Sākotnējais pētījums par makaronu paraugiem, kas raksturo antioksidantu savienojumus un to bioloģisko aktivitāti uz nieru šūnām

Kontaktpersona: Odrija Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pasts:audrey.hu@wecistanche.com

Federiko Di Marko u.c

Abstract:Makaroni ir viens no galvenajiem pārtikas produktiemVidusjūradiētu, un šī iemesla dēļ tika izvēlēts šim pētījumam, lai novērtētu tā antioksidanta īpašības. Tika izvēlēti trīs makaronu veidi: griķu, rudzu un olu makaroni. Kvalitatīvā-kvantitatīvā raksturojuma analīzes veicaHPLC-DADlai identificētu antioksidantu savienojumus. Dati liecināja par karotinoīdu, piemēram, luteīna, un polifenolu, piemēram, indoletiķskābes, klātbūtni (karotinoīdi no {{0}},08 līdz 0,16 mg/100 g,polifenolino 3,7 līdz 7,4 mg/100 g). Lai novērtētu atklāto metabolītu ietekmi, tika veikti in vitro eksperimentinieresšūnu modeļi: HEK-293 un MDCK. Lai noteiktu dzīvotspējas izmaiņas, tika pārbaudīti makaronu paraugu karotīna, indoletiķskābes, kafeīnskābes, hidrospirta un karotinoīdu bagātināto ekstraktu standarti antioksidanta klātbūtnē. -karotīna un indoletiķskābes standartiem bija aizsargājoša iedarbība uz HEK-293 šūnām, bet ietekme uz MDCK netika atklāta. Pārbaudītās koncentrācijas, visticamāk, ir robežās ar tām, kas tiek sasniegtas organismā pēc standarta makaronu ēdienreižu lietošanas. Ar karotinoīdiem bagātinātiem ekstraktiem un hidrospirta ekstraktiem bija atšķirīga iedarbība, novērojot rudzu makaronu hidrospirta ekstrakta un griķu makaronu karotinoīdu bagātinātā ekstrakta izglābšanos, savukārt olu makaroni uzrādīja maigāku iedarbību atkarībā no devas, pieņemot, ka lielās koncentrācijās ir prooksidants. Sākotnējie rezultāti liecina, ka uzvedību var izsekot līdz visiem fitokompleksiem attiecībā uz atsevišķām molekulām, un ir nepieciešami turpmāki pētījumi.

Atslēgvārdi:makaroni;Vidusjūradiēta; polifenoli; karotinoīdi; antioksidantu savienojumi;nieresveselība;HPLC/DADanalīzes

Cistanche tubulosa novērš nieru slimību, noklikšķiniet šeit, lai iegūtu paraugu

1. Ievads

Neskatoties uz to, nav unikālas definīcijasVidusjūraDiēta — kulinārijas tradīciju atšķirību un pielāgošanās dēļ ne tikai Vidusjūras reģionā, bet arī visā pasaulē [1] — Vidusjūras diētu var uzskatīt par vairākiem komponentiem, kas atbilst svarīgiem veselīga uztura kritērijiem: zems piesātināto vielu saturs. taukskābes, augsts salikto ogļhidrātu saturs, šķiedrvielu un antioksidantu molekulas, kā arī pārpilnība dārzeņos.

Ir grūti noteikt, kuri pārtikas produkti vai tajos esošās aktīvās sastāvdaļas saturVidusjūrauzturs ir visvairāk atbildīgs par ieguvumiem veselībai; uzkrājošie dati liecina, ka tās galvenās priekšrocības slēpjas kompleksu un daudzveidīgu dažādu uzturvielu kombinācijā, kas mijiedarbojas sinerģiski un aditīvi [2].

Pēdējos gados pieaugošā literatūra (novērošanas pētījumi un randomizēti kontroles pētījumi) ir pierādījuši ieguvumus veselībai, kas saistīti ar Vidusjūras diētu, samazinot risku saslimt ar vairākām hroniskām slimībām, piemēram, sirds un asinsvadu slimībām [3–5], diabētu [6–10], vēzis [11,12], aptaukošanās [13–15] vai kognitīvā veselība [16–19] un paredzamā dzīves ilguma palielināšanās [20].

Asinsspiediena [21], lipīdu profila [22, 23], insulīna rezistences [24] un aizsardzības pret oksidatīvo stresu, iekaisumu, trombocītu agregāciju un endotēlija disfunkciju [25–28] uzlabošanās, šķiet, ir darbības mehānismi, kas ir atbildīgi par labvēlīgo ietekmi uz vispārējo veselību. Visi šie bioloģiskie efekti, ko veicina pieturēšanās pie Vidusjūras dzīvesveida, varētu būt aktuāli ne tikai iepriekšminētajām hroniskajām slimībām, bet arī nieru mazspējas profilaksei plašai populācijai. Hroniska nieru slimība (HNS) ir globāla sabiedrības veselības problēma, kas skar vairāk nekā 750 miljonus cilvēku visā pasaulē un bieži vien darbojas klusi un netraucēti, pateicoties tās asimptomātiskajai klīniskajai izpausmei. Dažādi pierādījumi ir uzsvēruši ciešo saistību starp Vidusjūras diētu un nieru saglabāšanu [29].

Ņemot vērā visas iepriekš minētās sekas kā nieru darbības pasliktināšanās riska faktorus, nieres var uzskatīt par vienu no primārajiem mērķiem. Nesenā kohortas pētījumu metaanalīze parādīja, ka augu izcelsmes diēta, piemēram, Vidusjūras diēta vai diētas pieeja hipertensijas (DASH) pārtraukšanai, ir saistīta ar mazāku negadījumu risku.CKDun albuminūrija vispārējā populācijā [30]. Viens no izskaidrojumiem varētu būt tas, ka augļi un dārzeņi satur bioaktīvus savienojumus, kas aizsargā pret iekaisumu un endotēlija disfunkciju, kas veicina dinamiskas filtrācijas frakcijas izmaiņas, kā rezultātā pakāpeniski samazinās glomerulārās filtrācijas ātrums, ekstracelulārā šķidruma tilpuma paplašināšanās, nenormāls jonu līdzsvars un nieru hipoksija. izraisot nieru darbības zudumu [31–33]. Turklāt dārzeņu, augļu, graudaugu un pākšaugu patēriņa palielināšanās, iespējams, izraisīja dzīvnieku olbaltumvielu patēriņa samazināšanos, kas pozitīvi ietekmēja skābju-bāzes līdzsvaru un glomerulāro hemodinamiku.nieres, pasargājot to no glomerulārās sklerozes un funkciju zuduma [34–37].

Neskatoties uz to, ir vairāki pētījumi ar pretrunīgiem datiem par proteīna satura diētas ietekmi uz nieru darbības samazināšanos vispārējā populācijā [38–41], arvien vairāk pierādījumu liecina, ka olbaltumvielu avotam ir svarīga loma nieru darbības saglabāšanā un ka pāreja no dzīvnieku izcelsmes uz augu proteīna avotu varētu būt izdevīga [42,43].

Makaroni ir viens no visvairāk patērētajiem pārtikas produktiem pasaulē un ir viens no Vidusjūras diētas galvenajiem pārtikas produktiem. Tradicionāli Itālija ir galvenais makaronu patēriņa ražotājs un līderis, pat ja makaronus visā pasaulē patērē zemu izmaksu, garšas un ilgāka glabāšanas laika dēļ nekā citus maizes izstrādājumus [44]. Makaroni ir labs ogļhidrātu un enerģijas avots (100 g vārītu makaronu satur apmēram 31 g ogļhidrātu un aptuveni 158 kcal), taču parasti tajos ir maz lipīdu, olbaltumvielu, fosfora un kālija, kas ir uzturvielu komponenti, kas ir ierobežoti lielākajā daļā nieru diētu. nieru slimība (pieejama tiešsaistē vietnē https://fdc.nal.usda.gov, pieejama 2020. gada 1. decembrī). Dabiski bagātinātie kviešu makaroni, kas veido lielāko daļu no komerciāli pieejamo makaronu izstrādājumu, piedāvā arī labu tiamīna, riboflavīna, niacīna, folātu, dzelzs un selēna, kā arī polifenolu līmeni. Turklāt makaronus vienmēr lieto kopā ar citiem pārtikas produktiem, ko varētu uzskatīt par spēcīgāku polifenolu avotu, piemēram, olīveļļu un dārzeņiem. Makaronus parasti ražo no cieto kviešu mannas, pateicoties tās izcilajām reoloģiskajām īpašībām, izcilajai makaronu krāsai, gatavošanas kvalitātei un patērētājam, bet pēdējā laikā makaronus var ražot arī no citiem graudaugiem, piemēram, rīsiem, griķi, rudzi, speltas.

Pēdējos gados patērētāji arvien vairāk apzinās, ka sabalansēts uzturs, piemēram, Vidusjūras, var pozitīvi ietekmēt veselību, tāpēc pārtikas rūpniecība cenšas apmierināt šīs prasības, ražojot kvalitatīvu un funkcionālu pārtiku un pārtikas sastāvdaļas.

Neskatoties uz to, ka bagātināta pārtika ir ražota veselīgiem nolūkiem, cilvēkus var mudināt uzņemties tos sabalansēta uztura vietā. Šī ir tik svarīga tēma, kas mudina FDA publicēt ad hoc dokumentu ar nosaukumu "FDA stiprināšanas politika", lai sniegtu atbildi, no vienas puses, pārtikas rūpniecībai un, no otras puses, akadēmiskajai pasaulei [44].

Sabalansēts, adekvāts un daudzveidīgs uzturs ir nozīmīgs solis ceļā uz laimīgu un veselīgu dzīvesveidu, neriskējot pārslogoties ar dažām bagātinātā pārtikā esošajām sastāvdaļām. Tieši šī iemesla dēļ ir no jauna atklāti netradicionālie graudaugi un pseido graudaugi, kas ir pavēruši ceļu to izmantošanai kā funkcionālas pārtikas sastāvdaļas, jo tiem piemīt dažas uzturvērtības un funkcionālās īpašības, kuru tradicionālajos graudaugos nav vai to trūkst. Griķi un rudzi ir bagāti fitoķīmisko vielu, piemēram, polifenolu, savienojumu avoti, kas ir cieši saistīti ar antioksidantu aktivitātēm [45,46].

Projektā MOLI-SANI, kas tika uzsākts 2005. gada martā, tika iesaistīti aptuveni 25,{3}} Molizē (Itālija) dzīvojošie iedzīvotāji, lai novērtētu vides un ģenētiskos faktorus, kas ir sirds un asinsvadu slimību, audzēju un neirodeģeneratīvu slimību pamatā. Saskaņā ar MOLI-SANI projekta pētījumu, makaronu uzņemšana ir saistīta ar zemāku ĶMI un zemāku centrālās aptaukošanās līmeni. Daudzi pētījumi ir apstiprinājuši, ka augstas kaloriju diētas izraisa svara pieaugumu, nevis diēta, kas ietver ogļhidrātus. Faktiski, ja makaronu porcija ir pareiza un mērce nav pārāk kaloriska, makaronu šķīvī var būt kaloriju saturs, kas atbilst ikdienas enerģijas prasībām [47]. Makaroni tiek augstu novērtēti, jo to īpašības ir saistītas ne tikai ar ķermeņa svara kontroli, bet arī ar vairākām pozitīvām veselības īpašībām [48]. Randomizēts, kontrolēts pētījums, kas tika veikts ar veseliem cilvēkiem, parādīja, ka rudzu produkti uzlabo glikēmijas regulējumu, palielina zarnu hormonu daudzumu, kas iesaistīti apetītes un vielmaiņas regulēšanā. Rudzi samazina apetītes līmeni pēc ēšanas, samazinot vēlmi ēst nākamajās ēdienreizēs, palielinot sāta sajūtu un mazinot izsalkumu, palielinot sāta hormonu GLP-1 (glikagonam līdzīgais peptīds-1) un peptīds YY (PYY). Zemāka glikozes reakcija pēc ēšanas tika novērota cilvēku grupai, kas patērēja rudzu pārtiku, salīdzinot ar personu grupu, kas patērē rafinētus kviešus. Tas notiek tāpēc, ka rudzi ir zema glikēmiskā indeksa labība, ko var lietot arī diabēta pacienti [49]. Rudzi var uzlabot plazmas lipīdu profilu, patiesībā veselu rudzu uzņemšana ir apgriezti saistīta ar ZBL holesterīna koncentrāciju, ZBL/ABL attiecību un triglicerīdu koncentrāciju. Šis efekts ir saistīts ar šķiedru un -glikānu klātbūtni [50].

Makaroni ir labi pazīstami kā ogļhidrātu avots, taču tie var saturēt arī nelielus savienojumus, piemēram, karotinoīdus [51], īpaši luteīnu, un citas antioksidantu sugas, piemēram, polifenolus. Šīs bioaktīvās molekulas var bagātināt dažādu veidu makaronos, atkarībā no izejvielām. Piemēram, karotinoīdu saturs cietajos kviešos ir augstāks nekā maizes kviešu [52], un antioksidantu līmeni var palielināt, makaronu izstrādājumos iekļaujot kliju frakciju un visu cieto kviešu kodolu [53]. Griķi ir būtisks fenola savienojumu, vitamīnu un neaizvietojamo aminoskābju avots [54], savukārt olu pievienošana makaronu gatavošanā nodrošina karotinoīdus un luteīnu. Karotinoīdi piedalās profilakses pasākumos, īpaši iekaisuma sindroma gadījumā, un to loma ir saistīta ar to antioksidanta īpašībām [55] pret brīvajiem radikāļiem un skābekli [56]. Makaroni satur dažāda veida antioksidantu molekulas, un biežiem patērētājiem lielu patēriņu var uzskatīt par svarīgu šādu veselīgu savienojumu avotu.

Šeit mēs parādām, ka dažāda veida makaroni, proti, griķu, rudzu un olu makaroni, satur dažādu daudzumu antioksidantu savienojumu, kam ir nozīme nieru šūnu dzīvotspējas uzlabošanā līdzsvara stāvoklī vai pēc oksidatīvā stresa indukcijas.

2. Materiāli un metodes

2.1. Paraugi

Tika analizēti un pārbaudīti trīs vārītu makaronu paraugi: viens pilngraudu griķu makaronu paraugs (1), viens pilngraudu rudzu makaronu paraugs (2) un viens olu makaronu paraugs no kauliņos samaltu cieto kviešu miltu (3).

2.2. Makaronu paraugu sagatavošana

Kopumā 50 g pilngraudu griķu makaronu vai pilngraudu rudzu makaronu tika vārīti 500 ml ūdens 7 minūtes; 50 g olu makaronu no akmeņiem samaltiem cieto kviešu miltiem tika vārīti 500 ml ūdens 1 minūti, kā norādījis ražotājs.

Lai iegūtu ar karotinoīdiem bagātinātus ekstraktus, 10 g vārītu makaronu izšķīdināja 100 ml acetona, 30 minūtes auksti apstrādāja ar ultraskaņu. Paraugu centrifugēja 5 minūtes pie 5000 apgr./min, supernatants tika sausi iztvaicēts ar rotācijas iztvaicētāju, un atlikums tika izšķīdināts acetonā vai DMSO atkarībā no pakārtotās analīzes. Lai iegūtu ar polifenoliem bagātinātus ekstraktus, 10 g katra vārītu makaronu parauga tika izšķīdināti 50 ml 70:30 EtOH/H2O pie pH 3,2. Paraugus krata 24 stundas, centrifugēja 5 minūtes ar ātrumu 1400 apgr./min. Paraugu centrifugēja 5 minūtes ar ātrumu 5000 apgr./min, un supernatantu savāca un analizēja HPLC-DAD, kamēr alikvota daļa tika sausi iztvaicēta, un atlikumu izšķīdināja DMSO šūnu apstrādei.

2.3. HPLC-DA-MS analīze

Karotinoīdu un polifenolu kvalitatīvās kvantitatīvās analīzes tika veiktas, izmantojot HP 1100 šķidruma hromatogrāfiju, kas aprīkota ar DAD detektoru un ko pārvalda HP 9000 darbstacija (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, ASV) un savienota ar uzkrāšanas spektrometru. ar API/elektrospray interfeisu (Agilent Technologies). Masas spektrometra darbības apstākļi bija šādi: gāzes temperatūra, 350 ◦C; slāpekļa plūsmas ātrums, 11,0 L/min; smidzinātāja spiediens, 40 psi; kvadrupola temperatūra, 100 ◦C; un kapilārais spriegums, 4000 V. Masas spektrometrs darbojās pozitīvā un negatīvā režīmā 80–180 eV.

Savienojumi tika atdalīti, izmantojot 250 × 4,6 mm id, 5 µm LUNA C18 kolonnu (Phenomenex, Torrance, CA, ASV). UV/Vis spektri tika reģistrēti 190–600 nm diapazonā, un hromatogrammas tika iegūtas pie 250, 280, 330, 350 un 450 nm. Paraugus analizēja ar gradienta eluēšanu ar ātrumu 0,8 ml/min. Mobilā fāze karotinoīdiem bija daudzpakāpju lineāra šķīdinātāja gradienta sistēma (šķīdinātājs A: acetons, šķīdinātājs B: H2O, pH 3,2 ar skudrskābi), sākot no 80 procentiem acetona līdz 100 procentiem 30 minūtēs. polifenoli tika eluēti, izmantojot šādu gradientu: no 90 procentiem H2O (ar skudrskābi noregulēts līdz pH 3,2) līdz 100 procentiem CH3CN 40 minūtēs. Visi izmantotie šķīdinātāji bija ar HPLC tīrības pakāpi (BDHLaboratory Supplies, Poole, UK).

2.4. Kvantitatīvā analīze

Atsevišķu polifenolu savienojumu kvantitatīvā noteikšana tika tieši veikta ar HPLC-DAD, izmantojot piecu punktu regresijas līkni (R2, kas ir lielāks par vai vienāds ar 0,998) diapazonā no 0–30 µg, pamatojoties uz autentiski standarti. Jo īpaši flavonoli tika noteikti pie 350 amizantā kvercetīna 3-O-glikozīda kā atsauces savienojuma, savukārt kofeīnskābes atvasinājumi tika noteikti pie 330 nm, izmantojot hlorogēnskābi kā atsauces savienojumu un indola etiķskābes atvasinājumu pie 280 nm, izmantojot 3 indoletiķskābes. (Sigma-Aldrich, Sentluisa, MO, ASV). Karotinoīdi tika noteikti pie 450 nm, izmantojot beta-karotīnu kā atsauces savienojumu (Extrasynthese, Lione, Francia). Visos gadījumos atvasinājumu faktiskās koncentrācijas tika aprēķinātas pēc molekulmasas atšķirību korekciju piemērošanas.

2.5. Kopējais fenola saturs

Kopējais fenola saturs tika noteikts, izmantojot Folin-Ciocalteu metodi, ko aprakstīja Singleton et al. [57] un nedaudz modificēta saskaņā ar Dewanto et al. [58]. 125 µL atbilstoši atšķaidīta parauga ekstrakta pievienoja 0,5 ml dejonizēta ūdens un 125 µL Folin-Ciocalteu reaģenta. Maisījumu noturēja 6 minūtes un pēc tam pievienoja 1,25 ml 7 procentu Na2CO3 ūdens šķīduma. Galīgais tilpums tika noregulēts līdz 3 ml ar ūdeni. Pēc 90 minūtēm absorbcija tika mērīta pie 760 nm pret ūdeni kā tukšo paraugu. Kopējo fenolu daudzumu izsaka gallskābes ekvivalentos (GAE, mg gallskābes/100 g parauga), izmantojot gallskābes kalibrēšanas līkni. Kalibrēšanas līkne bija robežās no 20 līdz 500 µg/mL (R2=0.9969) [57,58].

2.6. Šūnu kultūra

Cilvēka embrionālās nieres 293 (HEK-293) šūnas un Madin-Darby suņa nieru (MDCK) šūnas tika kultivētas DMEM, kas papildināts ar GlutaMAX, 10% (v/v), liellopu augļa serumu, 100 V/ml penicilīnu un 100 µg. /mL streptomicīna pie 37 ◦C ar 5 procentiem CO2.

2.7. MTT tests

5{{10}}00 šūnas/iedobē MDCK un HEK-293 šūnas tika iesētas 96 iedobju plāksnēs un ļāva tām pielipt 24 stundas. Dzīvotspējas pētījumos šūnas tika inkubētas no 24 līdz 72 stundām ar beta karotīnu, indola -3-etiķskābi, kofeīnskābi (DMSO) un makaronu ekstraktiem atsevišķi vai magnija monoperoksiftalāta (MMPP, Sigma-Aldrich) klātbūtnē. , Sentluisa, MO, ASV). Neapstrādātiem paraugiem tika izmantots DMSO barotnē tādā pašā koncentrācijā kā testētajiem savienojumiem. Pārbaudītā koncentrācija standartiem bija robežās no 2 pM līdz 10 µM, savukārt MMPP no 0,001 līdz 0,05 mg/ml. Šūnu dzīvotspēja tika mērīta 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolija bromīds (MTT, Sigma-Aldrich, Sentluisa, MO, ASV). Plāksnes inkubēja 37 ◦ C temperatūrā 1 stundu, un pēc tam MTT reducēšanas rezultātā iegūtais Formazāns tika izšķīdināts DMSO. Absorbcija tika noteikta ar mikroplašu lasītāju (Mithras LB 940-Berthold) pie 570 nm. Šūnu dzīvotspējas procentuālais daudzums tika aprēķināts, izmantojot attiecību AbsTEST/AbsCTRL.

2.8. Statistiskā analīze

Katrs eksperiments tika veikts četros eksemplāros un tika atkārtots vismaz trīs reizes. Dzīvotspējas procentuālās atšķirības tika novērtētas, izmantojot sapārotu Stjudenta t-testu un divvirzienu ANOVA, kam sekoja posthoc tests ar Holmas korekciju vairākkārtējai metabolītu koncentrāciju salīdzināšanai (p < 0,05).="" rezultāti="" tika="" izteikti="" kā="" vidējā="" ±="" standarta="" kļūda,="" un="" analīze="" tika="" veikta="" r-studio="" vidē="" [59]="" r="" versijai="" 3.6.3="" [60],="" izmantojot="" pakotni="" "tidyverse"="">

3. Rezultāti un diskusijas

3.1. Makaronu paraugu ķīmiskās kvalitātes noteikšana

Pārtikas uzturvērtības informācija ļauj izdarīt apzinātu pārtikas un uztura izvēli. Makaronus tradicionāli gatavo no mannas putraimi, taču pat kopā ar citiem graudaugiem visi satur cieti kā galveno sastāvdaļu, kam seko olbaltumvielas, tauki, vitamīni, minerālvielas un bioaktīvie savienojumi [62]. Tabulā S1 ir norādīti uzturvērtības dati.

Lai salīdzinātu vairāku veidu makaronu uzturvērtības, kas bagātināti ar bioaktīviem savienojumiem dažādu labības avotu vai noteiktu sastāvdaļu papildināšanas dēļ, mēs analizējām griķu makaronus, rudzu makaronus un olu makaronus. Lai iegūtu ekstraktus, kas bagātināti ar dažādām makaronu paraugos esošo savienojumu apakšklasēm, tika veikta un analizēta gan hidrospirta, gan acetona ekstrakcija. Atsevišķi polifenoli tika provizoriski identificēti, izmantojot datus no HPLC-DAD-MS analīzes, salīdzinot un kombinējot to aiztures laikus un masas spektrometriju un UV spektrus (skat. S1–S5 attēlus vienam un tam pašam MS spektru piemēram) un salīdzinot rezultātus ar standartiem (kaempferol, kvercetīns, rutīns un ferulskābe) un iepriekšējie bibliogrāfiskie darbi. Jo īpaši hidrospirta ekstraktos tika identificēti flavonoīdi, kafijas un indoletiķskābes atvasinājumi (1. tabula): indoletiķskābes atvasinājums ir galvenais savienojums, kā aprakstīts iepriekš, pat attiecībā uz mannu. [63]. Ņemot vērā relatīvo sastāvu, griķu makaroni uzrādīja augstāku flavonoīdu līmeni, jo īpaši kvercetīna atvasinājumi ir galvenie flavonoli, kā iepriekš ziņots griķos [64,65], un nenozīmīga kofeīnskābes atvasinājumu klātbūtne; rudzu makaronos bija augstāks kofeīnskābes atvasinājumu, jo īpaši ferulīnskābes [66] līmenis un zems flavonoīdu saturs; olu makaroni uzrādīja tikai zemu flavonoīdu koncentrāciju (apigenīna atvasinājumu [67]), un kafijskābes atvasinājumu nebija.

Piemēram, vārītu makaronu paraugu hromatogrāfiskie profili, kas reģistrēti pie 350 nm, ir parādīti 1. attēlā. Attēlā parādīts analizēto paraugu kvalitatīvais sastāvs.

Luteīns bija galvenais karotinoīds, kas identificēts acetona ekstraktos, ar līdzīgu relatīvo saturu attiecībā pret kopējo karotinoīdu sugu, kā parādīts 2. tabulā saskaņā ar iepriekšējiem pētījumiem [68]. Karotinoīdi rudzu makaronos netika konstatēti.

Antioksidantu sekundāro metabolītu klātbūtne ir novērtēta arī makaronu paraugos (3. tabula). Tika novērtēta biokomponentu kopējā antioksidanta kapacitāte, iespējams, fenola/polifenola aktivitātes dēļ, un tika secināts šādu molekulu skaits.

3.2. Indola-3-etiķskābes iedarbība,8-Karotīns un kofeīnskābe ietekmē šūnu dzīvotspēju

Vidusjūras diēta ir atzīta par antioksidantu molekulu avotu, kas aizsargā organismu pret oksidatīvo stresu un atbalsta veselību [2]. Tāpēc mēs domājām, vai mūsu makaronu paraugos konstatētās biomolekulas var ietekmēt šūnu dzīvotspēju un cik lielā mērā. Mēs izmantojām HEK-293 un MDCK veselās nieru šūnas, lai noteiktu indoletiķskābes, -karotīna un kofeīnskābes standarta savienojumu aktivitāti. Nieres ir īpaši jutīgas pret oksidatīvo stresu, un brīvo radikāļu uzkrāšanās izraisa nieru darbības traucējumus [69]. Šūnas tika inkubētas ar standarta savienojumu skalāro koncentrāciju, un šūnu dzīvotspēja tika mērīta dažādos laika punktos (3. attēls un S6. attēls).

Tika konstatēts, ka tiem nav toksiskas ietekmes uz HEK{{0}} šūnām visās pārbaudītajās koncentrācijās inkubācijas laikā. Tikai -karotīns samazināja šūnu dzīvotspēju U-veida formā uz HEK-293 šūnām un no devas atkarīgā veidā MDCK šūnās (3. attēls). Jāatzīmē, ka koncentrācija, kas organismā tiek sasniegta pēc standarta makaronu maltītes (parasti 80 gr) ēšanas, ir zemākās pārbaudītās (2 × 10_5 –2 × 10_4 uM, [70) , 71]), kas nodrošināja vāju abu šūnu līniju dzīvotspējas uzlabošanos. No otras puses, augstākās koncentrācijās virs 0,2 uM, ko var iegūt tikai farmakoloģiski, kofeīnskābe uzrādīja būtisku šūnu dzīvotspējas uzlabošanos, bet indoletiķskābe un karotīns uzrādīja salīdzināmu iedarbību līdz ar koncentrācijas pieaugumu (2–20 uM). ) HEK-293 šūnās.

3.3. Indola-3-etiķskābes, karotīna un kofeīnskābes ietekme uz šūnām, kas apstrādātas ar MMPP

Pēc tam mēs domājām, vai indoletiķskābe, karotīns un kofeīnskābe var neitralizēt oksidētāja MMPP izraisīto stresu. Pirmkārt, mēs pārbaudījām MMPP efektu, pakļaujot HEK-293 un MDCK šūnām zāļu sērijveida atšķaidījumus (0.005–0,05 mg/mL), un tika noteikta šūnu dzīvotspēja. Pēc ārstēšanas ar MMPP tika novērota no devas atkarīga samazināšanās, un IC50 bija salīdzināms abās pārbaudītajās šūnu līnijās. Pēc inkubācijas ar 20–25 µg/mL MMPP šūnu dzīvotspēja tika ievērojami samazināta līdz aptuveni 50–60 procentiem (4. attēls), un tika aprēķināta puse no maksimālās inhibējošās koncentrācijas (IC50) 26 µg/mL HEK{{16} } un 22 µg/mL MDCK.

Pēc tam mēs pārbaudījām mūsu antioksidantu molekulu aizsargājošo aktivitāti uz MMPP apstrādātām šūnām, papildinot šūnu barotni ar 2 × 10_5 nM indoletiķskābi, karotīnu vai kofeīnskābi. Nedaudz pozitīva ietekme uz HEK-293 un MDCK šūnu dzīvotspēju tika apstiprināta, izmantojot standartus kā tādus tādā devā, kas, iespējams, iegūta no makaronu porcijas (5. attēls).

Kā gaidīts, MMPP samazināja šūnu dzīvotspēju līdz 60–65 procentiem; apstrāde ar indoletiķskābi vai karotīnu neitralizē MMPP efektu un izglāba šūnu dzīvotspēju attiecīgi par 30 procentiem (p < 0,001)="" un="" 27="" procentiem="" (p=""> 0,01) uz HEK-293 šūnām, kamēr kofeīnskābe neradīja nekādu būtisku efektu. Oksidētāja klātbūtnē beta-karotīns un indoletiķskābe uzrādīja aizsargājošu iedarbību uz šūnām zemā koncentrācijā, turpretim kofeīnskābe neitralizēja oksidatīvo stresu koncentrācijā, kas nepieciešama šūnu dzīvotspējas uzlabošanai. Šīs pozitīvās sekas, iespējams, ir saistītas ar indoletiķskābes un karotinoīdu antioksidanta īpašībām, kas var ievērojami līdzsvarot MMPP izraisīto citotoksicitāti, lietojot devu, kas tiek izmantota šajā eksperimentālajā stāvoklī. Neskatoties uz to, ar MMPP apstrādātām MDCK šūnām netika novērota nozīmīga glābšana, kas liecina, ka, pat ja standarti vien uzrādīja būtisku pozitīvu ietekmi uz šūnu dzīvotspēju, tie nav pietiekami, lai cīnītos ar MMPP izraisīto oksidatīvo stresu. Šķiet, ka embrionālās HEK 293 šūnas ir ātrākas, lai sakārtotu aizsardzības līniju pret stresu nekā pieaugušais MDCK, iespējams, papildu šūnu redoksu homeostāzes sistēmu dēļ.

3.4. No makaroniem iegūtās karotinoīdu bagātinātās frakcijas ietekme uz MMPP izraisītu citotoksicitāti

Lai novērtētu ar karotinoīdiem bagātināto frakciju, kas iegūtas no griķu makaronu un olu makaronu ekstrakcijas ar acetonu, ietekmi uz nieru šūnām oksidatīvā stresa klātbūtnē, HEK-293 šūnas tika inkubētas ar dažādām ekstraktu koncentrācijām no 2 × { {3}} uM līdz 2 × 10_3 uM MMPP klātbūtnē 72 stundas (6. attēls un S2 tabula). Izmantotā koncentrācija attiecas uz ekstraktā noteikto karotīna koncentrāciju (tabula2). Luteīna saturs svārstījās no 1,5 × 10_6 uM līdz 1,5 × 10_3 uM griķu makaronos un no 1,34 × 10_6 uM līdz 1,34 × 10_3 uM olu makaronos.

Abos acetona ekstraktos dabisko fitokompleksu klātbūtne uzrādīja atšķirīgu ietekmi attiecībā pret vienu standartu, kā rezultātā tika panākta lielāka aktivitāte zemākās koncentrācijās. Palielinoties olu makaronu ekstraktu koncentrācijai, tika novērota šūnu dzīvotspējas samazināšanās. Zemākā karotinoīdu ekstraktu koncentrācija (2 × 10–6 µM) izraisīja nelielu pozitīvu efektu atsevišķi vai MMPP klātbūtnē uz HEK-293 šūnām. Griķu makaronu ekstrakts radīja šūnu dzīvotspējas uzlabošanos kā tikai ekstrakts, bet arī MPP klātbūtnē, sākot no 32 ± 5 procentiem zemākajā koncentrācijā līdz 21 ± 9 procentiem 2 × 10–4 µM.

Acetona ekstraktu aktivitāte tika novērtēta arī uz MDCK šūnām MMPP klātbūtnē vai bez tās un salīdzināta ar HEK-293 šūnās iegūto aktivitāti (7. attēls un S2 tabula).

Ar karotinoīdiem bagātinātie ekstrakti sniedza vispārēju dzīvotspējas efektu visās pārbaudītajās koncentrācijās abiem makaronu veidiem. Attiecībā uz HEK-293 griķiem makaronu ekstrakts sniedza labāku glābšanu pēc MMPP apstrādes visām devām, sākot no 50 ± 7 procentiem līdz 82 ± 5 procentiem, salīdzinot ar HEK-239 šūnām; olu makaronu ekstrakti iedarbojās tikai ar zemāko karotinoīdu koncentrāciju 2 × 10_6 uM MMPP klātbūtnē, kas liecina, ka ekstraktu īpašajam sastāvam ir galvenā loma reakcijā. Tādējādi griķu makaroni uzrādīja lielāku šūnu dzīvotspējas glābšanas spēju salīdzinājumā ar olu makaroniem, un, tā kā eksperimenti tika veikti, izmantojot tādu pašu karotīna daudzumu, atšķirība varētu būt saistīta ar nelielu savienojumu, piemēram, flavonoīdu savienojumu, klātbūtni. bijušajā.

Karotinoīdu sugas ir iesaistītas dažādās ķīmiskās reakcijās, kurās atkarībā no bioloģiskā konteksta un to koncentrācijas ir oksidanta un antioksidanta divējāda daba: šī augstā reaktivitāte ir saistīta ar konjugēto dubultsaišu klātbūtni [72]. To antioksidanta loma bija saistīta ar spēju delokalizēt oksidatīvo sugu un radikāļu dotos elektronus [73,74]. Augstu oksidatīvo apstākļu klātbūtnē to aktivitāte var tikt pārveidota par prooksidantu [75]. Mūsu gadījumos šis atradums tika novērots olu makaronos HEK-293 (gan atsevišķi, gan MMPP klātbūtnē) un MDCK šūnām MMPP klātbūtnē, kur dažādas acetona ekstrakta devas radīja pretēju efektu.

3.5. Hidroalkoholiskā ekstrakta ietekme uz MMPP izraisītu citotoksicitāti

Pēc tam mēs novērtējām griķu makaronu, rudzu makaronu un olu makaronu hidroalkoholisko ekstraktu ietekmi uz nieru šūnām, pārbaudot dažādas koncentrācijas no 5 × 10_5 uM līdz 5 × 10_1 uM ar vai bez MMPP. (8. attēls un S3 tabula). Izmantotā koncentrācija attiecas uz kopējā fenola satura koncentrāciju, kas konstatēta ekstraktā (3. tabula). Saskaņā ar 1. tabulā norādīto makaronu paraugu saturu griķu makaroniem indoletiķskābes koncentrācija tika ierindota no 1,85 × 10_5 uM līdz 1,85 × 10_1 uM, kofeīnskābes atvasinājumiem - no 3,5 × 10_6 uM līdz 3,5 × 10_2 uM, un flavonoīdu saturs bija no 2,8 × 10_5 uM līdz 2,8 × 10_1 uM; rudzu makaroniem indoletiķskābes koncentrācija bija no 2,2 × 10_5 uM līdz 2,2 × 10_1 uM, kofeīnskābes atvasinājumiem no 1,95 × 10_5 uM līdz 1,95 × {{37} } uM un flavonoīdu sugām no 8,5 × 10_6 uM līdz 8,5 × 10_2 uM; olu makaroniem indoletiķskābes koncentrācija bija no 4,25 × 10_5 uM līdz 4,25 × 10_1 uM, flavonoīdu sugām no 7,5 × 10_6 uM līdz 1,85 × 10_2 uM, kamēr nebija kofeīnskābes atvasinājumu.

Hidrospirtiskais ekstrakts no olu makaroniem neradīja nekādu būtisku ietekmi uz HEK{0}} dzīvotspēju neatkarīgi no oksidatīvā stresa klātbūtnes. Griķu makaronu ekstrakts uzrādīja šūnu dzīvotspējas uzlabošanos pēc apstrādes ar MMPP tikai visaugstākajā koncentrācijā (28 ± 6 procenti). Rudzu makaronu ekstrakts vien uzrādīja vispārēju šūnu dzīvotspējas uzlabošanos visām devām robežās no 14 ± 7 procentiem līdz 18 ± 1 procentiem, kā arī MMPP klātbūtnē no 27 ± 3 procentiem līdz 13 ± 3 procentiem. Ekstraktos esošais fito komplekss bija aktīvāks nekā atsevišķi standarti, ietekmējot šūnu dzīvotspēju zemākās koncentrācijās, salīdzinot ar pēdējo. Šie rezultāti liecina, ka hidroalkoholiskos ekstraktos galveno lomu glābšanā var attiecināt uz kofeīnskābes atvasinājumu klātbūtni, novērojot lielāku rudzu makaronu glābšanu un zemāku/nenozīmīgu ietekmi uz olu pagātni, kurā tie nav nosakāmi.

Pēc tam hidrospirta ekstrakts tika pārbaudīts uz MDCK šūnām tādos pašos apstākļos kā iepriekš, un tika novērtēta šūnu dzīvotspēja (9. attēls un S4 tabula).

Hidroalkoholiskais ekstrakts no griķu un olu makaroniem uzrādīja kontrastējošu ietekmi uz šūnu dzīvotspēju: pirmais to palielina, bet otrais samazina; abiem netika konstatēta ietekme uz ārstēšanu ar MMPP. Ekstrakts no rudzu makaroniem vien neuzrādīja nekādu ievērojamu ietekmi uz šūnu dzīvotspēju, bet tas atklāj spēcīgu aizsargājošu efektu pret MMPP mediētu oksidatīvo stresu visās koncentrācijās no 50 ± 7 procentiem līdz 61 ± 21 procentiem. Standarta apstākļos.

Ja nav MMPP, lielais indoletiķskābes saturs olu makaronu ekstraktā, šķiet, toksiski ietekmē šūnu dzīvotspēju. Salīdzinot abus šūnu modeļus, mēs novērojām atšķirīgu uzvedību attiecībā uz griķu un rudzu makaroniem, ja nebija MMPP. Jo īpaši HEK{0}} uzrādīja dzīvotspējas pieaugumu ar pēdējo, bet MDCK ar pirmo. Atšķirības ir saistītas ar fotokompleksu darbību, kam raksturīgs augstāks flavonoīdu saturs griķu makaronos. Šūnu dzīvotspējas glābšana starp paraugiem, kā novērots abām šūnu līnijām, atbilst palielinātam kofeīnskābes atvasinājumu saturam rudzu makaronos.

Fitokompleksus saturošu polifenolu un nieru šūnu mijiedarbības izpēte varētu palīdzēt izpētīt zināmo nozīmīgo ietekmi uz nieru fizioloģiju, ko šie savienojumi iedarbojas [76], koncentrējoties uz vienu no iespējamiem nesējiem, makaroniem, kas parasti ir saistīti ar veselīgu nieru uzturu. Parasti polifenolu metabolītu plazmas pusperiods ir dažas stundas, un tie ātri tiek izvadīti caur nierēm un aknām: izdalīšanās ceļā ar urīnu un žulti. Kopējais polifenola metabolītu daudzums, kas izdalās ar urīnu, ir saistīts ne tikai ar to maksimālo koncentrāciju plazmā, bet arī ar to spēju izdalīties ar žulti, nevis urīnceļiem. Piemēram, kvercetīna un tā glikozīdu izdalīšanās ar urīnu veido 0,3–1,4 procentus no uzņemtās devas [77]; kofeīnskābe un ferulīnskābe veido attiecīgi 5,9 procentus un 27 procentus. Tāpēc makaronu izcelsmes polifenoli var pozitīvi ietekmēt nieru šūnas atkarībā no to

daudzums un vielmaiņa. Ir nepieciešami turpmāki pētījumi, lai labāk definētu to ieguldījumu nieru veselībā.

Papildu materiāli:Tālāk norādītais ir pieejams tiešsaistē vietnē https://www.mdpi.com/article/ 10.3390/nu13041131/s1, S1 tabula: Uztura tabula. S2 tabula — HEK-293 un MDCK šūnu dzīvotspējas izmaiņu noteikšana, inkubējot ar pieaugošu daudzumu ar karotinoīdiem bagātinātas frakcijas no griķu makaroniem un olu makaroniem uz barotnes un MMPP 72 (HEK-293) un 24 ( MDCK) stundas. * p < {{20}}.5,="" **="" p="">< 0.01,="" ***="" p="">< {{30}}.001="" .="" tabula="" s3 —="" hek-293="" šūnu="" dzīvotspējas="" izmaiņu="" noteikšana,="" kas="" inkubētas="" ar="" pieaugošu="" daudzumu="" hidrospirta="" ekstrakta="" no="" griķu="" makaroniem,="" rudzu="" makaroniem="" un="" olu="" makaroniem="" uz="" barotnes="" un="" mmpp="" 72 stundas.="" *="" p="">< 0,5,="" **="" p="">< 0,01,="" ***="" p="">< 0,001.="" s4="" tabula="" —="" šūnu="" dzīvotspējas="" izmaiņu="" noteikšana="" mdck,="" kas="" inkubēts="" ar="" pieaugošu="" daudzumu="" hidrospirta="" ekstrakta="" no="" griķu="" makaroniem,="" rudzu="" makaroniem="" un="" olu="" makaroniem="" uz="" barotnes="" un="" mmpp="" 24="" stundas.="" *="" p="">< 0,5,="" **="" p="">< 0,01,="" ***="" p="">< 0,001.="" s1="" attēls:="" kaempferol="" ms="" spektri="" griķu="" vārītu="" makaronu="" hidroalkoholiskā="" ekstraktā.="" s2="" attēls:="" kvercetīna="" ms="" spektri="" griķu="" vārītos="" makaronu="" hidrospirta="" ekstraktā.="" s3="" attēls:="" rutīna="" ms="" spektri="" vārītā="" makaronu="" hidrospirta="" ekstraktā.="" s4="" attēls:="" ferulīnskābes="" ms="" spektri="" 1="" rudzu="" makaronu="" hidrospirta="" ekstraktā.="" s5="" attēls:="" apigenīna="" glikozīdu="" ms="" spektri="" olās="" vārītu="" makaronu="" hidrospirta="" ekstraktā.="" s6.="" attēls:="" hek-293="" šūnu="" dzīvotspējas="" noteikšana,="" kas="" inkubēta="" ar="" pieaugošu="" daudzumu="" indoletiķskābes,="" karotīna="" un="" kofeīnskābes="" 24="" (a)="" un="" 48="" (b)="" stundas.="" norādītās="" vērtības="" atbilst="" šūnu="" dzīvotspējas="" vidējai="" vērtībai="" ar="" standarta="" kļūdu="" vairāk="" nekā="" trīs="" bioloģiskos="" atkārtojumos.="" šūnu="" dzīvotspējas="" procentuālais="" daudzums="" tika="" aprēķināts,="" izmantojot="" attiecību="">

References

1. Lacatus,u, CM; Grigoresku, ED; Florija, M.; Onofriesku, A.; Mihai, BM Vidusjūras diēta: no vides vadītas pārtikas kultūras līdz jaunai ārsta receptei. Int. J. Vide. Res. Sabiedrības veselība 2019, 16, 942.

2. Džeikobs, DR; Gross, MD; Tapsell, LC Pārtikas sinerģija: darbības koncepcija uztura izpratnei. Am. Dž.Klins. Nutr.2009, 89, 1543S.

3. De Lodžerils, M.; Salēns, P.; Mārtiņš, J.‑L.; Monjaud, I.; Delaye, J.; Mamelle, N. Vidusjūras diēta, tradicionālie riska faktori un kardiovaskulāro komplikāciju biežums pēc miokarda infarkta. Tirāža 1999, 99, 779–785.

4. Psaltopulu, T.; Naska, A.; Orfanos, P.; Trichopoulos, D.; Mountokalakis, T.; Trichopoulou, A. Olīveļļa, Vidusjūras diēta un arteriālais asinsspiediens: Grieķijas Eiropas perspektīvā vēža un uztura izpēte (EPIC). Am. Dž.Klins. Nutr. 2004, 80, 1012–1018.

5. Estruhs, R.; Ross, E.; Salas-Salvad6, J.; Kovas, M.-I.; Korella, D.; Ar6s, F.; G6mez-Gracia, E.; Ruiss-Gutjeress, V.; Fiols, M.; Lapetra, J.; un citi. Primārā sirds un asinsvadu slimību profilakse ar Vidusjūras diētu. Z. Gefassmedizin 2013, 10, 28.

6. Ūsitūpa, M.; Khan, TA; Viguiliuuks, E.; Kahleova, H.; Rivellese, AA; Hermansens, K.; Feifers, A.; Tanopulu, A.; Salas- Salvad6, J.; Švābs, U.; un citi. 2. tipa diabēta profilakse, mainot dzīvesveidu: sistemātisks pārskats un metaanalīze. Uzturvielas 2019, 11, 2611.

7. Jannasch, F.; Krēgers, J.; Schulze, MB Uztura modeļi un 2. tipa diabēts: sistemātisks literatūras pārskats un perspektīvo pētījumu metaanalīze. J. Nutr. 2017, 147, 1174–1182.

8. Espozito, K.; Chiodini, P.; Maiorino, MI; Bellastella, G.; Panagiotakos, D.; Giugliano, D. Kura diēta 2. tipa diabēta profilaksei? Perspektīvo pētījumu metaanalīze. Endokrīnā 2014, 47, 107–116.

9. Huo, R.; Du, T.; Sju, Y.; Sju, V.; Čens, X.; Saule, K.; Yu, X. Vidusjūras stila diētas ietekme uz glikēmijas kontroli, svara zudumu un kardiovaskulāriem riska faktoriem 2. tipa diabēta indivīdu vidū: metaanalīze. Eiro. Dž.Klins. Nutr. 2015, 69, 1200–1208.

10. Martins-Peldess, S.; Fito, M.; Castaner, O. Vidusjūras diētas ietekme uz 2. tipa diabēta profilaksi, slimības progresēšanu un saistītiem mehānismiem. Recenzija. Uzturvielas 2020, 12, 2236.

11. Milajerdi, A.; Namazi, N.; Laridžani, B.; Azadbakht, L. Uztura kvalitātes indeksu un vēža mirstības asociācija: kohortas pētījumu sistemātisks pārskats un metaanalīze. Nutr. Vēzis 2018, 70, 1091–1105.

12. Švingšakls, L.; Švedhelms, C.; Gilberts, C.; Hoffmann, G. Vidusjūras diētas ievērošana un vēža risks: atjaunināts sistemātisks pārskats un metaanalīze. Uzturvielas 2017, 9, 1063.

13. Say6n-Orea, C.; Razquin, C.; Bull6, M.; Korella, D.; Fit6, M.; Romaguera, D.; Vioque, J.; Alonso-G6mezs, AM; Vērnbergs, J.; Martiness, JA; un citi. Uztura un uzvedības iejaukšanās ietekme uz samazinātu Vidusjūras reģiona diētas ievērošanu pacientiem ar metabolisko sindromu: PREDIMED-Plus randomizētā klīniskā pētījuma pagaidu analīze. JAMA J. Am. Med. Asoc. 2019, 322, 1486–1499.

14. Bajerska, J.; Chmurzinska, A.; Muzsiks, A.; Krzyz˙ anowska, P.; Ma˛dry, E.; Maļinovska, AM; Walkowiak, J. Svara zudums un vielmaiņas ietekme uz veselību, ko rada Vidusjūras un Centrāleiropas diētas ar ierobežotu enerģiju sievietēm pēcmenopauzes periodā: randomizēts kontrolēts pētījums. Sci. Rep. 2018, 8, 11170.

15. Estruhs, R.; Martiness-Gonzaless, MA; Korella, D.; Salas-Salvad6, J.; Fit6, M.; Čiva-Blanča, G.; Fiols, M.; G6mez-Gracia, E.; Ar6s, F.; Lapetra, J.; un citi. Vidusjūras reģiona diētas ar augstu tauku saturu ietekme uz ķermeņa svaru un vidukļa apkārtmēru: PREDIMED randomizētā kontrolētā pētījuma iepriekš noteikta sekundāro rezultātu analīze. Lancet Diabetes Endokrinols. 2019, 7, e6–e17.

16. Molendiiks, M.; Molero, P.; Ortunjo Sdnčes-Pedrenjo, F.; Van der Does, V.; Angel Martinez-Gonzalez, M. Diētas kvalitāte un depresijas risks: perspektīvo pētījumu sistemātisks pārskats un devas-atbildes metaanalīze. J. Afekts. Traucējumi. 2018., 226., 346.–354.

17. Vū, L.; Sun, D. Vidusjūras diētas ievērošana un kognitīvo traucējumu attīstības risks: atjaunināts sistemātisks pārskats un perspektīvo kohortas pētījumu metaanalīze. Sci. Rep. 2017, 7, 1.–9.

18. Loughrey, ĢD; Lavekija, S.; Brenans, S.; Lawlor, BA; Kelly, ME Vidusjūras diētas ietekme uz veselīgu vecāku pieaugušo kognitīvo darbību: sistemātisks pārskats un metaanalīze. Adv. Nutr. 2017, 8, 571–586.

19. Arnolds, SE; Arvanitakis, Z.; Makolija-Rambaha, SL; Kēnigs, AM; Vanga, HJ; Ahima, RS; Amatniecība, S.; Gandijs, S.; Būtners, C.; Stoeckel, LE; et a Smadzeņu insulīna rezistence 2. tipa diabēta un Alcheimera slimības gadījumā: jēdzieni un mīklas. Nat. Rev. Neirol. 2018, 14, 168–181.

20. Trichopoulou, A.; Vasilopoulou, E. Vidusjūras diēta un ilgmūžība. Br. J. Nutr. 2020, 84, S205–S209.