2. DAĻA ehinakozīds kavē glutamāta izdalīšanos, nomācot no sprieguma atkarīgo Ca2 plus iekļūšanu un proteīna kināzes C žurkas smadzeņu garozas nervu galos

Lai iegūtu vairāk informācijas, lūdzu, sazinieties ar:Joanna.jia@wecistanche.com

SPIED ŠEIT, LAI LAI 1.DAĻU

3. Diskusija

Šajā pētījumā ehinakozīds, aktīvs savienojumsHerba Cistanche, inhibēja 4-aminopiridīna izraisītu glutamāta izdalīšanos žurku smadzeņu garozas nervu galos. Šeit tiek tālāk pētīti un apspriesti iespējamie pamatā esošie mehānismi ehinakozīda izraisītai glutamāta izdalīšanās kavēšanai.

Cistanche deserticola ir daudz efektu, noklikšķiniet šeit, lai uzzinātu vairāk

3.1. Mehānismi, kas ir pamatā ehinakozīdu izraisītai glutamāta izdalīšanās kavēšanai

ko izraisa 4-aminopiridīns, sastāv no diviem komponentiem: fizioloģiski nozīmīgu Ca2 plus atkarīgo komponentu, kas veidojas sinaptisko pūslīšu eksocitozes rezultātā, kas satur glutamātu; un no Ca2 plus neatkarīgs komponents, kas rodas ilgstošas ​​depolarizācijas rezultātā, izraisot membrānas potenciāla izraisītu glutamāta transportera līdzsvara stāvokļa nobīdi virzienā uz āru, tādējādi ietekmējot citozola glutamāta izplūdi [31]. Šeit mēs to novērojāmehinakozīdsbūtiski neinhibēja 4-aminopiridīna izraisītu glutamāta izdalīšanos Ca2 plus nesaturošas barotnes klātbūtnē (no Ca2 plus neatkarīga atbrīvošanās). Turklāt novērotaisehinakozīds-mediētu 4-aminopiridīna izraisītas glutamāta izdalīšanās inhibīciju efektīvi novērsa bafilomicīns A1 (kas samazina glutamāta saturu sinaptiskos pūslīšos), bet ne DL-TBOA (kas neselektīvi inhibē visus ierosinošo aminoskābju transportētāju apakštipus). Šie rezultāti liecina, kaehinakozīdsietekmē Ca2 plus atkarīgo glutamāta izdalīšanās eksocitozi, neietekmējot no Ca2 plus neatkarīgo glutamāta citozola izplūdi, apgriežot nervu termināla plazmas membrānas glutamāta transportētāju. Sinaptiskajos terminālos Na plus kanāla inhibīcija vai K plus kanālu aktivācija stabilizē membrānas uzbudināmību un attiecīgi samazina izraisīto Ca2 plus ievadi un neirotransmitera izdalīšanos [32,33]. Tāpēc iespējamais pamatā esošais mehānismsehinakozīds-mediētā glutamāta izdalīšanās inhibīcija ietver sinaptosomu uzbudināmības samazināšanos. Tomēr šī iespēja nav pamatota, pamatojoties uz diviem novērojumiem: (1) 4-aminopiridīna izraisīta membrānas potenciāla depolarizācija, ko mēra ar membrānas potenciālu jutīgu krāsu DiSC3(5), netika ietekmēta, pievienojotehinakozīds; un (2) ehinakozīds neietekmēja 4-aminopiridīna izraisīto Ca2 plus neatkarīgo glutamāta izdalīšanos, kas ir atbrīvošanās sastāvdaļa, kas ir atkarīga tikai no membrānas potenciāla [31]. Ja efektu neizraisa sinaptosomu uzbudināmības nomākums, tas var izpausties caur Cav2.2 (N-tipa) un Cav2.1 (P/Q-tipa) Ca2 plus kanālu aktivitātes samazināšanos kopā ar glutamāta eksocitozi organismā. nervu termināli [34–36]. Izmantojot fura-2, mēs to parādāmehinakozīdsievērojami samazina 4-aminopiridīna izraisīto Ca2 plus koncentrācijas pieaugumu. Turklāt mūsu dati liecina, ka inhibējošā iedarbībaehinakozīdsuz 4-aminopiridīna izraisīta glutamāta izdalīšanās samazinājās no 42,4 procentiem ˘ 2,3 procentiem līdz 12,1 procentiem ˘ 3,9 procentiem pēc Cav2.2 (N-tipa) un Cav2.1 (P/Q-tipa) Ca2 blokatora iedarbības plus kanāli. Turklāt mēs to novērojāmehinakozīdsturpināja būtiski kavēt 4-aminopiridīna izraisītu glutamāta izdalīšanos intracelulāro Ca2 plus izdalīšanās inhibitoru klātbūtnē. Šie rezultāti liecina, ka vienlaicīga Cav2.2 (N-tipa) un Cav2.1 (P/Q-tipa) Ca2 plus kanālu aktivitātes nomākšana ir iespējamais pamatā esošais mehānisms.ehinakozīds-mediēta glutamāta izdalīšanās inhibīcija. Tomēr Cav2.2 (N-tipa) un Cav2.1 (P/Q-tipa) Ca2 plus kanālu aktivitātes kombinētā aktivizēšana nevarēja bloķētehinakozīdspilnībā. Tādējādi inhibīcijā var būt iesaistīti citi neidentificēti Ca2 plus kanālu veidi vai citi presinaptiskie ceļi. Piemēram, GABAA receptori atrodas presinaptiskā līmenī, un ir pierādīts, ka to aktivācija kavē Ca2 plus pieplūdumu un glutamāta izdalīšanos [37]. Šajā pētījumā GABAA receptoru antagonisti SR95531 un bikukulīns nebloķēja ehinakozīda izraisītu glutamāta izdalīšanās inhibīciju, kas liecina, ka GABAA receptori nav iesaistīti no sprieguma atkarīgās Ca2 plus kanālu aktivitātes samazināšanā un sekojošā glutamāta izdalīšanās kavēšanā.

Ca2 plus iekļūšana caur no sprieguma atkarīgiem Ca2 plus kanāliem aktivizē vairākas proteīnkināzes, kas saistītas ar glutamāta izdalīšanos nervu terminālos, tostarp mitogēna aktivēto proteīnkināzi, proteīnkināzi C un proteīnkināzi A. Šeit mēs parādām, ka proteīna kināzes C inhibitori efektīvi antagonizējaehinakozīds-mediēta glutamāta izdalīšanās kavēšana; tomēr mitogēnu aktivētais proteīnkināzes inhibitors PD98059 vai proteīnkināzes A inhibitors H89 bija neefektīvs. Turklāt tas. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1006 8 no 13 4-aminopiridīna izraisītas proteīnkināzes C fosforilēšanās sinaptosomās samazinājās pēc pirmapstrādes arehinakozīdskoncentrācijā, kas efektīvi kavē glutamāta izdalīšanos. Tāpēc signalizācijas ceļš noehinakozīds-mediētā glutamāta izdalīšanās inhibīcija var būt saistīta ar proteīnkināzi C. Proteīna kināze C ir svarīga intracelulāra signalizācijas sistēma, kas atrodas presinaptiskā līmenī un kam ir izšķiroša nozīme neirotransmitera eksocitozē. Piemēram, vairākas sinaptiskās olbaltumvielas, kas iesaistītas sinaptisko pūslīšu tirdzniecībā vai rekrutācijā un eksocitozē, piemēram, ar miristoilētu alanīnu bagāto C kināzes substrātu, tiek fosforilēti ar proteīnkināzi C [38, 39]. Šo fosforilācijas procesu var palielināt ar depolarizācijas stimulētu Ca2 plus ievadi, kas atvieglo glutamāta izdalīšanos [40]. Tādējādi mēs varam pamatoti spekulēt, ka inhibējošā iedarbībaehinakozīdsŠeit novērotā Ca2 plus ievadīšana var samazināt proteīnkināzes C aktivitāti un attiecīgi glutamāta izdalīšanos.

3.2. Terapeitiskās sekas

Eksitotoksicitāte, patoloģisks process, ko izraisa pārmērīga glutamāta izdalīšanās un glutamāta receptoru aktivācija, ir galvenais neironu nāves cēlonis akūtu un hronisku smadzeņu traucējumu, piemēram, insulta, traumatiska smadzeņu trauma, Parkinsona un Alcheimera slimību gadījumā [13,41], un terapeitiskās stratēģijas. glutamāta izdalīšanās kavēšana var būt daudzsološas neiroprotektīvas stratēģijas šādu slimību ārstēšanai.EhinakozīdsIr apstiprināts, ka tas iekļūst hematoencefālisko barjerā (BBB) ​​un uzrāda neiroprotektīvu iedarbību dažādos neirotoksicitātes in vivo modeļos [8, 10–12, 42]. Lai gan šo neiroprotektīvo efektu mehānisms nav pilnībā izprotams, ir ziņots par vairākiem iespējamiem mehānismiem, tostarp iekaisuma reakcijas inhibīciju, mitohondriju funkcijas stabilizāciju, antioksidāciju, brīvo radikāļu izvadīšanu un neirotrofisko funkciju atdarināšanu [5, 9, 12, 42]. Pašreizējā pētījumā ehinakozīda spēja samazināt glutamāta izdalīšanos no nervu galiem var arī daļēji izskaidrot tā neiroprotektīvo mehānismu. Tomēr, vai šī iedarbība veicina ehinakozīda acīmredzamo terapeitisko potenciālu smadzeņu traucējumos, kas saistīti ar glutamāta eksitotoksicitāti, ir nepieciešams turpmāks pētījums.

4. Materiāli un metodes

4.1. Ķimikālijas

Fura-2-acetoksimetilesteris (Fura-2-AM) un 3',3',3'-dipropiltiadikarbocianīna jodīds [DiSC3(5)] tika iegādāti no uzņēmuma Invitrogen (Karlsbāda, Kalifornija, ASV). ω-konotoksīns MVIIC, rottlerīns, 2-[1-(3-dimetilaminopropil)indol-3-il]-3-(indol-3-il)maleimīds ( GF109203X), 5,6,7,13-tetrahidro-13-metil-5-okso-12H-indolo[2,3-a]pirolo[3,{ {27}}c]karbazola-12-propānitrils (Go6976) un N-[2-(p bromocinnamilamino)etil]-5-izohinolīnsulfonamīds (H89) tika iegādāti no uzņēmuma TocrisBioscience (Bristole, Apvienotā Karaliste). ehinakozīds, dantrolēns, DL-treo-beta-benziloksiaspartāts (DL-TBOA), 7-hlor-5-(2-hlorofenils)-1,5-dihidro -4,1-benzotiazepīns-2(3H)-ons (CGP37157), 2-(2-amino-3-metoksifenils)-4 Tika iegādāts H-1-benzopirāns-4-ons (PD98059), etilēnglikola bis(-aminoetilēteris)-N,N,N1,N1-tetraetiķskābe (EGTA) un visi pārējie reaģenti. no Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, ASV).

4.2. Dzīvnieki

Tika izmantoti divus mēnešus veci Sprague-Dawley žurku tēviņi. Dzīvnieki tika izmitināti standartizētos vides apstākļos (22 ˘ 1 ˝C; 50 procentu relatīvais mitrums; 12 h gaismas/tumsas cikls), un tiem tika nodrošināta neierobežota piekļuve pārtikai un ūdenim. Dzīvnieki tika nogalināti, nogriežot galvas, un smadzeņu garoza tika ātri noņemta 4 ˝C temperatūrā. Eksperimentālās procedūras apstiprināja Fu Jen Institucionālā dzīvnieku kopšanas un izmantošanas komiteja (A10259) saskaņā ar Nacionālo veselības institūtu rokasgrāmatu laboratorijas dzīvnieku kopšanai un lietošanai. Tika pieliktas visas pūles, lai samazinātu dzīvnieku ciešanas un izmantotu minimālu dzīvnieku skaitu, kas vajadzīgs, lai iegūtu ticamus rezultātus.

4.3. Sinaptosomu preparāti

Sinaptosomas tika attīrītas no žurku smadzeņu garozas ar pārtrauktiem Percoll gradientiem, kā aprakstīts iepriekš [43, 44]. Īsumā, audi tika homogenizēti barotnē, kas satur 0,32 M saharozi (pH 7,4), homogenātu centrifugēja 10 min ar 3000ˆ g (5{{25). }}00 apgr./min JA 25.5 rotorā; Beckman Coulter, Inc., Maiami, FL, ASV) un 4 ˝C, un supernatantu vēlreiz centrifugēja 12 minūtes pie 14 500ˆ g ( 11,000 apgr./min JA 25.5 rotorā). Granulas tika viegli atkārtoti suspendētas 0,32 M saharozes (pH 7,4), un šīs sinaptosomu suspensijas alikvota daļa (2 ml) tika novietota uz 3 ml Percoll neregulāra gradienta, kas satur 0,32 M saharozes, 1 mM EDTA, 0,25 mM un 0,25 mililitrus DL. 3 procenti, 10 procenti un 23 procenti Percoll (pH 7,4). Pēc centrifugēšanas pie 32 500ˆ g (16 500 apgr./min JA 20.5 rotorā) 7 minūtes 4 ˝C, sinaptosomas tika iegūtas no 10% līdz 23% Percoll joslām, un tās tika atšķaidītas 30 ml galīgajā tilpumā. HEPES bufera barotnes (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHCO3, 1 mM MgCl2¨ 6H2O, 1,2 mM Na2HPO4, 10 mM glikozes un 10 mM HEPES (pH 7,4)). Pēc turpmākas centrifugēšanas pie 27, 000ˆ g (15 000 apgr./min JA 25.5) 10 minūtes, sinaptosomu granula tika atkārtoti suspendēta 3 ml HEPES bufera barotnes, un olbaltumvielu saturs tika noteikts, izmantojot Bredforda testu. Visbeidzot, 0, 5 mg sinaptosomu suspensijas atšķaidīja 10 ml HEPES bufera barotnes un centrifugēja pie 3000 ˆ g (5000 apgr./min JA 20.1 rotorā) 10 minūtes. Supernatants tika izmests, un granulas, kas satur sinaptosomas, tika uzglabātas uz ledus un izmantotas 4–6 stundu laikā.

4.4. Glutamāta izdalīšanās

Glutamāta izdalīšanos pārbaudīja ar tiešsaistes fluorimetru, kā aprakstīts iepriekš [45, 46]. Sinaptosomu granulas tika atkārtoti suspendētas HEPES bufera barotnē (0,5 mg/mL) un iepriekš inkubētas 37 ˝C 10 minūtes 16 µM liellopu seruma albumīna klātbūtnē, lai saistītu visas brīvās taukskābes, kas atbrīvotas no sinaptosomām pirmsinkubācijas laikā. 2- ml sinaptosomu alikvota daļa tika pārnesta uz maisītu kiveti, kas satur 2 mM NADP plus, 50 vienības glutamāta dehidrogenāzes un 1,2 mM CaCl2, un NADPH FL fluorescence tika mērīta ar Perkin-Elmer LS{{ 14}} spektrofluorimetrs (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, ASV) ar ierosmes un emisijas viļņu garumu attiecīgi 340 un 460 nm. Tā kā sinaptosomas nav pakļautas elektriskai stimulācijai, glutamāta izdalīšanās stimulēšanai tika izmantots kālija kanālu blokators 4-aminopiridīns. 4-Aminopiridīns destabilizē membrānas potenciālu un tiek uzskatīts, ka tas izraisa atkārtotu spontānu Na plus kanāla atkarīgu depolarizāciju, kas ļoti tuvina sinaptiskā gala depolarizāciju in vivo, kas izraisa no sprieguma atkarīgo Ca2 plus kanālu aktivizēšanos un neirotransmitera izdalīšanos [47] ]. Dati tika iegūti ar 2 s intervālu. Katra eksperimenta beigās tika pievienots eksogēnā glutamāta standarts (5 nmol). Standarta pievienošanas radītās FL fluorescences izmaiņu vērtība tika izmantota, lai aprēķinātu atbrīvoto glutamātu kā glutamāta nanomolus uz miligramu sinaptosomu proteīna (nmol / mg). Tekstā norādītās izdalīšanās vērtības ir līmeņi, kas sasniegti līdzsvara stāvoklī pēc 5 minūšu depolarizācijas (nmol/mg/5 min). Kumulatīvie dati tika analizēti, izmantojot Lotus 1-2-3 izklājlapas (IBM, White Plains, NY, ASV) un MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, ASV).

4.5. Plazmas membrānas potenciāls

Plazmas membrānas potenciāls tika noteikts ar membrānas potenciālu jutīgu krāsvielu DiSC3(5) [48]. Sinaptosomas tika atkārtoti suspendētas HEPES bufera barotnē, un 2 ml alikvotas tika pārnestas uz maisītu kiveti, kas satur 5 µM DiSC3(5) 37 ˝C temperatūrā Perkin-Elmer LS-55 spektrofluorometrā (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, ASV). Pēc tam, kad maisījumam bija ļauts līdzsvarot 3 minūtes, FL fluorescence tika noteikta attiecīgi ierosmes un emisijas viļņu garumā 646 un 674 nm. Dati tika savākti ar 2 sekunžu intervālu. Kumulatīvie dati tika analizēti, izmantojot MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, ASV) un izteikti FL fluorescences vienībās.

4.6. Citosola Ca2 plus koncentrācija ([Ca2 plus ]C)

[Ca2 plus ]C tika mērīts ar Ca2 plus indikatoru fura-2. Sinaptosomas (0,5 mg/mL) maisītā testā 30 minūtes iepriekš inkubēja HEPES buferbarotnē, kas satur 5 µM fura-2 un 0,1 mM CaCl2. caurule. Pēc fura-2 ielādes sinaptosomas tika centrifugētas mikrocentrifūgā 30 sekundes pie 3000ˆ g (5000 apgr./min.). Sinaptosomu granulas tika atkārtoti suspendētas HEPES bufera vidē, un sinaptosomu suspensija tika maisīta termostatētā kivetē Perkin-Elmer LS-55 spektrofluorometrā (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, ASV). CaCl2 (1 mM) tika pievienots pēc 3 minūtēm, un turpmākas pievienošanas tika veiktas pēc papildu 10 minūtēm. Fluorescences dati tika uzkrāti pie ierosmes viļņu garumiem 340 un 380 nm (emisijas viļņa garums 505 nm) ar 2 s intervālu. [Ca2 plus ]C (nM) tika aprēķināts, izmantojot kalibrēšanas procedūras [49] un vienādojumus, kas aprakstīti iepriekš [50]. Kumulatīvie dati tika analizēti, izmantojot MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, ASV).

4.7. Western blotēšana

Sinaptosomas tika homogenizētas līzes buferšķīdumā (10 mM HEPES buferšķīdums, pH 7,4), 1% Triton X-100 un proteāzes inhibitoru maisījumā. Lizāti tika dzidrināti, centrifugējot, un olbaltumvielu koncentrācija tika noteikta, izmantojot proteīna testa komplektu (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, ASV). Vienāds daudzums olbaltumvielu tika atdalīts ar nātrija dodecilsulfāta-poliakrilamīda gēla elektroforēzi (SDS-PAGE) un pārnests uz nitrocelulozes membrānu. Membrānas tika bloķētas ar Tris buferšķīdumu, kas satur 5 procentus piena ar zemu tauku saturu, un inkubēja ar atbilstošu primāro antivielu (fosfoproteīna kināzi C (pannā), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, ASV) nakti plkst. 4˝C. Pēc trīs mazgāšanas ar Tris buferšķīdumu membrāna tika apstrādāta ar sekundāro mārrutku peroksidāzes konjugētu antivielu (1:3000) 1 stundu istabas temperatūrā. Pēc tam membrānas vismaz trīs reizes nomazgāja ar Tris buferšķīdumu un vizualizēja, izmantojot uzlabotu ķīmiskās luminiscences sistēmu (Amersham, Bekingemšīra, Apvienotā Karaliste). Paraugu alikvota tika ievietota un pārbaudīta ar anti-PKC antivielu, lai noteiktu PKC kā iekraušanas kontroli. Ekspresijas vai fosforilācijas līmenis tika novērtēts pēc joslas blīvuma, ko kvantitatīvi noteica ar densitometriju. Joslu densitometriskā kvantitatīvā noteikšana tika analizēta, izmantojot Syngene programmatūru (Synoptics, Kembridža, Apvienotā Karaliste).

4.8. Statistiskā analīze

Dati tika iegūti no viena sinaptosomu preparāta un nebija neatkarīgi viens no otra. Lai pārbaudītu zāļu un kontroles ietekmes nozīmīgumu, tika izmantots divu virzienu Studenta t-tests. Ja bija nepieciešams papildu salīdzinājums (piemēram, vai otrā apstrāde ietekmēja ehinakozīda darbību), tika izmantota vienvirziena ANOVA, kam sekoja Tukey tests. Analīze tika pabeigta, izmantojot programmatūru SPSS (17.0; SPSS Inc., Čikāga, IL, ASV). Dati ir izteikti kā vidēji ˘ SEM; nozīmība tika novērtēta ar p < 0,05="" visiem="" statistikas="">

5. Secinājumi

Šis ir pirmais pētījums, kas to pierādaehinakozīdsinhibē glutamāta izdalīšanos no žurku smadzeņu garozas sinaptosomām, samazinot Ca2 plus pieplūdumu caur Cav2.2 un Cav2.1 kanāliem, un šī atbrīvošanās inhibīcija, visticamāk, ir atkarīga no proteīnkināzes C ceļa nomākšanas, vismaz daļēji. Šis atklājums ir vērtīgs, jo tas sniedz jaunu ieskatu ehinakozīda darbības mehānismos smadzenēs.

Pateicības:Šis darbs tika atbalstīts ar Zinātnes un tehnoloģiju ministrijas dotāciju (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Autora ieguldījums:Tzu Yu Lin un Su Jane Wang bija iecerējuši un izstrādājuši eksperimentus; Čens Vei Lu veica eksperimentus; Cheng Wei Lu un Shu Kuei Huang analizēja datus; Su Džeina Vanga uzrakstīja darbu.

Interešu konflikti:Autori nepaziņo par interešu konfliktiem.

Interešu konflikti: autori paziņo, ka nav interešu konflikta.

Atsauces

1. Tu, PF; Vangs, B.; Dejama, T.; Džans, ZG; Lou, ZC Analysis of phenylethanoid glycosides ofHerba cistancheRP-HPLC. Acta Pharm. Grēks. 1997, 32, 294-300.

2. Dalbijs-Brauns, L.; Barets, H.; Landbo, AK; Meiers, AS; Molgaard, P. Alkalamīdu, kofeīnskābes atvasinājumu un Echinacea purpurea polisaharīdu frakciju sinerģiska antioksidatīva iedarbība uz cilvēka zema blīvuma lipoproteīnu oksidāciju in vitro. J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 9413-9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernici, S.; Grasi, G.; Voinovich, D. Imūnmodulācija, ko nodrošina augu sīrups, kas satur standartizētu ehinācijas saknes ekstraktu: izmēģinājuma pētījums veseliem cilvēkiem par citokīnu gēnu ekspresiju. Fitomedicīna 2014, 21, 1406-1410. [CrossRef] [PubMed]

4. Viņš, WJ; Fang, TH; Tu, PF Ehinakozīda farmakoloģisko aktivitāšu izpētes progress. Ķīna J. Čins. Mater. Med. 2009, 34, 476-479.

5. Dengs, M.; Džao, Dž. Tu, PF.; Dzjans, Y; Li, ZB; Wang, YH ehinakozīds glābj SHSY5Y neironu šūnas no TNFalpha izraisītas apoptozes. Eiro. J. Pharmacol. 2004, 505, 11-18. [CrossRef] [PubMed]

6. Kū, KA; Sung, SH; Parks, JH; Kima, SH; Lī, KY; Kim, YC Callicarpa dihotomas feniletanoīdu glikozīdu neiroprotektīvās aktivitātes in vitro. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]

7. Van, YH; Sjuaņa, ZH; Tjans, S.; Du, GH ehinakozīds aizsargā pret 6-hidroksidopamīna izraisītu mitohondriju disfunkciju un iekaisuma reakciju PC12 šūnās, samazinot ROS veidošanos. Evid. Pamatots papildinājums. Altern. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Žu, M.; Lu, C.; Li, W. Pārejoša ehinakozīda iedarbība ir pietiekama, lai aktivizētu Trk signalizāciju un aizsargātu neironu šūnas no rotenona. J. Neurochem. 2013, 124, 571-580. [CrossRef] [PubMed]

9. Gengs, X.; Tjans, X.; Tu, P.; Pu, X. ehinakozīda neiroprotektīvie efekti Parkinsona slimības peles MPTP modelī. Eiro. J. Pharmacol. 2007, 564, 66-74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, LL; Čens, H.; Dzjans, Y; Tu, PF.; Džons, M.; Du, J.; Liu, F.; Van, L.; Liu, CY Ehinakozīda ietekme uz aktīvās masas histiocentrālo līmeni vidējo smadzeņu artēriju oklūzijas žurkām. Biomed. Vide. Sci. 2012, 25, 238-244. [PubMed]

11. Wu, CR; Lin, HC; Su, MH Apvērsums ar ūdens ekstraktiem noCistanche tubulosano uzvedības deficīta Alcheimera slimībai līdzīgā žurku modelī: nozīme amiloīda nogulsnēšanās un centrālā neirotransmitera funkcijai. BMC papildinājums. Altern. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, V.; Cai, D. Echinacoside neirotrofiskie un neiroglābšanas efekti Parkinsona slimības subakūtā MPTP peles modelī. Brain Res. 2010, 1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS Glutamāts kā neirotransmiters smadzenēs: fizioloģijas un patoloģijas pārskats. J. Nutr. 2000, 130, 1007S-1015S. [PubMed]

14. Lī, D.; Shim, MS; Kima, KY; Nē, JH; Kims, H.; Kima, SY; Veinreba, RN; Ju, WK Koenzīms Q10 inhibē glutamāta eksitotoksicitāti un oksidatīvā stresa izraisītas mitohondriju izmaiņas glaukomas peles modelī. Izpētīt. Oftalmols. Vis. Sci. 2014, 55, 993-1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW Kalcijs un eksitotoksisks neironu bojājums. Ann. NY Akad. Sci. 1994, 747, 162-171. [CrossRef] [PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Glutamāta receptori, neirotoksicitāte un neirodeģenerācija. Pflugers. Arch. 2010, 460, 525-542. [CrossRef] [PubMed]

17. Satlers, R.; Tymianski, M. Glutamāta receptoru izraisītas eksitotoksiskas neironu šūnu nāves molekulārie mehānismi. Mol. Neirobiol. 2001, 24, 107-129. [CrossRef]

18. Schauwecker, PE Neiroprotekcija ar glutamāta receptoru antagonistiem pret krampju izraisītu eksitotoksisku šūnu nāvi novecojošās smadzenēs. Exp. Neirol. 2010, 224, 207-218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakhts, F.; Bahmanpoui; S.; Rastegars, K.; Namavar, R. NMDA un I grupas metabotropo glutamāta receptoru antagonistu neiroprotektīvā iedarbība pret homocisteīna izraisītu neirodeģenerāciju žurku hipokampā: In vivo pētījums. J. Mol. Neirosci. 2013, 50, 551-557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Eksitotoksicitātes loma neirodeģeneratīvās slimībās: ietekme uz terapiju. Pharmacol. Tur. 1999, 81, 163-221. [CrossRef]

21. Muir, KW Uz glutamātu balstītas terapeitiskās pieejas: klīniskie pētījumi ar NMDA antagonistiem. Curr. Atzinums. Pharmacol. 2006, 6, 53-60. [CrossRef] [PubMed]

22. Gonsaless, JC; Egeja, J.; del Karmena Godino, M.; Fernandess-Gomezs, FJ; Sančess-Prieto, Dž.; Gandija, L.; Garsija, AG; Jordānija, J.; Hernandez-Guijo, JM neiroprotektants minociklīns nomāc glutamaterģisko neirotransmisiju un Ca2 plus signālu pārraidi hipokampu neironos. Eiro. J. Neurosci. 2007, 26, 2481-2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, CW; Lin, TY; Wang, SJ Memantīns nomāc glutamāta izdalīšanos, inhibējot no sprieguma atkarīgo Ca2 plus ievadi un proteīnkināzes C žurku smadzeņu garozas nervu terminālos: no NMDA receptoriem neatkarīgs mehānisms. Neurochem. Int. 2010, 57, 168-176. [CrossRef] [PubMed]

24. Van, SJ; Sihra, TS Nekonkurētspējīgs metabotropiskais glutamāta 5 receptoru antagonists (E)-2-metil-6- stirilpiridīns (SIB1893) nomāc glutamāta izdalīšanos, kavējot no sprieguma atkarīgo Ca2 plus iekļūšanu žurku smadzeņu garozas nervu galos (sinaptosomās). J. Pharmacol. Exp. Tur. 2004, 309, 951-958. [CrossRef] [PubMed]

25. Danklijs, PR.; Džārvijs, PE; Hīts, JW; Kids, GJ; Rostas, JA Ātra metode sinaptosomu izolācijai uz Percoll gradientiem. Brain Res. 1986, 372, 115-129. [CrossRef]

26. Araque, A.; Li, N.; Doils, RT; Haydon, PG SNARE proteīnu atkarīgā glutamāta izdalīšanās no astrocītiem. J. Neurosci. 2000, 20, 666-673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Uz glutamātu balstītas terapijas pieejas: glutamāta transporta sistēmas mērķēšana. Curr. Atzinums. Pharmacol. 2006, 6, 103-107. [CrossRef] [PubMed]

28. Cuki, R.; Ronca-Testoni, S. Sarkoplazmatiskais tīkls Ca2 plus kanāls/rianodīna receptors: modulācija ar endogēniem efektoriem, zālēm un slimību stāvokļiem. Pharmacol. Rev. 1997, 49, 1-51. [PubMed]

29. Fan, Y.; Li, J.; Džans, YQ; Dzjana, LH; Džans, YN; Yan, CQ Proteīna kināzes C delta mediēta 6-hidroksidopamīna citotoksicitāte, izmantojot ilgstošu ārpusšūnu signālu regulētas kināzes 1/2 aktivāciju PC12 šūnās. Neirol. Res. 2014, 36, 53-64. [CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Mullers, HJ; Ķīlbassa, K.; Zangs, R.; Kitšteins, V.; Rinke, G.; Marks, F. Rottlerin, jauns proteīnkināzes inhibitors. Biochem. Biofizija. Res. Commun. 1994, 199, 93-98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nikolss, ģenerāldirektorāts; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. No kalcija atkarīga un neatkarīga glutamāta izdalīšanās no sinaptosomām, ko uzrauga ar nepārtrauktu fluorometriju. J. Neurochem. 1987, 49, 50-57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, RA Neirotransmitera receptoru savienošana ar jonu kanāliem smadzenēs. Science 1988, 241, 545-551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, LG; Saggau, P. Presinaptiskā inhibīcija izraisīja neirotransmitera atbrīvošanu. Trends Neurosci. 1997, 20, 204-212. [CrossRef]

34. Tērners, TJ; Dunlap, K. Presinaptisko kalcija kanālu farmakoloģiskais raksturojums, izmantojot sinaptosomu neirosekrēcijas subsekundāros bioķīmiskos mērījumus. Neuropharmacology 1995, 34, 1469-1478. [CrossRef]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. N- un P/Q-tipa kalcija kanālu diferenciālā savienošana ar glutamāta eksocitozi žurku smadzeņu garozā. Neirosci. Lett. 2002, 330, 29-32. [CrossRef]

36. Vazkess, E.; Sanchez-Prieto, J. Presinaptiskā glutamāta izdalīšanās modulācija ir vērsta uz dažādiem kalcija kanāliem žurku smadzeņu garozas nervu terminālos. Eiro. J. Neurosci. 1997, 9, 2009-2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Garais, P; Mersers, A.; Begums, R.; Stīvenss, GJ; Sihra, TS; Jovanovičs, JN nervu termināla GABAA receptori aktivizē Ca2 plus/kalmodulīna atkarīgo signalizāciju, lai kavētu no sprieguma atkarīgo Ca2 plus pieplūdumu un glutamāta izdalīšanos. J. Biol. Chem. 2009, 284, 8726-8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Tērners, Dž.R.; Leņķis, JM; Melns, ED; Joyal, JL; Sacks, DB; Madara, JL No PKC atkarīga transepiteliālās rezistences regulēšana: MLC un MLC kināzes lomas. Am. J. Physiol. 1999, 277, C554-C562. [PubMed]

39. Vona, PF; Vokers, JH; Peters, C. Neirotransmitera sekrēcijas regulēšana ar proteīnkināzi C. Mol. Neirobiol. 1998, 18, 125-155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nikolss, ģenerāldirektorāts; Pokoks, JM Sinapsīna I un MARCKS fosforilāciju nervu terminālos veicina Ca2 plus ievadīšana caur Aga-GI jutīgu Ca2 plus kanālu, kas ir saistīts ar glutamāta eksocitozi. FEBS Lett. 1994, 353, 264-268. [CrossRef]

41. Obrenovičs, TP; Urenjak, J. Mainīta glutamaterģiskā transmisija neiroloģisku traucējumu gadījumā: no augsta ekstracelulārā glutamāta līdz pārmērīgai sinaptiskajai efektivitātei. Prog. Neirobiol. 1997, 51, 39-87. [CrossRef]

42. Džans, D.; Li, H.; Wang, JB Echinacoside inhibē HEWL amiloīda fibrilizāciju un aizsargā pret Ap izraisītu neirotoksicitāti. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243-253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, TY; Lu, CW; Vanga, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispidulin inhibē glutamāta izdalīšanos žurku smadzeņu garozas nervu terminālos. Toksikols. Appl. Pharmacol. 2012, 263, 233-243. [CrossRef] [PubMed]

44. Čanga, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huanga, SK; Vanga, YC; Čou, SS; Wang, SJ Hesperidīns inhibē glutamāta izdalīšanos un iedarbojas uz neiroaizsardzību pret eksitotoksicitāti, ko žurku hipokampā izraisa kainskābe. Neirotoksikoloģija 2015, 2015,157-169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nikolss, ģenerāldirektorāts; Sihra, TS Synaptosomām ir glutamāta eksocitotisks kopums. Nature 1986, 321, 772-773. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Vangs, CC; Kuo, JR; Wang, SJ Dimebon, antihistamīna zāles, inhibē glutamāta izdalīšanos žurku smadzeņu garozas nervu terminālos. Eiro. J. Pharmacol. 2014, 734, 67-76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibs, GR; Barijs, AP; van Mīhems, FJ; Mc-Mahon, HT; Nicholls, DG. Atkārtotas darbības potenciāli izolētos nervu galos 4-aminopiridīna klātbūtnē: ietekme uz citosoliskā brīvā Ca2 plus un glutamāta izdalīšanos. J. Neurochem. 1989, 53, 1693-1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akermans, KE; Skots, LG; Heikila, JE; Heinonens, E. Membrānas potenciāla un ar glutamāta receptoru saistīto reakciju jonu atkarība sinaptoneurosomās, mērot ar cianīna krāsu DiSC2 (5). J. Neurochem. 1987, 48, 552-559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, TS; Bogoness, E.; Nicholls, DG Lokalizētā Ca2 plus ievadīšana galvenokārt ietekmē olbaltumvielu defosforilāciju, fosforilāciju un glutamāta izdalīšanos. J. Biol. Chem. 1992, 267, 1983-1989. [PubMed]

50. Grinkevičs, G.; Poenie, M.; Tsien, RY Jaunas paaudzes Ca2 plus indikatori ar ievērojami uzlabotām fluorescences īpašībām. J. Biol. Chem. 1985, 260, 3440-3450. [PubMed]