Ar nieres mieloīdu proteīna 8 ekspresijas paredzamā nozīme pacientiem ar aptaukošanos vai 2. tipa diabētu saistītām nieru slimībām

Kontaktpersona: Odrija Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pasts:audrey.hu@wecistanche.com

Takašige Kuvabara¹, Kiyoshi Mori1,^2*, Masato Kasahara^1,3, Hideki Yokoi¹, Hirotaka Imaki¹, Akira Ishii¹, Keniči Koga¹, Akira Sugavara⁴, Shinji Yasuno³, Kenji Uešima³, Takaši Morikava⁵, Jošio Koniši⁵, Masahito Imanishi⁵, Akira Nišijama⁶, Kazuva Nakao^1,2, Masaši Mukojama¹

¹Medicīnas un klīniskās zinātnes nodaļa, Kioto Universitātes Medicīnas augstskola, Kioto, Japāna,

²Medicīnas inovāciju centrs, Kioto Universitātes Medicīnas augstskola, Kioto, Japāna,

³EBM pētniecības departaments, Klīniskās un translācijas zinātnes attīstības institūts, Kioto Universitātes slimnīca, Kioto, Japāna,

⁴Osakas Sarkanā Krusta slimnīcas Nefroloģijas nodaļa, Osaka, Japāna,

5 Nefroloģijas un hipertensijas nodaļa, Osakas pilsētas vispārējā slimnīca, Osaka, Japāna,

6 Farmakoloģijas nodaļa, Kagavas Universitātes Medicīnas skola, Kagava, Japāna

Abstrakts

Pamatinformācija un mērķis: Mēs esam ziņojuši, ka nodevām līdzīgajam receptoram 4 (TLR4) un vienam no tā endogēnajiem ligandiem, ar mieloīdiem saistītajam proteīnam 8 (MRP8 vai S100A8), ir svarīga loma diabētiskās nefropātijas progresēšanā pelēm. Šī pētījuma mērķis bija novērtēt nozīminieresMRP8 ekspresija pacientiem araptaukošanās- vai ar 2. tipa cukura diabētu saistītsnieru slimības. Metodes: diabēta, aptaukošanās vai kontroles subjektiem MRP8 mRNS un olbaltumvielu ekspresijas līmeņi nieru biopsijas paraugos tika noteikti ar reāllaika RT-PCR un imūnhistoķīmiju (attiecīgi n=28 un 65) un to saistību ar sākotnējo stāvokli. un tika analizēti prognostiskie parametri. MRP8 ietekme uz iekaisuma gēnu ekspresiju tika pārbaudīta, izmantojot makrofāgus. Rezultāti:NieresMRP8 gēna un olbaltumvielu ekspresijas līmenis bija paaugstināts aptaukošanās vai diabēta grupās, salīdzinot ar kontroles grupu. Visiem subjektiem, izmantojot viendimensiju lineārās regresijas analīzi, glomerulāro MRP8-pozitīvs šūnu skaits un tubulointersticiālais MRP8-pozitīvs laukums sākotnēji bija attiecīgi korelēts ne tikai ar dažādiem zināmiem diabētiskās nefropātijas riska faktoriem (piemēram, kā sistoliskais asinsspiediens, proteīnūrija un seruma kreatinīns), bet arī ar glomerulosklerozes un tubulointersticiālās fibrozes izplatību. Neatkarīgi faktori, kas paredzēja urīna olbaltumvielu līmeni gadu vēlāk, tika pārbaudīti ar daudzfaktoru analīzi, un tie ietvēra glomerulāro MRP8-pozitīvo šūnu skaitu (b=0.59, P,0.001), proteīnūriju. (b=0.37, P=0.002) un sistoliskais asinsspiediens (b=0.21, P=0.04) sākotnējā līmenī pēc korekcijas zināmajam riskam faktoriem. MRP8 proteīna ekspresija tika novērota CD{17}}pozitīvos makrofāgos un atrofiskajos kanāliņos. Kultivētos peļu makrofāgos MRP8 proteīna izraisītas proinflammatorisku citokīnu ekspresijas arī izraisīja MRP8 automātisku indukciju TLR4-atkarīgā veidā.

Secinājumi: Glomerulārā MRP8 ekspresija, šķiet, ir saistīta ar proteīnūrijas progresēšanu pacientiem ar aptaukošanos vai 2. tipa cukura diabētu, iespējams, izraisot iekaisuma izmaiņas makrofāgos, izmantojot TLR4 signālus.

Cistanche ietekme: nieru slimību ārstēšana

Ievads

Hroniskam iekaisumam ir liela nozīme diabēta patoģenēzē vaiaptaukošanāsun tās kardiovaskulārās komplikācijas [1]. Ir iesaistīta iedzimto imūnreceptoru un endogēno ligandu iesaistīšanās hroniska iekaisuma procesā. Ar mieloīdiem saistītais proteīns 8 (MRP8, pazīstams arī kā S100A8 vai kalgranulīns A) sākotnēji tika identificēts kā citoplazmas kalciju saistošs proteīns neitrofilos un monocītos [2], un tas ir kļuvis plaši atzīts par spēcīgu endogēnu ligandu nodevām līdzīgajam receptoram 4 (TLR4). ) dažādu slimību, tostarp septiskā šoka, asinsvadu un autoimūno traucējumu gadījumā [3,4,5]. Mēs nesen ierosinājām, ka MRP8 / TLR4 signalizācijai ir svarīga loma hiperlipidēmijas izraisītā diabētiskās nefropātijas progresēšanā [6]. Glomerulārie makrofāgi un kanāla šūnas ir galvenie MRP8 avoti attiecīgi diabētiskās nefropātijas [6] un nieru fibrozes [7] peļu modeļos. MRP8 līmenis plazmā, kas parasti veido heterodimēru kompleksu ar saistošo partneri MRP14 asinsritē, ir paaugstināts pacientiem ar aptaukošanos [8,9]. Tomēr nav saņemti ziņojumi, kas pētītu MRP8 ekspresiju nierēs pacientiem ar aptaukošanos vaiveids2 diabētsun tā saistība ar nieru prognozi.

Šī pētījuma mērķis bija noteikt MRP8 mRNS un proteīnu ekspresijas līmeninieresJapānas pacientu ar diabētisko nefropātiju (DN),aptaukošanāsar glomerulopātiju (ORG), minimālu izmaiņu nefrotisku sindromu (MCNS) vai nelielas glomerulārās anomālijas (MGA), kuras visas tika diagnosticētas ar nieru biopsiju, un novērtēt, vai nieru MRP8 ekspresija var paredzēt nieru iznākumu.

Cistanche var uzlabot nieru darbību

Materiāli un metodes

Ētikas paziņojums

Pētījums ar cilvēkiem tika veikts saskaņā ar Helsinku deklarācijā paustajiem principiem, un to apstiprināja attiecīgi Kioto Universitātes Medicīnas augstskolas un Osakas pilsētas vispārējās slimnīcas Cilvēkpētniecības ētikas komitejas. Visi dalībnieki sniedza rakstisku informētu piekrišanu. Pētījuma ar dzīvniekiem protokolu apstiprināja Kioto Universitātes Medicīnas augstskolas Dzīvnieku pētniecības komiteja (atļaujas numurs: Med Kyo 13318). Visas dzīvnieku operācijas tika veiktas nātrija pentobarbitāla anestēzijā, un tika pieliktas visas pūles, lai mazinātu ciešanas.

Studiju priekšmeti

Proteinūriskie pacienti araptaukošanāsvai 2. tipa cukura diabēts, kam tika veikta nieru biopsija, tika iekļauti šajā pētījumā. Tika izslēgti pacienti ar infekcijas slimībām, vēzi, aknu slimībām vai kolagēna slimību. Proteīnūrija tika definēta kā urīna olbaltumvielas, kas lielākas par 0,5 g/g kreatinīna vai urīna albumīns vairāk nekā 300 mg/g kreatinīna vismaz divos secīgos mērījumos.Aptaukošanāstika definēts kā ķermeņa masas indekss (ĶMI), kas lielāks par 25.{1}} (kg/m²). 2. tipa cukura diabēts tika diagnosticēts saskaņā ar Pasaules Veselības organizācijas kritērijiem. Bioķīmiskie mērījumi, ievadot nieru biopsiju, tika izmantoti kā pamata raksturlielumi šķērsgriezuma analīzei. Aprēķinātais glomerulārās filtrācijas ātrums (eGFR) tika aprēķināts, izmantojot vienkāršotu prognozēšanas vienādojumu, ko ierosināja Japānas Nefroloģijas biedrība: eGFR (ml/min/1,73 m²)=1946 [vecums (gadi)]20.287 6 [seruma kreatinīns (mg perdl)]21.094 60.739 (sievietēm), kas ir apstiprināta lokāla MDRD [. 10]. Kreatinīna koncentrācija serumā tika mērīta, izmantojot enzīmu metodi.

Imūnhistoķīmijai tika analizēti 65 japāņu pacienti, kuriem Kioto universitātes slimnīcas Medicīnas un klīniskās zinātnes departamentā no 2000. līdz 2011. gadam tika veikta nieru biopsija. Visu pacientu biopsijas pierādītās diagnozes šajā periodā ir uzskaitītas S1 tabulā S1 failā. Šajā darbā pārbaudītie subjekti ietvēra DN (n=19), ORG (n=10) un personas bez aptaukošanās, bez diabēta kontroles subjektiem, kuriem tika diagnosticēts MGA (n=19) vai MCNS (n=17). Daži gadījumi šajās kategorijās tika izslēgti, jo pieejamie atlikušie paraugi saturēja mazāk nekā 10 glomerulus. DN definīcija sastāvēja no (1) vairāk nekā 5 gadu ilguma pēc diabēta sākuma, (2) mikro- vai makroalbuminūrijas esamības, (3) saderīgām histopatoloģiskajām izmaiņām ar DN, piemēram, glomerulārās bazālās membrānas sabiezēšanu, mezangiālo paplašināšanos, mezgliņu veidošanos. skleroze (Kimmelstiela-Vilsona mezgli) un/vai arteriolāra hialinoze, un (4) citu nieru darbības traucējumu cēloņu izslēgšana [11]. ORG tika morfoloģiski definēta kā fokusa segmentālā glomeruloskleroze un/vai glomerulomegālija subjektiem, kuriem ir abiaptaukošanāsun proteīnūrija, kuras definīcijas tika aprakstītas iepriekš [12,13].

MRNS ekspresijas analīzei tika izslēgti zemas kvalitātes paraugi, kuros18S ribosomu RNS (rRNS) līmenis bija zemāks par noteikšanas jutības robežu ar reāllaika RT-PCR. Reģistrētos subjektus veidoja 22 pacienti ar 2. tipa cukura diabētu, kuriem Osakas pilsētas vispārējā slimnīcā no 2000. līdz 2010. gadam tika veikta nieru biopsija, un 6 kontroles subjekti bez cukura diabēta un kuriem bija biopsija pierādīta MGA.

1. un 2. tabulā ir apkopotas to pacientu sākotnējās klīniskās īpašības, kuri tika pārbaudīti attiecīgi ar imūnhistoķīmisko vai gēnu ekspresijas analīzi. Gaismas mikroskopijai audu paraugi tika apstrādāti saskaņā ar standarta procedūrām. Sekcijas tika iekrāsotas ar hematoksilīnu-eozīnu, periodisko skābi-Schiff, periodisko skābju metenamīna sudrabu vai Masson trihromu (S1 att.). Glomeruli ar globālo sklerozi skaita attiecību starp kopējo glomerulu skaitu un tubulointersticiālās fibrozes relatīvajām zonām neatkarīgi novērtēja divi patologi, kas nezināja par diagnozi un klīniskajiem datiem.

Cistanche ietekme: nieru slimību ārstēšana

Nieru iznākumu definīcija

Ar lineārās regresijas un loģistiskās regresijas analīzēm tika pārbaudīti šādi divi prognostiskie rādītāji: (1)proteīnūrijas apjoms, kas noteikts vienu gadu pēc biopsijas, un (2) nieru notikums, kas definēts kā kreatinīna līmeņa pieaugums serumā par 0,50 procentiem gadā. no sākotnējā stāvokļa vai hroniskas dialīzes uzsākšanas.

Imūnhistoķīmija

MRP8 un CD68 imūnhistoķīmija tika veikta, izmantojotnieressekcijas (biezums 4 mm), kas fiksētas ar 4% buferētu paraformaldehīdu. Pēc antigēna iegūšanas ar citrāta buferšķīdumu nieru sekcijas tika inkubētas ar 10% kazas serumu, kam sekoja peles anti-cilvēka MRP8 (1:100; BMA biomedicals, Augst, Šveice)[14] vai peles anti-cilvēka CD68 antivielas (1:50). ; attiecīgi DAKO, Ely, UK). Primārās antivielas tika vizualizētas ar mārrutku peroksidāzi konjugētu sekundāro antivielu un 3,3-diaminobenzidīna tetrahidrohlorīdu (Dako ASV, Carpinteria, CA). Kodoli tika iekrāsoti ar hematoksilīnu. MRP8-pozitīvās šūnas tika skaitītas vairāk nekā 10 glomerulos, un MRP8-pozitīvs laukums tubulointerstitijā tika mērīts kvantitatīvi, lai iegūtu vidējo vērtību katram subjektam, izmantojot programmatūru MetaMorph 7.5 (Molecular Devices, Downingtown, PA, ASV ). CD68- un MRP8-pozitīvo šūnu kolokalizācija tika novērtēta, izmantojot sērijas sadaļas. Nebija ne MRP8, ne CD68 signāla negatīvajās kontrolēs, kas iekrāsotas bez pirmās antivielas (S2 att.). Anti-MRP8 antivielas iepriekšēja inkubācija ar 20 molāru rekombinantā cilvēka MRP8 proteīna pārpalikumu (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) 4 uC nakti, iekrāsošanās tika ievērojami samazināta, ja ne pilnībā, vēl vairāk apstiprinot antivielas specifiku (S3. attēls). .

Cistanche nieru ārstēšanai

MRNS ekspresijas novērtēšana

Saldētinieressekcijas tika atdalītas glomerulos un neglomerulos audos ar lāzera uztveršanas mikrodissekciju (LM200; Olympus, Tokija, Japāna), kā aprakstīts iepriekš [15]. Kopējā RNS tika ekstrahēta ar RNeasy mini komplektu (Qiagen, Tokija, Japāna). mRNS ekspresijas līmeņi tika noteikti ar TaqMan reāllaika PCR (Applied Biosystems, Foster City, CA, ASV) [16,17]. Visu gēnu ekspresijas līmeņi tika normalizēti ar 18S rRNS (iekšējās kontroles) līmeņiem. Skatiet tabulu S2 failā S1, lai uzzinātu primeru un zondes secības. Eikariotu 18S rRNS tika atklāts ar PreDeveloped TaqMan testa reaģentiem (Applied Biosystems).

1. tabula. Sākotnējie klīniskie raksturlielumi pacientiem ar nieru biopsiju, kuriem tika analizēta MRP8 proteīna ekspresija ar imūnhistoķīmiju.

MGA: neliela glomerulāra anomālija, MCNS: minimālas izmaiņas nefrotiskais sindroms, ORG:aptaukošanās-saistīta glomerulopātija, DN: diabētiskā nefropātija, ĶMI: ķermeņa masas indekss, BUN: asins urīnvielas slāpeklis, CRP: C-reaktīvais proteīns. Dati ir vidēji 6 SD. *Kopējās atšķirības starp MGA, MCNS, ORG un DN grupām tika salīdzinātas ar ANOVA.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t001

MRP8 ārstēšana ar makrofāgiem

No kaulu smadzenēm iegūti makrofāgi tika ģenerēti no savvaļas tipa vai TLR4 nokautas (KO) pelēm [18] uz C57BL/6J ģenētiskā fona (Oriental BioService, Kioto, Japāna), kā aprakstīts iepriekš [6]. Īsumā, pēc sarkano asins šūnu līzes kaulu smadzeņu šūnas tika atkārtoti suspendētas barotnē, kas satur 20 procentus teļa augļa seruma un 50 ng/ml rekombinanto cilvēka makrofāgu koloniju stimulējošu faktoru (Peprotech, Rocky Hill, NJ, ASV), un kultivēja plkst. 37 uC 5 procentu CO2 atmosfērā. 7. dienā makrofāgi tika inkubēti ar rekombinanto peles MRP8 (Abnova, Taipeja, Taivāna) vai nesēju 4 stundas. Polimiksīns B (25 mg/ml, NacalaiTesque, Kioto, Japāna) tika pievienots katrai iedobei, lai samazinātu endotoksīna piesārņojumu, kā aprakstīts iepriekš [3,19]. Noendotoksīns tika atklāts jebkurā MRP8 koncentrācijā, kas tika pārbaudīta turpmāk, inkubējot ar 25 mg/ml polimiksīna B, izmantojot ToxinSensorChromogenic LAL endotoksīna testa komplektu (GenScript, Piscataway, NJ, ASV). Kopējā RNS no šūnām tika ekstrahēta ar RNeasy MiniKit, un interleikīna-1 beta (IL-1b), audzēja nekrozes faktora-alfa (TNFa) un MRP8 mRNS ekspresijas līmeņus noteica TaqMan reāllaikā. RT-PCR. Visu gēnu ekspresijas līmeņi tika normalizēti ar grauzēju GAPDH līmeni (iekšējā kontrole, iepriekš izstrādāti TaqMan testa reaģenti). Praimeru un zondes sekvences reāllaika PCR ir uzskaitītas S2 tabulā S1 failā.

Statistiskā analīze

Dati ir izteikti kā vidējie 6 SD vai nozīmē 695 procentu ticamības intervālu (CI), ja nepieciešams. Četru grupu salīdzināšanai tika izmantota vienvirziena vai divvirzienu ANOVA ar Bonferroni post-hoc analīzi, un kategoriski mainīgie tika salīdzināti, izmantojot x2 testu. Salīdzināšanai starp divām grupām pēc vajadzības tika izmantots studenta nesapārotais t-tests. Tika aprēķināti Spīrmena korelācijas koeficienti, lai noteiktu saistību starp diviem mainīgajiem. Lai pārbaudītu sākotnējo kovariātu ietekmi, kas nosaka glomerulārās vai tubulointersticiālās MRP8 ekspresijas pakāpi vai urīna proteīna līmeni vienu gadu pēc biopsijas, tika veiktas vienfaktoru un daudzfaktoru lineārās regresijas analīzes. Loģistiskās regresijas analīze tika izmantota, lai analizētu izskaidrojošos mainīgos, kas prognozē nieru notikumu rašanos. Visi dati tika analizēti, izmantojot StatView 5.{9}} programmatūru (SAS InstituteInc., Cary, NC, USA). P vērtības 0,05 tika uzskatītas par statistiski nozīmīgām.

Cistanche ietekme: nieru slimību ārstēšana

Rezultāti

Mēs salīdzinājām MRP8 proteīna ekspresijas līmeņusnieresstarp DN, ORG un bez aptaukošanās, nediabēta kontroles (MGA un CNS) grupām. Imūnhistoķīmiskā analīze atklāja, ka gan glomerulāro MRP8-pozitīvo šūnu skaits (1.A att.), gan tubulointersticiālā MRP8-pozitīvā zona (1.B att.) DN bija ievērojami lielāka nekā citās grupās, tostarp MGA, MCNS, un ORG (P<0.01). org="" subjects="" also="" showed="" a="" tendency="" of="" elevated="" mrp8expression="" compared="" to="" mga="" and="" mcns="" (fig.="" 1a,="" 1b).="" furthermore,="" glomerular="" mrp8="" mrna="" expression="" levels="" in="" dn="" subjects="" were="" significantly="" higher="" compared="" to="" non-dm="" control="" subjects="" (p,0.01,="" fig.="" 1c).="" in="" non-glomerulus="" tissues,="" mrp8mrna="" expression="" levels="" were="" much="" lower="" than="" those="" in="" glomeruli,="" both="" in="" non-dm="" and="" dm="" groups.="" abundant="" mrp8="" protein="" expression="" in="" the="" tubulointerstitium="" of="" dn="" cases="" was="" not="" clearly="" reflected="" into="" increased="" mrna="" expression,="" which="" may="" be="" partly="" caused="" by="" deposition="" of="" blood-derived="" proteins="" in="" the="" tubulointerstitium="" as="" discussed="" in="" the="" next="" section.="" as="" shown="" in="" representative="" photos="" (fig.="" 1d–g,="" see="" fig.="" s4="" in="" detail),="" renal="" biopsy="" samples="" from="" mga="" and="" mcns="" subjects="" showed="" few="" mrp8-positive="" cells="" in="" glomeruli="" (fig.="" 1d,="" 1e="" and="" fig.="" s4).="" in="" org="" subjects,="" somemrp8-positive="" cells="" appeared="" in="" glomeruli="" and="" tubulointerstitium(fig.="" 1f="" and="" fig.="" s4).="" in="" dn="" subjects,="" a="" marked="" increase="" of="" mrp8-expressing="" cells="" in="" glomeruli="" and="" significant="" expansion="" of="" mrp8-positive="" areas="" in="" the="" tubulointerstitium="" were="" observed="" in="" a="" focal="" manner="" (fig.="" 1g="" and="" fig.="" s4).="" of="" note,="" mrp8-positive="" cells="" were="" absent="" in="" nodular="" sclerosing="" lesions="" of="" diabetic="" glomeruli="" (fig.="" s4:dn="" case="" 2,="" 3)="" as="" described="" previously="" for="" sclerotic="" lesions="" in="" anca-associated="" glomerulonephritis="" [20].="" paired="" immunohistochemistry="" for="" cd68="" and="" mrp8="" in="" serial="" sections="" suggested="" thatmrp8="" signals="" were,="" at="" least="" in="" part,="" observed="" in="" macrophages="" expressing="" cd68="" (fig.="" 2),="" as="" we="" reported="" in="" a="" mouse="" model="" of="" diabetic="" nephropathy="" [6].="" besides,="" focally="" injured="" atrophic="" tubular="" epithelial="" cells="" also="" strongly="" expressed="" mrp8,="" which="" were="" surrounded="" by="" mrp8(+)-,="" cd68(+)-positive="" macrophages="" (fig.="" 2,="" fig="" s4:="" dn="" case="" 3-5).="" in="" the="" cases="" with="" nephrotic="" range="" proteinuria,="" mrp8="" staining="" was="" also="" observed="" along="" brush="" borders="" of="" proximal="" tubules="" both="" in="" mcns="" and="" dn="" cases="" (fig.="" s4).="" since="" the="" sample="" number="" of="" mrna="" expression="" was="" too="" small="" for="" multivariate="" analysis,="" the="" following="" analyses="" were="" performed="" using="" data="" from="" patients="" studied="" by="">

2. tabula. Sākotnējie klīniskie raksturlielumi pacientiem nieru biopsijas laikā, kuriem tika analizēta MRP8 mRNS ekspresija ar reāllaika RT-PCR.

Asociācijas starpnieresMRP8 signāli un sākotnējie klīniskie parametri nieru biopsijas laikā tika analizēti šķērsgriezumā (3. tabula). Ar vienfaktoru analīzi glomerulārā un/vai tubulointersticiālā MRP8 proteīna ekspresija bija būtiski saistīta ar vecumu, sistolisko un diastolisko asinsspiedienu, urīna proteīnu, kreatinīna, BUN un ABL holesterīna līmeni serumā, eGFR un globālās glomerulosklerozes un tubulointersticiālās fibrozes pakāpi. Šie parametri tika tālāk pārbaudīti ar daudzfaktoru analīzi pēc diastoliskā asinsspiediena, eGFR un BUN izslēgšanas kolinearitātes dēļ. Tubulointersticiālās fibrozes procentuālā daļa tika neatkarīgi korelēta ar glomerulāriem MRP8 signāliem (b=0.62, koriģēts P=0.02) un tubulointersticiālajiem MRP8 signāliem (b=0.85, koriģēts P). ,0,001), attiecīgi. Turklāt tubulointersticiālie MRP8 signāli arī neatkarīgi korelēja ar sākotnējo proteīnūriju (b=0.20, koriģēts P=0.01). Izkliedētās diagrammas analīzes starp MRP8 signāliem glomerulos vai tubulointersticijā un klīniskajiem parametriem liecināja, ka MCNS grupai bija atšķirīgs sadalījuma modelis no citām grupām, jo ​​īpaši attiecībā uz urīna proteīnu un ZBL holesterīna līmeni serumā (S5A-D, S6A-D att.). MCNS grupas izslēgšana uzlaboja korelāciju starp MRP8 signāliem un urīna proteīna vai ZBL holesterīna līmeni serumā (S5E-F, S6E-F att.). Tāpēc mēs veicām apakšanalīzi, izslēdzot MCNS pacientus, un konstatējām, ka urīna proteīns bija neatkarīgs faktors, kas korelē ar glomerulāriem MRP8 signāliem, izmantojot daudzfaktoru analīzi (4. tabula; b=0.36, koriģēts P=0.03). ).

Pēc tam mēs veicām lineārās regresijas vai loģistiskās regresijas analīzes, lai noteiktu izskaidrojošos faktorus, kas prognozē nieru iznākumu, proti, proteīnūrijas apmērs gadu vēlāk un nieru notikums gada laikā. Tā kā pastāvēja laba saistība starp glomerulārajiem un tubulointersticiālajiem MRP8 signāliem (S7. att.; R=0.67,P,0.001), šie parametri tika alternatīvi iekļauti turpmākajās analīzēs. . Mēs novērtējām saistību starp sākotnējiem parametriem un urīna proteīnu 1 gadu pēc nieru biopsijas, izmantojot daudzkārtējas regresijas analīzi. Kā parādīts 5. tabulā, glomerulārais MRP8 signāls (b=0,59, koriģēts P,0,001) bija prognozējošs faktors proteīnūrijas apmēram pēc gada, kā arī sākotnējam sistoliskajam asinsspiedienam (b {{13} }.21, koriģēts P=0.04) un sākotnējā proteīnūrija (b=0.37, koriģētā P=0.002). Šie parametri nebija atkarīgi no citiem zināmiem diabētiskās nefropātijas riska faktoriem, tostarp nieru disfunkcijas (seruma kreatinīna līmeņa) un globālās sklerozes un tubulointersticiālās fibrozes apjoma [11,21–24]. No otras puses, tubulointersticiāls MRP8 signāls (b=0.34, koriģēts P=0.09) nebija neatkarīgs prognozējošs faktors urīna proteīna līmenim gadu vēlāk. Nieru notikumi radās 7 pacientiem (6 DN un 1 ORG gadījumos) gada laikā pēc nieru biopsijas. Veicot vienfaktoru analīzi, ne tikai glomerulosklerozes un tubulointersticiālās fibrozes apjoms un glomerulārie un tubulointersticiālie MRP8 signāli, bet arī asinsspiediens, nieru disfunkcija un urīna proteīna līmenis sākotnēji bija nozīmīgi nieru notikumu rašanās prognozēšanas faktori. Tomēr, izmantojot daudzfaktoru analīzi, to kovariātus viens otrs atcēla (S3 tabula failā S1), iespējams, šo parametru augstās korelācijas dēļ.

Visbeidzot, izmantojot kultivētus makrofāgus, mēs pārbaudījām MRP8 kā endogēna liganda TLR4 potenciālu. Kaulu smadzenēs iegūtos makrofāgos no savvaļas tipa pelēm MRP8 proteīna izraisīta proinflammatorisku citokīnu gēnu, piemēram, IL-1b un TNFa, regulēšana, kā arī izraisīja MRP8 autoindukciju atkarībā no devas no 1{{ 15}}–1000 ng/ml. Šie MRP8 efekti tika nomākti aptuveni par divām trešdaļām makrofāgos, kas iegūti no TLR4 KO pelēm (P, 0,01) (3. attēls).

1. attēls. Imūnhistoķīmiskās un mRNS analīzes MRP8 innieresbiopsijas paraugi. Glomerulārā MRP{{0}}pozitīvā šūnu skaita (A) un tubulointersticiālās MRP8-pozitīvās zonas (B) kvantitatīva noteikšana. MRP8 mRNS ekspresija glomerulārās un neglomerulārās frakcijās (C). Atvērtās joslas: bez aptaukošanās, bezdiabēta kontroles, kas ir MGA vai MCNS, slēgtas joslas: ORG vai DN (A–C). MGA, MCNS, ORG un DN grupu (D–G) reprezentatīvi attēli. MGA: neliela glomerulārā anomālija, MCNS: minimālas izmaiņas nefrotiskais sindroms, ORG: ar aptaukošanos saistīta glomerulopātija, DN: diabētiskā nefropātija. *P,0.01.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g001

Diskusija

Šis pētījums ir parādījis, ka MRP8 ir bagātīgi ekspresēts glomerulos un tubulointersticijā pacientiem ar DNS, salīdzinot ar ORG un bez aptaukošanās, bez diabēta kontroles (MGA un MCNS). Turklāt ORG subjektiem MRP8 ekspresijas līmeņi mēdza būt augstāki nekā MGA vai MCNS subjektiem. Sākotnējā šķērsgriezuma izmeklēšanā, kurā iekļauti visi subjekti, izmantojot vienfaktoru lineārās regresijas analīzi, glomerulāro MRP8-pozitīvs šūnu skaits un tubulointersticiālais MRP8-pozitīvs laukums attiecīgi tika korelēts ne tikai ar dažādiem zināmiem riska faktoriem diabētiskā nefropātija (piemēram, sistoliskais asinsspiediens, proteīnūrija un kreatinīna līmenis serumā), bet arī ar glomerulosklerozes un tubulointersticiālās fibrozes apmēru. Izmantojot daudzfaktoru analīzi, tubulointersticiāla MRP8-pozitīvā zona būtiski korelēja ar proteīnūriju un tubulointersticiālu fibrozi. Glomerulāro MRP8-pozitīvs šūnu skaits primārajā analīzē būtiski korelēja ar tubulointersticiālu fibrozi un ar proteīnūriju apakšanalīzē, izslēdzot MCNS grupu. Imūnhistoķīmija norādīja, ka MRP8 vismaz daļēji ekspresēja CD68 (plus) ekspresējošie makrofāgi un atrofiskie kanāliņi. Šie atklājumi rada iespēju, kanieresMRP8 signāli glomerulos vai tubulointersticijā var kalpot kā jauni diabētiskās nefropātijas marķieri.

2. attēls. CD68 un MRP8 proteīna ekspresijas lokalizācija diabētiskās nefropātijas gadījumu sērijveida sekcijās. CD68 (A, B) un MRP8 ekspresijas (C, D) ekspresija pārī savienotos nieru paraugos (A un C, vai B un D). Bultiņas norāda CD68 un MRP8 signālu kolokalizāciju.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g002

Prognozētajā pētījumā daudzfaktoru analīze atklāja, ka urīna proteīna līmenis gadu pēc nieru biopsijas bija neatkarīgi saistīts ar glomerulāro MRP{0}}pozitīvo šūnu skaitu, urīna proteīnu un sistolisko asinsspiedienu sākotnēji. Jāatzīmē, ka glomerulārā MRP8 ekspresija uzrādīja visspēcīgāko korelāciju ar urīna olbaltumvielām gadu vēlāk (b= 0.87), kas ir pat spēcīgāka nekā sākotnējā urīna olbaltumviela (b=0.78), izmantojot vienfaktoru analīzi. Daļēji tas ir tāpēc, ka glomerulārā MRP8 ekspresija nav lielā mērā paaugstināta “labdabīgos” proteīnūrijas veidos, piemēram, tiem, kas novēroti MCNS pacientiem, kuru proteīnūrijas līmenis pēc nieru biopsijas diagnozes ir ārkārtīgi augsts, bet parasti izzūd gada laikā pēc imūnsupresīvās terapijas uzsākšanas. Šie atklājumi liecina, ka glomerulārajai MRP8 ekspresijai var būt unikāls prognozēšanas raksturs kā slimības marķieris, ko nevar aizstāt ar sākotnējo proteīnūriju vai parasto patoloģisko analīzi, novērtējot globālo glomerulosklerozi un tubulointersticiālu fibrozi. Turklāt mēs spekulējam, ka glomerulārā MRP8 ekspresija nav vienkāršs marķieris vai blakussēdētājs, bet gan aktīvs glomerulāro bojājumu spēlētājs, kā aprakstīts turpmāk.

Determinācijas koeficients (R2), kas aprēķināts ar skaidrojošiem parametriem, kas iekļauti daudzkārtējas regresijas analīzē, bija attiecīgi 0.52* un 0.74#. y, gadi; BP, asinsspiediens; gCr, g kreatinīns; T-hols, kopējais holesterīns; ABL holesterīns, ABL holesterīns; ZBL holesterīns, ZBL holesterīns; GS, glomeruloskleroze; TI, tubulointerstitial.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t003

4. tabula. Sākotnējo klīnisko parametru un MRP8 signālu attiecības apakšanalīze pēc MCNS grupas izslēgšanas.

5. tabula. Daudzkārtēja regresijas analīze, lai identificētu faktorus, kas prognozē urīna proteīna līmeni 1 gadu pēc nieru biopsijas

3. attēls. MRP8 ietekme uz kaulu smadzenēm iegūtiem makrofāgiem. No kaulu smadzenēm iegūtie makrofāgi (BMDM) tika stimulēti ar rekombinanto peles MRP8 4 stundas. Kļūdu joslas norāda uz 95 procentiem TI, un statistiskās analīzes tika veiktas ar log-transformētām vērtībām. Divvirzienu ANOVA atklāja būtisku genotipu, MRP8 koncentrāciju un to mijiedarbības ietekmi uz visu 3 gēnu ekspresiju (P,0.001 visiem salīdzinājumiem). n=4. WT, savvaļas tips; KO, nokauts; IL-1b, interleikīna 1 beta; TNFa, audzēja nekrozes faktors-alfa. *P,0,01 starp dažādām koncentrācijām, #P,0,01 starp genotipiem.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g003

Citā longitudinālā pētījuma mēģinājumā loģistikas regresijas analīze neizdevās noskaidrot nevienu neatkarīgu prognozētāju nieru notikuma rašanās gadījumā gada laikā. Mēs domājam, ka tas daļēji ir tāpēc, ka tubulointersticiālā MRP8 ekspresija un tubulointersticiālā fibroze bija divi spēcīgi nieru notikumu prognozētāji viendimensiju analīzē, taču to nozīmi daudzfaktoru analīzē atcēla viens otram. Šie divi parametri uzrādīja spēcīgu korelāciju (R=0.68, P,0.001) (S8. attēls), kas liecina, ka šie divi parametri varētu būt līdzvērtīgi nieru notikumu prognozēšanai. Patiešām, intersticiālā MRP8 ekspresija uzrādīja diezgan līdzīgu modeli intersticiālajai fibrozei, ko novērtēja ar Masson trihroma krāsošanu. Intersticiālā MRP8 daudzums lielā mērā ir atkarīgs no pozitīvajiem signāliem atrofiskajos kanāliņos, nevis makrofāgos, kuru iezīme atšķiras no glomerulārā MRP8 punktveida sadalījuma. Turklāt neliels izlases lielums, īss novērošanas periods un daži subjekti, kuriem attīstījās nieru darbības traucējumi, varēja samazināt noteikšanas jaudu. Tā kā MRP8 ekspresijai cauruļveida epitēlija šūnās ir izraisoša loma tubulointersticiāla iekaisuma progresēšanā nieru fibrozes peles modelī[7], būs nepieciešama turpmāka analīze, lai noskaidrotu tubulointersticiālā MRP8 lomu DN.

Saskaņā ar mūsu iepriekšējo pētījumu [6], MRP8 mRNS tika pārregulēta galvenokārt cilvēka DN subjektu glomerulārajā frakcijā, salīdzinot ar kontroles subjektiem ar MGA. No otras puses, MRP8 proteīna ekspresija tika novērota ne tikai glomerulos, bet arī tubulointerstitium. Šajā sakarā jāatzīmē, ka DN tubulointerstitijā bija divi atšķirīgi MRP8 krāsošanas modeļi. Viens no tiem bija intensīva un fokusa iekrāsošanās smagi atrofiskos kanāliņos. Otra bija viegla iekrāsošanās, kas sadalīta gar proksimālo kanāliņu sukas robežu, kas tika konstatēta arī ORG un MCNS. Pēdējie signāli, iespējams, ir MRP8 proteīns, kas iegūts no asinīm un reabsorbēts proksimālos kanāliņos, kam nevajadzētu būt kopā ar palielinātu MRP8 mRNS ekspresiju. Attiecībā uz olbaltumvielām, kas nav MRP8, mēs un citi nesen ziņojām par līdzīgām imūnreaktīvo olbaltumvielu noteikšanas parādībām proksimālajās kanāliņos, ko izraisa reabsorbcija, bet ne nieru sintēze [25, 26]. No otras puses, tā kā antivielu absorbcijas testā saglabājās neliela MRP8 krāsošanās, īpaši glomerulāros eksudatīvos bojājumos un stipri rētu veidošanās fibrotiskos bojājumos ap atrofiskiem kanāliņiem, nespecifisku signālu klātbūtni nevar pilnībā noliegt (S3. att.).

Glomerulārie MRP8 signāli galvenokārt rādīja punktveida modeļus DN subjektiem (1. att., S4. att.). Tā kā gan CD68, gan MRP8 tika atklātas ar peles monoklonālajām antivielām, šo molekulu lokalizācija tika novērtēta pēc sērijas sekcijām, nevis ar dubultu imūnkrāsošanu. MRP8 krāsošanas modeļi bija saderīgi ar citu iekaisīgu nieru slimību, tostarp IgAnefrītu [27], membranoproliferatīvu glomerulonefrītu [14] un ar ANCA saistītu glomerulonefrītu [20], krāsošanas modeļiem, kuros makrofāgi tika ieteikti kā galvenais MRP8 avots, kā mēs ziņojām grauzēju modelis [6]. Turklāt neitrofilus var uzskatīt par vēl vienu MRP8 avotu, kas ietekmē asinsvadu komplikācijas [28]. Pašlaik mēs pētām molekulāro mehānismu, kāpēc MRP8 pārsvarā tiek regulēts mieloīdās līnijas šūnās, kas infiltrējas glomerulos. In vitro pētījums atklāja, ka MRP8 inducēja iekaisuma citokīnu ekspresiju, kā arī pastiprināja paša MRP8 ekspresiju makrofāgos TLR{18}}atkarīgā veidā. Turklāt mezglainajos sklerozējos bojājumos nebija MRP{19}}pozitīvās šūnas, kas liecina, ka glomerulārais MRP8 varētu atspoguļot notiekošos glomerulāros bojājumus [20]. Svarīgi ir tas, ka lielākā mēroga pētījumā ar cilvēkiem tika ziņots, ka MRP8 gēna ekspresija 1. tipa diabēta pacientu asins mononukleārajās šūnās ir ievērojami paaugstināta pacientiem ar diabēta komplikācijām, tostarp nefropātiju [29].

Tā kā renīna-angiotenzīna sistēmas (RAS) inhibīcija ir svarīgs nieru iznākuma noteicošais faktors, mēs pētījām RAS blokādes ietekmi uznieresMRP8 izteiksme. Mēs nekonstatējām būtiskas atšķirības nieru MRP8 mRNS ekspresijā starp DN pacientiem, kuri tika ārstēti ar RAS blokādi vai bez tās (S9. attēls), iespējams, tāpēc, ka gadījumos, kas tika ārstēti ar RAS blokādi, bija smagāka hipertensija un proteīnūrija nekā gadījumos bez RAS blokādes.

Cilvēkiem ar aptaukošanos un pelēm palielināts plazmas MRP8/14 komplekss var atspoguļot pakāpiaptaukošanāsun nāk no adipocītiem, kā arī no leikocītiem [8,9]. Mūsu ORG gadījumos proksimālajās kanāliņos bija viegla MRP8 iekrāsošanās, kas liecina par paaugstinātu MRP8 līmeni plazmā. Turpretim nebija būtiskas korelācijas starp tubulointersticiālu MRP8 ekspresiju un ķermeņa masas indeksu (S6G att.). Tāpēc vietējā MRP8 izteiksmenieresvar kalpot labāk par nieru bojājumu marķieri, nevis paraptaukošanās[8,9].

Cistanche nieru disfunkcijas uzlabošanai

Mūsu pētījumam ir vairāki ierobežojumi. Katras pētītās grupas izlases skaits bija neliels. Neidentiski subjekti tika iekļauti mRNS un imūnhistoķīmiskajā analīzē. Tā kā mēs analizējām tikai pacientus, kuriem tika veikta nieru biopsija, šeit pētīto pacientu sastāvs var neatspoguļot tos pacientus ar vispārēju 2. tipa cukura diabētu vai vispārēju hronisku diabētu.nieresslimību subjekti. Lai gan mūsu datos vecums netika saglabāts kā neatkarīgs faktors, kas saistīts ar MRP8 signāliem (3. tabula), ir zināms, ka novecošanās ir saistīta ar hronisku iekaisumu [30]. Vecuma ietekmi nevar pilnībā ignorēt. Lai gan lielākā daļa MRP8 signālu tika zaudēti antivielu absorbcijas testā, bija palikuši daži pozitīvi signāli, ko varētu izraisīt pirmās antivielas nespecifiskā saistīšanās. Kā minēts iepriekš, nieru MRP8 ekspresijas izpēte ar nieru biopsiju palīdz mums izprast hronisku nieru slimību patofizioloģiju un prognozes, īpaši saistībā araptaukošanāsun diabēts, bet tas ir neizdevīgs regulārai un atkārtotai lietošanai ambulatorās klīnikās

Kopumā šis pētījums liecina, ka MRP8 izpausmenieresatspoguļo pašreizējo patoloģisko stāvokli un arī prognozē nieru iznākumu pacientiem araptaukošanāsvai2. tipa cukura diabēts. Var būt nepieciešami turpmāki pētījumi, lai pētītu urīna MRP8 līmeni pacientiem ar aptaukošanos vai cukura diabētu lielā mērogā

Atbalsta informācija

Attēls S1 Reprezentatīvi fotoattēli, kuros redzamas DN pacienta nieru biopsijas sekcijas, kas iekrāsotas ar (A) Periodskābi Šifa, (B) Periodiskās skābes metenamīna sudrabu vai (C) Masson trihromu. Glomeru ar globālo sklerozi (bultiņas) attiecība starp kopējo glomerulu skaitu un tubulointersticiālās fibrozes relatīvo laukumu šim pacientam bija attiecīgi 33 procenti un 65 procenti. (TIFF)

S2 attēls MRP8 un CD68 proteīnu imūnhistoķīmija DN pacientiem. Fotoattēli labajā kolonnā parāda negatīvas kontroles eksperimentus bez pirmās antivielas. (TIF)

S3 attēls Antivielu absorbcijas tests MRP8 krāsošanai.PBS: ar fosfātu buferēts sāls šķīdums, rhMRP8: rekombinants cilvēka MRP8.(TIF)

S4 attēls MRP8 izteiksmes reprezentatīvie fotoattēli MGA, MCNS, ORG un DN grupās. (TIF)

S5 attēls Korelācija starp glomerulāro MRP{1}}pozitīvo šūnu skaitu un klīniskajiem parametriem. Tika izmantotas MRP8 signālu log-transformētās vērtības. Korelācijas tika analizētas, izmantojot visas 4 grupas (A–D, G) vai 3 grupas, izņemot MCNS grupu (E, F). Atvērti apļi: neliela glomerulārā anomālija (MGA), slēgti apļi: minimālas izmaiņas nefrotiskais sindroms (MCNS), atvērti trīsstūri:aptaukošanās-saistīta glomerulopātija (ORG), slēgti trīsstūri: diabētiskā nefropātija (DN).(TIF)

S6 attēls Korelācija starp tubulointersticiāla MRP8-pozitīvo apgabalu un klīniskajiem parametriem. Tika izmantotas MRP8 signālu log-transformētās vērtības. Šīs korelācijas tika analizētas, izmantojot visas 4 grupas (A–D, G) vai 3 grupas, izņemot MCNS grupu (E, F). (TIF)

S7 attēls Korelācija starp glomerulāro un tubulointersticiālo MRP8 ekspresiju. Tika izmantotas MRP8 signālu log-transformētās vērtības. (TIF)

S8 attēls. Korelācija starp tubulointersticiālu MRP8-pozitīvo zonu un tubulointersticiālu fibrozi. Tika izmantotas MRP8 signālu log-transformētās vērtības. (TIF)

S9 attēls MRP8 nieru mRNS ekspresija DN pacientiem ar vai bez renīna-angiotenzīna blokādes.NS: nav nozīmīga. n=15 (Jā), 6 (Nē). No 22 atteikšanās gadījumiem informācija par medikamentiem nebija pieejama vienam pacientam.(TIF)

Failu S1 atbalsta tabulas.

S1 tabula. Patoloģiskās diagnozes visiem gadījumiem, kuriem Kioto Universitātes slimnīcas Medicīnas un klīniskās zinātnes departamentā no 2000. līdz 2011. gadam tika veikta nieru biopsija. S2 tabula. TaqMan reāllaika RT-PCR primer un zondes secības. S3 tabula. Loģistikas regresijas analīze nieru notikuma rašanās gadījumā gada laikā. (DOC)Pateicības Mēs pateicamies S. Tanakam par statistikas padomiem, Y. Ogawa, N. Igarashi un C. Kimura par tehnisko palīdzību un A. Yamamoto un SOgino par sekretāra palīdzību. Autora ieguldījums Eksperimentu iecere un izstrāde: TK KM MK HY MI AN KNMM. Veica eksperimentus: TK HI AI KK TM YK MI AN. Analizēti dati: TK KM MK HY AS SY KU KN MM. Pievienotie reaģenti/materiāli/analīzes rīki: TK KM. Rakstīja darbu: TK KMMM.

Cistanche ietekme: nieru slimību ārstēšana

Atsauces

1. Donath MY, Shoelson SE (2011) 2. tipa diabēts kā iekaisuma slimība.Nat Rev Immunol 11: 98–107.

2. Odink K, Cerletti N, Bruggen J, Clerc RG, Tarcsay L u.c. (1987) Twocalcium-binding proteins infiltrating makrofāgos reimatoīdā artrīta.Nature 330: 80-82.

3. Vogl T, Tenbrock K, Ludwig S, Leukert N, Ehrhardt C u.c. (2007) Mrp8 unMrp14 ir Toll līdzīgā receptora 4 endogēni aktivatori, kas veicina letālu, endotoksīnu izraisītu šoku. Nat Med 13: 1042–1049.

4. Croce K, Gao H, Wang Y, Mooroka T, Sakuma M u.c. (2009) Ar mieloīdiem saistīts proteīns-8/14 ir būtisks bioloģiskajai reakcijai uz asinsvadu bojājumiem. Circulation 120: 427–436.

5. Loser K, Vogl T, Voskort M, Lueken A, Kupas V u.c. (2010) Toll līdzīgiem receptoriem 4 ligandiem Mrp8 un Mrp14 ir izšķiroša nozīme autoreaktīvo CD8 plus T šūnu attīstībā. Nat Med 16: 713–717.

6. Kuwabara T, Mori K, Mukoyama M, Kasahara M, Yokoi H u.c. (2012) Diabētiskās nefropātijas saasināšanos ar hiperlipidēmiju pelēm izraisa Toll līdzīgais receptors 4. Diabetologia 55: 2256–2266.

7. Fujiu K, Manabe I, Nagai R (2011) Nieru savākšanas kanāla epitēlija šūnas regulē iekaisumu pelēm tubulointersticiālajos bojājumos. J Clin Invest 121: 3425–3441.

8. Sekimoto R, Kishida K, Nakatsuji H, Nakagawa T, Funahashi T u.c. (2012) Augsts cirkulējošais S100A8/A9 kompleksa (kalprotektīna) līmenis japāņu tēviņiem ar vēdera aptaukošanos un neregulētu S100A8 un S100A9 ekspresiju aptaukošanās peļu taukaudos. Biochem Biophys Res Commun 419: 782–789.

9. Mortensen OH, Nielsen AR, Erikstrup C, Plomgaard P, Fischer CP u.c. (2009) Kalprotektīns — jauns marķierisaptaukošanās. PLoS One 4: e7419.

10. Matsuo S, Imai E, Horio M, Yasuda Y, Tomita K u.c. (2009) Pārskatīti vienādojumi aprēķinātajam GFR no seruma kreatinīna Japānā. Esmu DžNieresDis53: 982–992.

11. Gross JL, de Azevedo MJ, Silveiro SP, Canani LH, Caramori ML u.c. (2005) Diabētiskā nefropātija: diagnostika, profilakse un ārstēšana. Diabēta aprūpe 28:164–176.

12. Kambham N, Markowitz GS, Valeri AM, Lin J, D'Agati VD (2001)Aptaukošanāsar to saistīta glomerulopātija: jauna epidēmija.NieresInt 59: 1498–1509.

13. Praga M, Morales E (2006)Aptaukošanās, proteīnūrija un nieru mazspējas progresēšana.Curr Opin Nephrol Hypertens 15: 481–486.

14. Kawasaki Y, Hosoya M, Takahashi A, Isome M, Tanji M u.c. (2005) Ar mieloīdiem saistītā proteīna 8 izpausmes makrofāgos ir noderīgs prognostiskais marķieris nieru disfunkcijai bērniem ar MPGN 1. tipu. Am J.NieresDis 45: 510–518.

15. Nishiyama A, Konishi Y, Ohashi N, Morikawa T, Urushihara M u.c. (2011) Urīna angiotenzinogēns atspoguļo intrarenālās renīna-angiotenzīna sistēmas aktivitāti pacientiem ar IgA nefropātiju. Nephrol Dial Transplant 26: 170–177.

16. Ogawa Y, Mukoyama M, Yokoi H, Kasahara M, Mori K u.c. (2012) Natriurētisko peptīdu receptoru guanililciklāze-A aizsargā podocītus no aldosterona izraisītiem glomerulāriem bojājumiem. J Am Soc Nephrol 23: 1198–1209.

17. Yokoi H, Mukoyama M, Mori K, Kasahara M, Suganami T u.c. (2008) Saistaudu augšanas faktora pārmērīga ekspresija podocītos pasliktina diabētisko nefropātiju pelēm.NieresInt 73: 446–455.

18. Hoshino K, Takeuchi O, Kawai T, Sanjo H, Ogawa T u.c. (1999) Visprogresīvākā: Pelēm, kurām ir 4. nodevu līdzīgo receptoru (TLR4) deficīts, ir zema reakcija uz lipopolisaharīdu: pierādījumi par TLR4 kā Lps gēna produktu. J Immunol162: 3749–3752.

19. Suganami T, Tanimoto-Koyama K, Nishida J, Itoh M, Yuan X u.c. (2007) Toll līdzīgo receptoru 4/NF-kappaB ceļa loma piesātināto taukskābju izraisītās iekaisuma izmaiņās mijiedarbībā starp adipocītiem un makrofāgiem. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 27: 84–91.

20. Pepper RJ, Hamour S, Chavele KM, Todd SK, Rasmussen N u.c. (2013) Leikocītu un seruma S100A8/S100A9 ekspresija atspoguļo slimības aktivitāti ar ANCA saistītā vaskulīta un glomerulonefrīta gadījumā.NieresInt 83: 1150–1158.

21. Ravid M, Brosh D, Ravid-Safran D, Levy Z, Rachmani R (1998) Galvenie nefropātijas riska faktori 2. tipa cukura diabēta gadījumā ir holesterīna līmenis plazmā, vidējais asinsspiediens un hiperglikēmija. Arch Intern Med 158: 998–1004.

22. Adler AI, Stratton IM, Neil HA, Yudkin JS, Matthews DR u.c. (2000) Sistoliskā asinsspiediena saistība ar 2. tipa cukura diabēta makrovaskulārajām un mikrovaskulārajām komplikācijām (UKPDS 36): perspektīvs novērošanas pētījums. BMJ 321: 412–419.

23. Ruggenenti P, Remuzzi G (1998) Cukura diabēta tipa -2 nefropātija. J Assoc Nephrol 9: 2157–2169.

24. Taft JL, Nolan CJ, Yeung SP, Hewitson TD, Martin FI (1994) Nieru darbības samazināšanās klīniskās un histoloģiskās korelācijas diabēta pacientiem ar proteīnūriju. Diabēts 43: 1046–1051.

25. Matsusaka T, Niimura F, Shimizu A, Pastan I, Saito A u.c. (2012) Liverangiotensinogēns ir primārais nieru angiotenzīna II avots. J Am Soc Nephrol23: 1181–1189.

26. Kuwabara T, Mori K, Mukoyama M, Kasahara M, Yokoi H u.c. (2009) Ar urīna neitrofilu želatināzi saistītais lipokalīna līmenis atspoguļo glomerulu, proksimālo kanāliņu un distālo nefronu bojājumus.NieresInt 75: 285–294.

27. Kawasaki Y, Suyama K, Go H, Imamura T, Ushijima Y u.c. (2009) Makrofāgu uzkrāšanās, kas ekspresē ar mieloīdiem saistītu proteīnu 8, kas saistīta ar sklerotisko izmaiņu progresēšanu bērniem ar IgA nefropātiju. Tohoku J Exp Med 218: 49–55.

28. Nagareddy PR, Murphy AJ, Stirzaker RA, Hu Y, Yu S u.c. (2013) Hiperglikēmija veicina mielopoēzi un pasliktina aterosklerozes izzušanu. Cell Metab 17: 695–708.

29. Jin Y, Sharma A, Carey C, Hopkins D, Wang X u.c. (2013) Pacientu ar 1. tipa cukura diabētu perifērajās asinīs tiek pārregulēta iekaisuma gēnu ekspresija. Diabēta aprūpe.

30. Longo VD, Finch CE (2003) Evolūcijas medicīna: no punduru modeļu sistēmām līdz veseliem simtgadniekiem? Zinātne 299: 1342–1346.

Citāts: Kuwabara T, Mori K, Kasahara M, Yokoi H, Imamaki H u.c. (2014) Predictive Significance ofNieresAr mieloīdu saistītā proteīna 8 ekspresija pacientiem arAptaukošanās- vai ar 2. tipa diabētu saistītas nieru slimības. PLoS ONE 9(2): e88942. doi:10.1371/journal.pone.0088942

Redaktors: Utpal Sen, Luisvilas Universitāte, Amerikas Savienotās Valstis

Saņemts 2013. gada 11. septembrī; Akceptēts 2014. gada 14. janvārī; Publicēts 2014. gada 18. februārī

Autortiesības: 2014 Kuwabara et al. Šis ir brīvpiekļuves raksts, kas tiek izplatīts saskaņā ar Creative Commons Attribution License noteikumiem, kas atļauj neierobežotu izmantošanu, izplatīšanu un reproducēšanu jebkurā datu nesējā, ja ir norādīts sākotnējais autors un avots.

Finansējums: šo darbu daļēji atbalstīja Japānas Veselības, darba un labklājības ministrijas (KM) grants atbalstam diabēta nefropātijas un nefrosklerozes pētījumiem, Japānas Izglītības, kultūras, sporta un zinātnes ministrijas pētniecības dotācijas. , un tehnoloģija (TK, KM un MM), no Japānas Lietišķās enzimoloģijas fonda (uz TK) un no Smēķēšanas pētniecības fonda (uz MM). Finansētājiem nebija nekādas lomas pētījuma izstrādē, datu vākšanā un analīzē, lēmuma par publicēšanu vai manuskripta sagatavošanā.

Konkurējošas intereses: autori ir paziņojuši, ka nepastāv konkurējošas intereses.

* E-pasts: keyem@kuhp.kyoto-u.ac.jp