrētās ģimenes gadījumus, kas, iespējams, rada atlases aizspriedumu risku. Tomēr mēs lēšam, ka tas ir nenozīmīgs risks, jo kopumā katrā ģimenē tika iekļauti tikai 1 līdz 2 pacienti, un ADTKD pastāv ievērojama intrafamiliāla klīniska atšķirība.8,20 Tā kānieresŠo slimību gadījumā biopsijas tiek veiktas reti, un tās sniedz nespecifiskus atradumus (piemēram, intersticiālu fibrozi, tubulāru atrofiju), mēs analīzē neiekļāvām histopatoloģisko informāciju. Belgo-Šveices reģistra histopatoloģijas rezultātu apsekojums parādīja, ka intersticiāla fibroze ar tubulāru atrofiju (60% pieejamo patoloģiju ziņojumu) un intersticiāls nefrīts (40% pieejamo patoloģijas ziņojumu) bija dominējošie histoloģiskie atradumi pacientiem ar ADTKD-UMOD. un tie, kas bija UMOD- negatīvi. Detalizētāks ADTKD-UMOD un ADTKD-MUC1 veikto biopsiju histoloģiskais apraksts prasa īpašu analīzi.

Jānorāda, ka sistemātiska UMOD mutāciju skrīnings visos 10 kodējošajos eksonos ir veikta tikai pacientu apakšgrupā ar ADTKD. Pamatojoties uz iepriekšējiem ekrāniem un visa eksoma sekvencēšanu, mēs lēšam, ka ļoti maz UMOD mutāciju ārpus 3. un 4. eksona varētu būt izlaistas ADTKD-UMOD.13,15 Turklāt lielas dzēšanas vai ievietošanas UMOD netiek atklātas ar tiešo sekvencēšanu. metodes. Līdz ar gēnu paneļa testēšanas un nākamās paaudzes sekvencēšanas pieeju pieejamību, iespējams, samazināsies klīniskā rezultāta lietderība mērķtiecīgas gēnu testēšanas vadīšanā. Tomēr pašreizējā posmā nākamās paaudzes sekvencēšana izlaiž MUC1 mutācijas, un specializēto testu pieejamība ir ierobežota. Cik mums ir zināms, MUC1 klīniskās pakāpes ģenētisko testēšanu veic tikai Broad Institute. Šo iemeslu dēļ mēs lēšam, ka vienkārši klīniskie un bioķīmiskie instrumenti, lai novērtētu iepriekšējas pārbaudes varbūtības ietekmi uz diagnostisko apstrādi un, iespējams, samazinātu izmaksas, kas saistītas ar nepamatotu genotipēšanu.

Noslēgumā jāsaka, ka šis lielais starptautiskais retrospektīvais kohortas pētījums sniedz detalizētu fenotipa analīzi pacientiem ar ADTKD-UMOD un ADTKD-MUC1. Divu visbiežāk sastopamo ADTKD apakštipu klīniskās pazīmes ir hiperurikēmija un agrīna podagra ADTKD-UMOD gadījumā un neviendabīga, bet parasti smagākanieresslimībaADTKD-MUC1. Klīniskais UMOD rādītājs ir jutīgs un, kopā ar urīna UMOD līmeni, potenciāli specifisks rīks, lai atlasītu pacientus ģenētiskai UMOD pārbaudei. Šiem rezultātiem vajadzētu palīdzēt ārstiem uzlabot diagnostikas rādītājus, klīnisko vadību un pacientu konsultācijas ADTKD gadījumā.

METODES

Starptautiskā ADTKD kohorta

Starptautisko ADTKD kohortu veido pacienti no Belgo-Swiss ADTKD reģistra un ASV ADTKD reģistra. Iekļaušanas kritēriji bija tie, ko noteicaNieres Slimība: Globālo rezultātu vienprātības uzlabošana2 un iekļāva šādu informāciju jebkurā kombinācijā: ģimenes anamnēze, kas ir savietojama ar HNS autosomāli dominējošo mantojumu ar ADTKD pazīmēm, tostarp pakāpeniskunieresfunkciju, neizteiksmīgi urīna nogulsnes, iztrūkums vai viegla albuminūrija un/vai proteīnūrija, normāla izmēra vai maza izmēra nieres ultraskaņā; un/vai (ja nav pozitīvas HNS ģimenes anamnēzes) agrīna hiperurikēmija un/vai podagra un/vai intersticiāla fibroze un/vai tubulāra atrofija anamnēzē.nieresbiopsy. Exclusion criteria included the following: a different genetic diagnosis (non-ADTKD), the presence of enlarged cystic kidneys, proteinuria (>1 g/24 h) un/vai pastāvīga hematūrija, ilgstošs vai nekontrolēts cukura diabēts vai arteriāla hipertensija un ar tubulointersticiālu nefrītu saistītu zāļu lietošana. Kohortā tika iekļauti tikai tie pacienti, kuriem tika pārbaudītas UMOD un/vai MUC1 mutācijas. Anonimizēta demogrāfija un klīniskā un ģenētiskā informācija tika reģistrēta datu bāzē. Šo pētījumu apstiprināja Veik Forestas Medicīnas skolas institucionālā pārskata padome, Luvēnas Universitātes (UCL) Medicīnas skola un Eiropas Kopienas Septītā pamatprogramma "Eiropas konsorcijs augstas caurlaidības pētniecībai retos gadījumos.NieresSlimības(EURenOmics).

Belgo-Šveices ADTKD reģistrs. Belgo-Swiss ADTKD reģistrā ir iekļauti pacienti, kurus klīniskie partneri pārsvarā no Eiropas nosūtījuši uz UCLouvain un Cīrihes Universitāti (UZH) (S1 papildu pielikums). 2019. gadā reģistrā bija iekļauti 275 pacienti, kuri bija reģistrēti kopš 2003. gada. Klīniskie dati ietvēra ģimenes ciltsrakstu, slimības sākumu un attīstību.nieresfunkciju pasliktināšanās, hiperurikēmijas un/vai podagras sākums (podagras sākuma vecums tika noteikts kā pacienta vecums pirmajā podagras artrīta epizodē) un daļēja urīnskābes izdalīšanās, attēlveidošanas un histopatoloģijas dati (ja pieejami) un informācija par iespējamo ekstrarenāls izpausmes (piemēram, aizkuņģa dziedzera enzīmi, aknu darbības testi). ESKD tika definēts kā eGFR<10 ml/min="" or="" the="" initiation="" of="">nieruaizstājterapija (dialīze vai nieru transplantācija).

ASV ADTKD reģistrs. ASV ADTKD reģistrā ir iekļautas ģimenes ar tubulointersticiālunieresslimībaatsaucās uz Veik Forestas Medicīnas skolu 1999. gadā (S1 papildu pielikums). Apkopotā informācija ietvēra demogrāfiskos datus, ciltsrakstus, ESKD vecumu, laboratorijas vērtības un ultraskaņas rezultātus.

Ģenētiskā pārbaude

No visiem pacientiem tika iegūta informēta rakstiska piekrišana. Genomiskā DNS tika izolēta no perifēro asiņu leikocītiem, izmantojot standarta procedūras, un DNS tika uzglabāta 4 C temperatūrā.

Tiešā UMOD eksonu sekvencēšana sākotnēji tika veikta, izmantojot Sangera sekvencēšanu, kā aprakstīts iepriekš.27 Pavisam nesen UMOD gēns tiek analizēts, veicot masveida paralēlo sekvencēšanu, izmantojot tubulopātijas gēnu paneli, kas izstrādāts Eiropas konsorcija EURenOmics darba paketē tauopathies.28,29 Mutational. analīze tika veikta 3. un 4. eksonā visiem reģistrētajiem pacientiem un visos 10 kodējošajos eksonos pacientu apakškopai.

MUC1 genotipēšana tika veikta, izmantojot MUC1 VNTR sekvencēšanas pieeju, kas apvienota ar spektrometrijas bāzes zondes pagarinājuma testu, kā aprakstīts iepriekš.7,30 MUC1 testēšanu nodrošināja Plašais MIT institūts un Hārvardas 30 un Kārļa universitātes Pirmā medicīnas fakultāte.7 Nukleotīdu numerācija atspoguļo cDNS numerāciju ar þ1, kas atbilst ATG translācijas iniciācijas kodona A atsauces secībā (NM_003361.3). Alamut Visual programmatūra (Interactive Biosoftware, Ruāna, Francija; www.interactivebiosoftware.com) tika izmantota, lai palīdzētu noteikt varianta patogenitāti. Identificētie varianti tika secīgi pārbaudīti, izmantojot attiecīgās datubāzes, piemēram, Clinvar (Nacionālais biotehnoloģijas informācijas centrs, Bethesda, MD; HTTPS:// www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/), Cilvēka gēnu mutāciju datu bāze (Medicīnas ģenētikas institūts). Kārdifā, Kārdifā, Apvienotajā Karalistē; http://www.hgmd.cf.ac.uk/ac/index.php), VarSome (Saphetor, Lozanna, Šveice; https://varsome.com/) un vietējās datubāzes novērtēt iepriekšējo publikāciju.

Varianti tika uzskatīti par slimību izraisošiem, pamatojoties uz iepriekšējiem ziņojumiem, ģimenes segregācijas analīzi vai prognozēšanas algoritmiem (Sorting Intolerant from Tolerant [SIFT], Align GVD, mutation degustators un Polymorphism Phenotyping v2 [PolyPhen-2]) attiecībā uz patogenitāti. .

Varianti tika klasificēti saskaņā ar Amerikas Medicīnas ģenētikas koledžas 2015. gadā publicētajām vadlīnijām.31 Interesējošie varianti tika pārbaudīti, izmantojot Sangera sekvencēšanu.

UMOD urīna līmeņa mērījumi

Lai izmērītu UMOD līmeni urīnā (otrā rīta urīna paraugs) no 86 pacientiem ar ADTKD21, tika izmantota apstiprināta ar enzīmu saistītā imūnsorbcijas testa metode. Urīna kreatinīns tika noteikts, izmantojot Synchron DXC800 analizatoru (Beckman Coulter, Fullerton, CA). . Atsauces paraugi (n ¼ 2717) tika iegūti no Cohort Lausannoise, uz populāciju balstīta pētījuma, kurā piedalījās 6000 cilvēku vecumā no 35 līdz 75 gadiem no Lozannas pilsētas, Šveice.22 eGFR tika aprēķināts, izmantojot Chronic.NieresSlimībaEpidemioloģija Sadarbības vienādojums. No visām iesaistītajām personām tika iegūta informēta piekrišana.

UMOD izteiksmes konstrukcijas

Cilvēka savvaļas tipa UMOD cDNS tika klonēts pcDNS 3.1(þ) (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA), un hemaglutinīna marķējums tika ievietots pēc līderpeptīda starp T26 un S27 proteīna secībā.32 C150S un L284P mutants. izoformas tika iegūtas ar mutaģenēzi, izmantojot QuikChange Lightning mutaģenēzes komplektu (Agilent, Santa Clara, CA), ievērojot ražotāja norādījumus. Grunts tika izstrādātas, izmantojot programmatūru QuikChange Primer Design Program (Agilent). Mutācijai C150S izmantotie praimeri: uz priekšu (50 /30 ) gatggcactgtgagtcctccccgggctcctg, reverse (50 /30 ) caggagcccgggggaggactcacagtgccac un mutācijai L248P: uz priekšu (50 /30 ) uz priekšu (50 /30 ) cccggtgtact5,ccgccgtgtg.

Šūnu kultūras apstākļi

HEK293 šūnas tika audzētas Dulbecco modificētajā Eagle barotnē, kas papildināta ar 10 procentiem liellopu augļa seruma, 200 U/ml penicilīna, 200 mg/ml streptomicīna un 2 mmol/l glutamīna 37 C temperatūrā, 5 procenti CO2.

HEK293 šūnas tika transficētas, izmantojot Lipofectamine 2000 (Thermo Fisher Scientific), ievērojot ražotāja protokolu, un analizētas 24 stundas pēc transfekcijas.

Western blot

Šūnas tika lizētas oktilglikozīda līzes buferšķīdumā (50 mmol/l Tris-HCl, pH 7,4, 150 mmol/l NaCl, 60 mmol/l oktilbD-glikopiranozīds, 10 mmol/l NaF, 0,5 mmol/l nātrija). ortovanadāts, 1 mmol/l glicerofosfāts un proteāzes inhibitoru kokteilis [Sigma-Aldrich, Sentluisa, MO]) 1 stundu 4 C temperatūrā, kam sekoja 10 minūšu centrifugēšana pie 17,{17}}g. Šķīstošās frakcijas kvantitatīvi noteica ar Bio-Rad Protein Assay (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Western blot eksperimenti tika veikti, kā aprakstīts Schaeffer et al.32. Izmantotās antivielas bija no peles attīrītas anti-HA.11 Epitope Tag antivielas (atšķaidījums 1:1000; 901502; BioLegend, Sandjego, CA) un peles monoklonālās antivielas. -b-aktīns (atšķaidījums 1:20 000; A2228; Sigma-Aldrich).

Imunofluorescence

Nieresbiopsijas. UMOD un GRP78 imūndetekcijas tika veikta 5-mm biezainieressekcijas, kas iegūtas no nefrektomijas paraugiem pacientiem ar ADTKD-UMOD (sieviete, 41 gads, ESKD; vīrietis, 42 gadi, ESKD) un ADTKD-MUC1 (sieviete, 60 gadi, ESKD; vīrietis, 47 gadi) vecs, ESKD). Priekšmetstikliņi tika deparafinēti ksilolā un rehidrēti etanola sērijā. Antigēna iegūšana tika veikta 10 minūtes ar citrāta buferšķīdumu (pH 6,0) 98 C temperatūrā. Pēc 20 minūtēm bloķēšanas šķīdumā priekšmetstikliņus inkubēja nakti ar GRP78 primāro antivielu (1:300; ab21685; Abcam, Kembridža, Apvienotajā Karalistē), kam sekoja inkubācija ar Alexa-Fluor{17}}konjugētu kazu anti-trušu antivielu 45 minūtes (1:200; Invitrogen, Thermo Fisher Scientific). Priekšmetstikliņi tika pārbaudīti ar aitu anti-UMOD primāro antivielu (1:800; K90071C; Meridian Life Science Inc., Memfisa, TN), kam sekoja AlexaFluor{26}} konjugēts ēzeļa anti-aitas (1:200; Invitrogen). Nosegstikliņi tika uzstādīti ar Prolong zelta pretizbalēšanas reaģentu ar 40, 6-diamidino-2- fenilindolu (Invitrogen) un analizēti ar Zeiss LSM 510 Meta Confokālo mikroskopu (Carl Zeiss, Jena, Vācija) ar lielas skaitliskās apertūras lēcām ( Plāns-Neofluar 20/0,5). Šo paraugu izmantošanu ir apstiprinājusi Université Catholique de Louvain Ethical Review Board.33

HEK293 šūnas. Šūnas, kas audzētas uz segstikliņas, 15 minūtes tika fiksētas 4% paraformaldehīdā, 10 minūtes caurlaidīgas ar 0,5% Triton un 30 minūtes bloķētas ar 10% ēzeļa serumu. Šūnas tika marķētas 1 stundu 30 minūtes istabas temperatūrā ar peles attīrītu anti-HA.11 epitopa tagu antivielu (atšķaidījums 1:500; 901502; BioLegend) un trušu poliklonālo antikalretikulīnu (atšķaidījums 1:500; C4606; Sigma -Aldrich), kam seko 1 stundu ilga inkubācija ar atbilstošām AlexaFluor konjugētām sekundārajām antivielām (atšķaidījums 1:500; Thermo Fisher Scientific). Šūnas tika iekrāsotas ar 40,6-diamidino-2-fenilindolu un piestiprinātas, izmantojot fluorescences montāžas līdzekli (Dako; Agilent). Visi attēli tika uzņemti ar UltraVIEW ERS rotējošā diska konfokālo mikroskopu (UltraVIEW ERS-Imaging Suite Software; Zeiss 63X/1.4; PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Boston, MA). Visi attēli tika importēti programmā Photoshop CS (Adobe Systems, Mountain View, CA) un pielāgoti spilgtumam un kontrastam.

ADTKD UMOD rādītāja ģenerēšana un apstiprināšana

Svērtais UMOD rādītājs tika balstīts uz ADTKD kritērijiem, specifiskām ADTKD-UMOD klīniskajām īpašībām (ti, agrīna podagra un hiperurikēmija) un parametriem, kas ir negatīvi saistīti ar ADTKD (ti, sniedzot alternatīvu HNS skaidrojumu: proteīnūriju un/vai). hematūrija, diabēts un/vai nekontrolēta hipertensija, nieru cistas un/vai palielinātasnieres).2,15,20 Lai novērtētu punktu skaitu, mēs izmantojām veselu skaitļu vērtības no 1 līdz þ3. Vispārīgajiem ADTKD kritērijiem tika piešķirts vērtējums þ2, UMOD specifiskajiem klīniskajiem un laboratoriskajiem atklājumiem – 2 þ1 vai þ3, un 1 par katru negatīvi saistīto vienumu. Rezultāts pirmo reizi tika pārbaudīts Belgo-Swiss ADTKD reģistrā un apstiprināts ASV ADTKD reģistrā. Lai atšķirtu ADTKD-UMOD no ADTKD-MUC1, mēs noteicām normālu urīna UMOD [(mg/g kreatinīna)/eGFR] diapazonu, izmantojot 2717 urīna paraugus no vispārējās populācijas. Pamatojoties uz ADTKD-UMOD patofizioloģiju, iepriekšējiem ziņojumiem34, kā arī uz mūsu atklājumiem (5.a attēls), mēs attiecīgi piešķīrām þ1 un þ3 punktus urīna UMOD vērtībām starp vidējo un 25. procentili un zem 25. procentiles. normāls urīna UMOD līmenis. Tāpat mēs attiecīgi piešķīrām 1 un 3 punktus urīna UMOD vērtībām starp vidējo un 75. procentili un virs 75. procentiles normālā urīna UMOD līmeņa. Punktu konceptualizācija balstījās uz iepriekš publicēto hepatocītu kodolfaktora 1b rādītāju.35

Statistiskā analīze

Kvantitatīvie parametri tiek parādīti kā mediāna un IQR (25., 75. procentiles) (skalas mainīgajiem) vai vidējais SD (nepārtrauktiem mainīgajiem), un kvalitatīvie parametri tiek parādīti kā frakcijas ar procentiem. Kategoriskie mainīgie tika salīdzināti, izmantojot c2 testu. Nepārtraukti mainīgie tika salīdzināti, izmantojot Mann-Whitney U testu vai nepāra t-testu. Lai salīdzinātu urīna UMOD līmeņus, tika izmantota dispersijas testēšanas analīze ar Tukey vairāku salīdzināšanas testu. Kaplan-Meijera līknes tika ģenerētas, lai parādītu dzīvildzi bez ESKD un bez podagras. Pacienti, kuri pētījuma beigās nebija sasnieguši ESKD vai kuriem attīstījās podagra (interesējošais rezultāts netika novērots novērošanas laikā), tika uzskatīti par cenzētiem indivīdiem. Cenzēšanas laiks tika definēts kā vecums pēdējā pārbaudē. Izdzīvošanas līkņu salīdzināšanai tika izmantots log-rank tests. UMOD rādītāja veiktspēja tika novērtēta, aprēķinot uztvērēja darbības raksturlīknes AUC. Youden indekss tika izmantots, lai definētu optimālo diskriminējošo robežpunktu UMOD rādītājam. Statistiskā analīze tika veikta, izmantojot SPSS Statistics (IBM Corp., Armonk, NY). P < 0.05="" tika="" uzskatīts="" par="" statistiski="" nozīmīgu,="" tika="" izmantoti="" 2-pusējie="">

ATKLĀŠANA

Visi autori nav paziņojuši par konkurējošām interesēm.

PATEICĪBA

EO atbalsta Fonds National de la Recherche Luxembourg (grants 6903109), Cīrihes Universitātes Universitātes pētniecības prioritārā programma "Integratīva cilvēka fizioloģija, ZIHP" un Šveices Nacionālā zinātnes fonda agrīnās pēcdoktorantūras mobilitātes stipendija (P2ZHP{). {3}}). LR atbalsta Itālijas Nefroloģijas biedrība (SIN) programmas "Adotta un Progetto di Ricerca" ietvaros Telethon-Italy (grants GGP14263) un Itālijas Veselības ministrija (grants RF-2010-2319394). KK un AJB atbalsta Nacionālie veselības institūti – Nacionālais diabēta un gremošanas institūts unNieresSlimības(dotācija R21 DK106584). M, KH un SK atbalstīja Čehijas Veselības ministrija (dotācija NV17-29786A), Čehijas Izglītības ministrija (grants LTAUSA19068) un Kārļa universitāte Prāgā (institucionālās programmas UNCE/MED/007 un PROGRES-Q26/LF1). Viņi pateicas Nacionālajam medicīniskās genomikas centram (dotācija LM2015091) par palīdzību UMOD un MUC1 sekvencēšanā. OD atbalsta Eiropas Kopienas Septītā pamatprogramma (grants 305608), Eiropas References tīkls retām nieru slimībām (projekts 739532), Šveices Nacionālā zinātnes fonda Nacionālais kompetences centrs pētniecībā nieru homeostāzes kontroles programmā un Šveices Nacionālā zinātne. Fonds (dotācija 310030-189044). OD un OB atbalstīja Gebert-Rüf fonds ADTKD-UMOD pētījumiem. JAS atbalsta Kidney Research UK un Ziemeļu apgabaliNieresPētniecības fonds. RT finansē Instituto de Salud Carlos III: Redes Temáticas de Investigación Cooperativa Red de Investigación Renal (dotācija RD16/0009) un Fondo de Investigación Sanitarias Fondo Europeo de Desarollo Regional (grants PI15/01824, PI628/03). JM atbalsta Fonds de la Recherche Scientifique–Communauté Française de Belgique. DGF atbalstīja Šveices Nacionālais pētniecības kompetences centrs TransCure, Šveices Nacionālais kompetences centrs nieru homeostāzes kontroles pētniecībā un Šveices Nacionālais zinātnes fonds (dotācijas 31003A_152829 un 33IC30_166785/ 1). MUC1 ģenētisko testēšanu atbalsta Slim Initiative for Genomic Medicine in America, Broad Institute sadarbībā ar Carlos Slim fondu.

Pateicamies visiem pacientiem un viņu ģimenēm, kas piedalījās. Kohorta Lausannoise ir atzīta par urīna paraugu un eGFR informācijas nodrošināšanu. Mēs esam pateicīgi Maegan Harden un viņas komandai Plašajā genomikas platformā par ekspertu palīdzību MUC1 ģenētiskajā testēšanā.

Daļa no šiem datiem tika prezentēti kā plakāts 2017. gada Amerikas Nefroloģijas biedrības laikāNieresnedēļa (2017. gada 31. oktobris– 5. novembris, Ņūorleāna, Luiziāna).

PAPILDU MATERIĀLS

Papildu fails (PDF)

Pielikums S1. Nosūtošie ārsti.

S1 attēls. L284P uromodulīnam ir satiksmes defekts.

S2 attēls. Brīvība no ESKD un podagras ADTKD-UMOD saskaņā ar noncisteīna un cisteīna mutācijām.

S3 attēls. Saikne starp urīna uromodulīnu un glomerulāro filtrāciju vispārējā populācijā.

S4 attēls. Uromodulīna apstrāde ADTKD-UMOD un ADTKD-MUC1.

S5 attēls. Belgo-Swiss ADTKD reģistra dizains un blokshēma. S6 attēls. UMOD pozitīvo un UMOD negatīvo pacientu klīniskās īpašības Belgo-Swiss ADTKD reģistrā.

S1 tabula. 106 UMOD mutāciju saraksts Belgo-Šveices un ASV ADTKD reģistros.

S2 tabula. Alēļu biežuma un patogenitātes rādītāji jauniem UMOD variantiem.

S3 tabula. ADTKD pacientu klīniskās īpašības ASV ADTKD reģistrā saskaņā ar ģenētisko diagnozi.

S4 tabula. Uztvērēja darbības raksturlielumu (ROC) līknes koordinātas klīniskajam UMOD rādītājam Belgo-Šveices ADTKD reģistrā (UMOD pozitīvi un UMOD negatīvi pacienti) (n ¼ 211 pacienti ar pieejamiem datiem).

S5 tabula. UMOD rādītāja uztvērēja darbības raksturlielumu (ROC) līknes koordinātas ASV ADTKD reģistrā (pacienti ar ADTKD-UMOD un ADTKD-MUC1) bez un ar urīna uromodulīnu (n ¼ 205 un n ¼ 86 ar urīna uromodulīns).

ATSAUCES

1. Devuyst O, Olinger E, Weber S, et al. Autosomal dominant tubulointerstitialnieru slimība, Nat Rey Dis Primers.2019:5:60.

2. Eckardt KU, Alper SL, Antignac C et al Autosomāli dominējošā tubulointersticiāla nieru slimība: diagnostika, klasifikācija un vadība — KDIGO vienprātības ziņojums. Kidney Int.2015;88:676-683.

3. Hart TC, Gorry MC, Hart PS u.c. UMOD gēna mutācijas ir atbildīgas par medulāru cistisko nieru slimību 2 un ģimenes juvenīlo hiperurikēmisko nefropātiju. J Med Genet.2002;39:882-892.

4. Devuyst O. Olinger E, Rampoldi L Uromodulin: no fizioloģijas līdz retām un sarežģītām nieru slimībām. Nat Rev Nephrol.2017;13:525-544.

5. Kirby A, Gnirke A, Jaffe DB u.c. Mutācijas, kas izraisa 1. tipa medulāro cistisko nieru slimību, atrodas lielā VNTR MUC1, kas izlaista ar masveida paralēlu sekvencēšanu. Nat Genet.2013;45:299-303.

6. Knaup KX, HackenbeckT, Popp B, et al. Mucin-1 biallelic expression in 21. Youhanna S, Weber J, Beaujean V, et al. Determination of Uromodulin in autosomal dominant tubulointersticial nieru disease: impplications for nongenetic slimības atpazīšana.J Am Soc Nephrol.2018292298-2309.