Paredzēt LncRNS lomu nieru novecošanā, pamatojoties uz RNS sekvencēšanu Ⅱ

LncRNS Gm43360 un tās potenciālo mērķa mRNS korelācija

LncRNA Gm43360 tika izvēlēts pētījumam, jo ​​tas savienoja divus lncRNA-mRNS koekspresijas tīklus. Adra1a ekspresijas līmenis bija pozitīvi korelēts (rho=0.8650, p=0.026) ar Gm43360 ekspresijas līmeni, Csnk1a1 (kazeīna kināze 1A1) bija negatīvi korelēta (rho{{12). }}.8084, p=0.0084) (5.a att.). Lai vēl vairāk pārbaudītu lncRNS Gm43360 un tā potenciālo mērķa mRNS Adra1a un Csnk1a1 korelāciju, šajā pētījumā tika izstrādāta lncRNA Gm43360 pārmērīgas ekspresijas plazmīda. Csnk1a1 ekspresija samazinājās, kā gaidīts, un arī Adra1a ekspresija samazinājās, bet ne būtiski. Pēc tam mēs notriekām lncRNA Gm43360 ar siRNS, lai noteiktu, vai tika ietekmēta tā mērķa mRNS ekspresija. Kā gaidīts, Csnk1a1 palielinājās lncRNA Gm43360 notriektajās šūnās, salīdzinot ar siRNS negatīvās kontroles grupu (5.b attēls). Desmit, mēs atklājām lncRNA Gm43360 lomu šūnu ciklā. Šūnu skaitīšanas komplekta-8 (CCK-8) rezultāti parādīja, ka lncRNS Gm43360 veicināja šūnu dzīvotspēju (5.c attēls). Rezultāti parādīja, ka lncRNS Gm43360 palielināja S fāzes šūnu procentuālo daudzumu un samazināja G1 fāzes šūnu procentuālo daudzumu, salīdzinot ar negatīvo kontroli (5.d attēls). Te p53 un p21 proteīni bija iesaistīti šūnu cikla regulēšanā un tādējādi bija šūnu novecošanās pazīmes. P53 un p21 ekspresijas līmeņi bija ievērojami samazināti pārmērīgas ekspresijas grupā, salīdzinot ar kontroles grupu. P53 un p21 ekspresijas līmeņi bija ievērojami paaugstināti siRNS grupā salīdzinājumā ar siRNS kontroles grupu (5.e att.). LncRNS Gm43360 pārmērīga ekspresija samazināja SA- -gal-pozitīvo šūnu skaitu, un -gal-pozitīvo šūnu skaits palielinājās transfekta Gm43360 grupā (5.f attēls). Kopumā šie rezultāti liecināja, ka lncRNS Gm43360 kavēja nieru kanāliņu epitēlija šūnu novecošanos,inhibējot Csnk1a1 ekspresiju.

KLIKŠĶINIET ŠEIT, LAI IEGŪTU DABĪGU ORGANISKO CISTANŠES EKSTRAKTU AR 25% EHINAKOZĪDU UN 9% AKTEOZĪDU NIERU FUNKCIJAI

Diskusija

Šajā pētījumā mēs novērtējām mRNS ekspresijas datus no jaunām un vecām peļu nierēm un veicām bioinformācijas analīzes, kas atklāja aberranti ekspresēto mRNS funkcijas. Mēs novērojām 347 augšupregulētas mRNS un 355 pazeminātas mRNS, kā arī 130 augšupregulētas lncRNS un 91 pazeminātas lncRNS.vecās peļu nieres salīdzinājumā ar jauno peļu nierēm. Turklāt tika pierādīts, ka šīs mRNS ir iesaistītas ar novecošanu saistītos ceļos, piemēram,oksidatīvā fosforilēšana, AMPK signalizācijas ceļš, Wnt signalizācijas ceļš, Rap1 signalizācijas ceļš un ar vecumu saistīta slimība, kas parādīja diferencēti izteiktu mRNS funkcijas nieru novecošanās patoģenēzē.

Garā nekodētā RNS NEAT1 ir aizsargājošs faktors nieru fibrozes progresēšanā nieru kanāliņu epitēlija šūnās [21]. Nejauši mūsu sekvencēšanas rezultātos lncRNA NEAT1 tika izteikts zemākā līmenī vecu peļu nierēs nekā jaunām pelēm, kas atbilst iepriekšējiem atklājumiem. LincRNA-Gm4419 paātrina iekaisumu un fibrozi ar NF-kB/NLRP3 iekaisuma izraisītiem mehānismiem diabētiskās nefropātijā [22]. Savos sekvencēšanas rezultātos mēs arī atklājām, ka Gm4419 ekspresija bija augstāka vecu peļu nierēs nekā jaunām pelēm, taču nebija būtiskas atšķirības. LncRNA Gm43360 atrodas 5. hromosomā (Chr5: 122494022–122 494 908, 2887 bp). Saskaņā ar UCSC genoma pārlūkprogrammu Gm43360 atrodas proteīnu kodējošā gēna Atp2a2 intronā. Tomēr līdz šim nav saņemti ziņojumi par lncRNA Gm43360 iesaistīšanos slimībās. Šajā pētījumā lncRNA Gm43360 notriekšana veicināja nieru kanāliņu epitēlija šūnu novecošanos. Turklāt secības rezultātos mēs identificējām daudzas atšķirīgi izteiktas lncRNS un tos pētījām.

LncRNS tika klasificētas cis-regulācijā vai transregulācijā, pamatojoties uz lncRNS regulēšanas mehānismiem. Cis darbības lncRNS var ietekmēt blakus esošo gēnu ekspresiju, atkarībā no cis darbības elementiem, piemēram, promotoriem, pastiprinātājiem un regulējošām sekvencēm, kas ir attālumi starp lncRNS un mRNS, kas ir mazāki par 100 kb. Transaktīvās darbības lncRNS attiecas uz lncRNS, kas atstāj transfekcijas vietu un darbojas attālās vietās (ti, attālums starp lncRNS un mRNS ir lielāks par 100 kb) [23]. LncRNS MAAT palielina blakus esošā gēna Mbnl1 ekspresiju, izmantojot cis-regulācijas moduli [24]. LncRNA Pnky spēlē lomu kā trans-darbības regulators garozas attīstībā [25]. Šajā pētījumā starp lncRNS Gm43360 un Csnk1a1 bija transregulējoša saistība. Csnk1a1 ir audzēja supresora gēns [26], kas kodē proteīnu, kas piedalās šūnu ciklā un šūnu dalīšanās procesā [27]. Csnk1a1 pazemināta regulēšana izraisaar novecošanos saistīts iekaisumsatbildes reakcija ar augšanas apstāšanos kolorektālo audzēju gadījumā [26]. Csnk1a1 tika pazemināts, kad Gm43360 tika paaugstināts; tādējādi ir iespējams, ka lncRNA Gm43360 piedalāsnieru novecošanāsautorsregulē Csnk1a1 izteiksmi.

Secinājumi

Mūsu pētījums par lncRNS-mRNS koekspresijas tīklunieru novecošanāsatklāja, ka lncRNS, lncRNA Gm43360, var būt aizsargājoša loma nieru novecošanā un paplašināja mūsu izpratni par mehānismiem, kas saistīti arnieru novecošanās

materiāli un metodes

Paraugi Jaunas (3- mēnešus vecas) un vecas (24- mēnešus vecas) vīriešu kārtas C57BL/6J peļu paraugi tika iegādāti no Sjameņas Universitātes Eksperimentālo dzīvnieku centra un tika audzēti standarta vidē. Visām pelēm bija brīva piekļuve pārtikai un ūdenim. Peles tika aklimatizētas ar jauno objektu mēnesi, pirms tās tika upurētas. Pirms paraugu ņemšanas peles tika anestēzētas ar uretānu, intraperitoneāli injekcijas veidā devā 750 mg/kg. Jaunas un vecas peles tika upurētas tajā pašā dienā.Atlikušās peles nieresaudi tika izmantoti sekvencēšanai katrā testā. Tika veikta RNS-seq un histopatoloģijaatsevišķas nieresno tās pašas peles. Nieru audi tika savākti no pelēm. Viena niere nekavējoties tika iegremdēta 10% neitrālā buferētā formalīnā turpmākai sekciju iegulšanai, bet otra niere tika sadalīta vairākos audos un nekavējoties ievietota šķidrā slāpeklī un pēc tam uzglabāta -80 pakāpē. Pētījumu atbalstīja Sjaņas Dzjaotongas universitātes (Šaņsji, Ķīna) pirmās saistītās slimnīcas Ētikas komiteja (Nr. 2018-G-164). Visas metodes tika veiktas saskaņā ar dzīvnieku ētikas vadlīnijām un noteikumiem. Šis pētījums tika veikts saskaņā ar ARRIVE vadlīnijām.

Nieru histopatoloģija

Jaunu un vecu peļu nieru audu paraugi tika fiksēti 10% paraformaldehīda šķīdumā nakti. Desmit no sekcijām bija dehidrētas, iestrādātas parafīnā un sadalītas 4-µm biezumā. PAS un Masona trihromatiskā krāsošana tika veikta, izmantojot standarta protokolus. Attēli tika uzņemti ar kameru, un tika izmērīts krāsojuma pozitīvais laukums. Histopatoloģijas kameras attēlu laukums tika aprēķināts ar Image-Pro Plus 6.0.

SA-gal krāsošana

SA{{0}}gal aktivitāte tika analizēta, izmantojot SA- -gal krāsošanas komplektu (Cell Signaling Technology #9860) saskaņā ar ražotāja protokolu. Tika izmērīts pozitīvās iekrāsošanās laukums, un SA- -gal-pozitīvās šūnas tika aprēķinātas, izmantojot Image-Pro Plus 6.0.

RNS ekstrakcijas bibliotēkas uzbūve un sekvencēšana

Samples (each 5 mice in young and old mice) were used for lncRNA and mRNA expression analyses. Young mice were numbered 3M1, 3M2, 3M3, 3M4, and 3M5, and old mice were numbered 24M1, 24M2, 24M3, 24M4, and 24M5. Total RNA was extracted using Trizol reagent (thermofsher, 15,596,018) following the manufacturer's instruction. The total RNA quantity and purity were analyzed of Bioanalyzer 2100 and RNA 6000 Nano LabChip Kit (Agilent, CA, USA, 5067−1511), and high-quality RNA samples with RIN number>7.{1}} tika izmantoti, lai izveidotu secības bibliotēku. Pēc kopējās RNS ekstrakcijas mRNS tika attīrīta no kopējās RNS (5 ug), izmantojot Dynabeads Oligo (dT) (Thermo Fisher, CA, ASV) ar divām attīrīšanas kārtām. Pēc attīrīšanas mRNS tika sadalīta īsos fragmentos, izmantojot divvērtīgus katjonus augstā temperatūrā (Magnija RNS fragmentācijas modulis (NEB, kat. e6150, ASV) zem 94 grādiem 5-7 min). Pēc tam šķeltie RNS fragmenti tika reversi transkribēti, lai iegūtu cDNS ar SuperScript™ II reversās transkriptāzes palīdzību (Invitrogen, kat. 1 896 649, ASV), ko pēc tam izmantoja, lai sintezētu U-marķētas otrās ķēdes DNS ar E. coli DNS polimerāzi I ( NEB, cat.m0209, ASV), RNase H (NEB, cat.m0297, ASV) un dUTP Solution (Termo Fisher, kat.R0133, ASV). Pēc tam katras šķipsnas neasajiem galiem tika pievienota A-bāze, sagatavojot tos sasiešanai ar indeksētajiem adapteriem. Katrs adapteris saturēja T-bāzes pārkari, lai savienotu adapteri ar A veida fragmentēto DNS. Divu indeksu adapteri tika piesaistīti fragmentiem, un izmēra izvēle tika veikta ar AMPureXP lodītēm. Pēc termiski labilā UDG enzīma (NEB, kat.m0280, ASV) apstrādes ar U-marķētajām otrās ķēdes DNS, ligētie produkti tika pastiprināti ar PCR šādos apstākļos: sākotnējā denaturācija 95 grādos 3 minūtes; 8 denaturēšanas cikli 98 grādos 15 s, atkausēšana 60 grādos 15 s un pagarināšana 72 grādos 30 s; un tad pēdējais pagarinājums 72 grādos uz 5 minūtēm. Vidējais ievietošanas garums galīgajām cDNS bibliotēkām bija 300 ± 50 bp. Visbeidzot, saskaņā ar ražotāja protokolu mēs veicām 2 × 150 bp pāru galu sekvencēšanu (PE150) ar Illumina Novaseq™ 6000 (LC-Bio Technology CO., Ltd., Hangdžou, Ķīna) [28].

Bioinformātikas analīze Clean Reads secība un filtrēšana

cDNS bibliotēka, kas izveidota ar tehnoloģiju no apvienotās RNS nonieru paraugipeļu tika sekvencētas un darbinātas ar Illumina NovaseqTM 6000 sekvences platformu. Izmantojot Illumina pāra gala RNS-seq pieeju, mēs sekvencējām transkriptu, kopumā ģenerējot miljonus 2 × 150 bp pāru galu nolasījumus. Nolasījumi, kas iegūti no sekvencēšanas iekārtām, ietver neapstrādātus nolasījumus, kas satur adapterus vai zemas kvalitātes bāzes, kas ietekmēs turpmāko montāžu un analīzi. Tādējādi, lai iegūtu augstas kvalitātes tīrus nolasījumus, nolasījumus tālāk filtrēja Cutadapt [29] (https://cutadapt.readthedocs.io/en/stable/, version:cutadapt-1.9). Parametri bija šādi:

1) adapterus saturošu nolasījumu noņemšana;

2) nolasījumu noņemšana, kas satur poliA un poli;

3) nolasījumu noņemšana, kas satur vairāk nekā 5% nezināmu nukleotīdu (N);

4) zemas kvalitātes nolasījumu noņemšana, kas satur vairāk nekā 20% zemas kvalitātes (Q vērtība Mazāka vai vienāda ar 20) bāzēm.

Desmit secību kvalitāte tika pārbaudīta, izmantojot FastQC [30] (http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/, 0.11.9). ieskaitot tīro datu Q20, Q30 un GC saturu. Pēc tam kopā tika iegūti G bp notīrīti, pārī savienoti nolasījumi. Neapstrādātie secību dati ir iesniegti NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) datu kopām ar piekļuves numuru GSE154223.

Atsauces genoms/anotācija bija Mus{0}}musculus.GRCm38. Analīzei izmantotās gēnu anotācijas avots un versija bija Ensembl_v88.

Stenogrammu salikšana

Pirmkārt, Cutadapt [29] tika izmantots, lai noņemtu nolasījumus, kas saturēja adaptera piesārņojumu, zemas kvalitātes bāzes un nenoteiktas bāzes. Desmit secību kvalitāte tika ļoti nodrošināta, izmantojot FastQC (//www.bioinformatics.Babra ham.ac.uk/projects/fastqc/). Mēs izmantojām Bowtie2 [31] un Hisat2 [32], lai kartētu nolasījumus uz peles genomu. Katra parauga kartētie nolasījumi tika apkopoti, izmantojot StringTie [33]. Desmit, visi atšifrējumi nonieru paraugitika apvienoti, lai rekonstruētu visaptverošu transkriptu, izmantojot Perl skriptus. Pēc galīgā transkripta ģenerēšanas StringTie [33] un edgeR [34] tika izmantoti, lai novērtētu visu transkriptu ekspresijas līmeņus.

LncRNS identifikācija

Pirmkārt, tika izmesti transkripti, kas pārklājās ar zināmām mRNS, un transkripti, kas īsāki par 200 bp. Pēc tam mēs izmantojām CPC [35] un CNCI [36], lai prognozētu transkriptus ar kodēšanas potenciālu. Visi atšifrējumi ar MPK punktu skaitu<-1 and CNCI score<0 were removed. The remaining transcripts were considered as lncRNAs.

Diferenciāli izteiktas analīzes gēnu (DGE) analīze

StringTie [33] was used to perform expression levels for mRNAs and lncRNAs by calculating FPKM [37]. Genes differential expression analysis was performed by DESeq2 software between two different groups (and by edgeR between two samples) [34, 38]. The genes with the parameter of q value below 0.6 and absolute fold change>2 tika uzskatīti par atšķirīgi izteiktiem gēniem.

Mērķa gēnu prognozēšana un lncRNS funkcionālā analīze

Lai izpētītu lncRNS funkcijas, mēs paredzējām lncRNS cis-mērķa gēnus. LncRNS var spēlēt cis lomu, iedarbojoties uz blakus esošajiem mērķa gēniem. Šajā pētījumā kodējošie gēni 100,000 augšpus un lejpus tika atlasīti ar Perl skriptu. Pēc tam mēs parādījām lncRNS mērķa gēnu funkcionālo analīzi, izmantojot skriptus BLAST2GO [39]. Pilna komandu saite uz publisko domēnu bija Jie-Li/README.md galvenajā adresē · dandan-li/Jie-Li (github.com).

Gēnu ontoloģijas (GO) kategorijas un Kioto gēnu un genomu enciklopēdijas (KEGG) analīze

Bioinformātikas analīze RNS sekvencēšanai tika veikta, izmantojot OmicStudio rīkus (//www.omicsudio.cn/tool). Gēnu ontoloģijas (GO) funkcionālās bagātināšanas analīze un Kioto gēnu un genomu enciklopēdijas (KEGG) [37–39] bagātināšanas analīze tika izmantota, lai analizētu paredzēto mērķa gēnu bioloģiskās funkcijas. GO analīze precizē galvenos bioloģiskos procesus, izmantojot trīs aspektus: šūnu sastāvu, molekulārās funkcijas un bioloģiskos procesus (//www.geneontology.org/). Vispirms analīze ievieto visus diferencēti izteiktos gēnus un fona gēnus GO datu bāzē. Katrs vienums tiek kartēts, tiek aprēķināts gēnu skaits katrā vienumā, un hiperģeometriskais sadalījums tiek izmantots, lai veiktu hipotēžu pārbaudi, lai iegūtu bagātināšanas rezultāta P vērtību. Jo zemāka ir P vērtība, jo nozīmīgāks ir bagātināšanas rezultāts. KEGG ir datu bāzes resurss, kas analizē atšķirīgi izteiktās mRNS ar ģenētiskās bioloģijas palīdzību, lai izpētītu svarīgus ceļus, kas saistīti ar mērķa gēniem (https://www.genome.jp/kegg/). Rezultātus izsaka ar p vērtībām; jo zemāka p vērtība, jo nozīmīgāks ir bagātināšanas rezultāts.

qRT-PCR

GAPDH tika izmantots kā endogēna kontrole. Pēc tam tika aprēķināti nezināmu gēnu relatīvie ekspresijas līmeņi. Visi primeri tika izstrādāti un sintezēti īpaši šim eksperimentam. GAPDH grunti ir komercializēti. Adra1a un Csnk1a1 primeru specifika tika identificēta pēc kausēšanas līknes vienas pīķa.

Izveidojiet mRNS-lncRNS koekspresijas tīklu

Pārregulēšana tika balstīta uz pētījumiem, un pēc tam tika aprēķināta transenerģija. Jo mazāka bija transenerģija, jo lielāka saistīšanās iespēja. Pēc tam tika aprēķināts arī mRNS-lncRNS korelācijas koeficients. MRNS-lncRNS tīkls tika izveidots, izvēloties Spīrmena korelācijas koeficientu, kas pārsniedz 0.9. MRNS-lncRNS koekspresijas tīkls tika izveidots, izmantojot programmatūru Cytoscape (v3.7.1).

Šūnu kultūra

Peļu nieru proksimālās kanāliņu epitēlija šūnas (MRPT-EpiC) tika kultivētas epitēlija šūnu barotnē-dzīvnieka (EpiCM-a, Cat. Nr. 4131), kas satur 2% liellopu augļa serumu (FBS, Cat. Nr. 0010) un Epitēlija šūnu augšanas papildinājumu-dzīvnieku. (EpiCGS-a, Cat. #4182) bez antibiotikām mitrinātā inkubatorā 37 grādu temperatūrā un 5% CO2. Barotne tika mainīta ik pēc 2–3 dienām. Šūnas logaritmiskās augšanas fāzē tika subkultivētas, kad augšana sasniedza 90%. Ar tripsīnu sagremotā šūnu suspensija tika iesēta 6-iedobju plāksnēs ar 2*104 -5*104 šūnām katrā iedobē. Visas transfekcijai izmantotās šūnas bija no 2. līdz 5. paaudzei.

Plazmīdu uzbūve un šūnu transfekcija

LncRNA Gm43360 pārmērīgas ekspresijas plazmīdu izveidoja GeneChem (Šanhaja, Ķīna). Plazmīdas mugurkauls bija GV658, un CMV promotors vadīja lncRNS ekspresiju. Klonētā nukleotīdu secība ir sniegta papildu materiālā. Lai veiktu lncRNA Gm43360 notriekšanu, trīs lncRNS ENS OBLIGĀTI00000197656-mērķa siRNS (lncRNA Gm43360- siRNA1, 5'-CCUUCACUCCAGCUGGUAATT-3'; lncRNA Gm43360-siRNA2, 5'-CCCUGUCACUCA UGAAGUUTT-3' un lncRNA Gm43360-siRNA3, 5'-GGUCAAAUAACUCAAUGGGTT-3') tika izstrādāti un sintezēti uzņēmumā GenePharma (Šanhaja, Ķīna). Saskaņā ar ražotāja protokolu šūnas tika transficētas ar 2500 ng plazmīdas vai 100 pmol siRNS ar 6 µl Lipofectamine™ 2000 transfekcijas reaģenta (Invitrogen, ASV) katrā iedobē. RNS un olbaltumvielu ekspresijas līmeņi tika konstatēti 48 stundas pēc transfekcijas, un katrs eksperiments tika atkārtots vismaz trīs reizes. Reāllaika kvantitatīvā PCR tika izmantota, lai apstiprinātu lncRNA Gm43360 pārmērīgas ekspresijas un notriekšanas efektivitāti.

Western blot analīze

Kultivētās šūnas tika mazgātas ar ledus aukstu PBS, pievienoja 120 µl RIPA buferšķīduma (Heart, Ķīna) un proteāzes inhibitoru un PMSF (Sirds, Ķīna) pievienoja 30 minūtes uz ledus. Pēc šūnu savākšanas dažādās mikrocentrifūgas mēģenēs proteīna koncentrācija tika kvantitatīvi noteikta. Katram paraugam tika pievienots ielādes buferis un pēc tam vārīts 7 minūtes. Trīsdesmit mikrogramus parauga atdalīja ar 12% SDS-PAGE (Beyotime, Ķīna) un elektriski pārnesa uz PVDF membrānām (Thermo Fisher, ASV). Pēc tam membrānas tika bloķētas ar 5% pienu. Membrānas tika inkubētas ar specifiskām primārajām antivielām: anti-p21 (1:1000, Abcam, ab109199), anti-p53 (1:1000, Proteintech, 10442-1-AP) un anti-GAPDH (1:3000, Profintech). , 60004-1-Ig) naktī 4 grādi . Pēc mazgāšanas ar TBST membrānas inkubēja ar sekundāro antivielu 1 stundu istabas temperatūrā. Olbaltumvielu joslas tika novērotas, izmantojot hemiluminiscences komplektu (Millipore, ASV). GAPDH ekspresija tika izmantota, lai normalizētu olbaltumvielu līmeni.

Šūnu proliferācijas tests

Šūnu proliferācijas spēja tika noteikta ar šūnu skaitīšanas komplekta-8 (CCK-8) testu. Četrdesmit astoņas stundas pēc transfekcijas katrai iedobei pievienoja 90 µl jaunas barotnes un 10 µl CCK-8 šķīduma (Beyotime, C0042). Šūnas tika inkubētas 1–4 stundas 37 grādu temperatūrā 5% CO2 un mērītas pie 450 nm ar universālu mikroplašu lasītāju (Bio-Tek, ASV).

Plūsmas citometriskā analīze

Šūnas tika izliktas 6-iedobju plāksnēs dienu pirms transfekcijas. Četrdesmit astoņas stundas pēc transfekcijas šūnas tika tripsinizētas un centrifugētas ar ātrumu 1000 apgr./min 5 minūtes. Pēc tam šūnas tika fiksētas 70% etanolā 4 grādu temperatūrā vismaz 4 stundas. Pēc centrifugēšanas šūnām pievienoja RNāzes A un propīdija jodīda (PI) krāsošanas šķīdumu, un pēc tam šūnas 30 minūtes inkubēja istabas temperatūrā tumsā. Te iekrāsotas šūnas tika analizētas, izmantojot ACEA NovoCyte (Biosciences, ASV).

Statistiskā analīze

Mērījumu dati pēc normālā sadalījuma ir parādīti kā vidējais ± SD. Atšķirība starp abām dažādajām grupām tika noteikta, izmantojot divu virzienu nesapārotus Studenta t-testus, un p-vērtība < 0,05 tika uzskatīta par statistiski nozīmīgu. Visi aprēķini tika veikti, izmantojot GraphPad Prism 8 (GraphPad Software, Inc., ASV).

Atsauces

1. Docherty MH, O'Sallivan ED, Bonventre JV, Ferenbach DA. Šūnu novecošanās nierēs. J Am Soc Nephrol. 2019;30(5):726–36.

2. Partridge L, Deelen J, Slagboom PE. Saskaroties ar novecošanas globālajām problēmām. Daba. 2018;561(7721):45–56.

3. Pan JX. LncRNA H19 veicina aterosklerozi, regulējot MAPK un NF-KB signalizācijas ceļus. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2017;21(2):322–8.

4. Wasson CW, Abignano G, Hermes H, Malaab M, Ross RL, Jimenez SA, Chang HY, Feghali-Bostwick CA, Del Galdo F. Ilgi nekodējoša RNS HOTAIR veicina EZH2-atkarīgu miofibroblastu aktivāciju sistēmiskā sklerozi, izmantojot no miRNS 34a atkarīgu NOTCH aktivāciju. Ann Reimatiskā Dis. 2020;79(4):507–17.

5. Luo J, Wang K, Yeh S, Sun Y, Liang L, Xiao Y, Xu W, Niu Y, Cheng L, Maity SN u.c. LncRNA-p21 maina antiandrogēna enzalutamīda izraisīto prostatas vēža neiroendokrīno diferenciāciju, modulējot EZH2 / STAT3 signālu pārraidi. Nat Commun. 2019;10(1):2571.

6. Van Y, Yang L, Chen T, Liu X, Guo Y, Zhu Q, Tong X, Yang W, Xu Q, Huang D u.c. Jauns lncRNS MCM3AP-AS1 veicina hepatocelulārās karcinomas augšanu, mērķējot uz miR-194-5p/FOXA1 asi. Mols vēzis. 2019;18(1):28.

7. Wu YY, Kuo HC. Nekodējošo RNS funkcionālās lomas un tīkli neirodeģeneratīvo slimību patoģenēzē. J Biomed Sci. 2020; 27(1):49.

8. Li Z, Wang Z. Novecojošas nieres un ar novecošanu saistītas slimības. Adv Experiment Med Biol. 2018; 1086:169–87.

9. Wang X, Vrtiska TJ, Avula RT, Walters LR, Chakkera HA, Kremers WK, Lerman LO, Rule AD. Vecums, nieru darbība un riska faktori ir atšķirīgi saistīti ar nieres garozas un medulāro tilpumu. Kidney Int. 2014; 85(3): 677–85.

10. Lin Q, Hou S, Dai Y, Jiang N, Lin Y. LncRNA HOTAIR mērķis ir miR-126-5p, lai veicinātu Parkinsona slimības progresēšanu, izmantojot RAB3IP. Biol Chem. 2019;400(9):1217–28.

Wecistanche atbalsta dienests - lielākā cistanche eksportētāja Ķīnā:

E-pasts:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel.:+86 15292862950

Iegādājieties sīkāku informāciju par specifikācijām:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-veikals