Cistanche Deserticola mehānisms, kas veicina zarnu darbību

Yuan Gao, Chuanjie Zong, Fen Liu, Lei Fang, Runlan Cai, Yue Shi, Xi Chen, Yun Qi

Abstrakts

Feniletanolīdsglikozīdi(PhG), polifenolu savienojumu klase, tiek uzskatīti par vienu no galvenajām bioaktīvajām sastāvdaļām.CistanchedeserticolaYC Ma (CD), kura ekstraktu iekšķīgi lieto tradicionālajā ķīniešu medicīnā. Lai gan iepriekšējie farmakoloģiskie pētījumi ir ziņojuši, ka PhG veic daudzas darbības, to zarnu transporta profili nav noskaidroti. Šajā pētījumā mēs pētījām ar PhG bagāta ekstrakta (PRE) zarnu caurlaidību noCistancheDeserticolakā integrēta sistēma Caco{0}} šūnu vienslāņu modelī, izmantojot bioloģiskās pārbaudes sistēmu. Rezultāti parādīja, ka PRE galvenokārt tiek transportēts ar vāji absorbētu pasīvo difūziju lejup pa koncentrācijas gradientu bez izplūdes, kas nodrošina farmakokinētisko pamatu PhG klīniskai lietošanai.Cistanche Deserticola. Mēs arī noteicām trīs galveno zarnu caurlaidībuPhGs[akteozīds (AC), izoakteozīds (IS) un ehinakozīds (EC)]ar HLPC. Turklāt mēs izstrādājām jaunu HPLC-fluorescences noteikšanas metodi, lai precīzi noteiktu maiņstrāvas un IS plūsmas daudzumu. Kā gaidīts, transporta īpašības trīsPhGssaskan ar PRE, norādot, ka pašreizējā biotestu sistēma ir piemērota un uzticama aktīvo sastāvdaļu grupu (AIG) transportēšanas īpašību novērtēšanai PRE. Turklāt šī sistēma var būt piemērota arī citiem augu ekstraktiem ar atbilstošu bioaktivitāti.

Kontaktpersona:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche deserticola ir daudz efektu, noklikšķiniet šeit, lai uzzinātu vairāk

Ievads

Caco{0}} šūnu līnijai, kas iegūta no cilvēka resnās zarnas adenokarcinomām, piemīt enterocītiem līdzīgas īpašības. Normālos apstākļos Caco-2 šūnas spontāni diferencējas no nobriedušām šūnām un veido neskartus vienslāņus [1]. Blakus esošās šūnas pielīp, izmantojot ciešus savienojumus, kas izveidoti monoslāņa apikālajā pusē, kas var atšķirt pasīvi un aktīvi transportētās zāles pa epitēlija slāni [2]. Tā kā Caco-2 šūnu monoslāņi ir morfoloģiskās un bioķīmiskās līdzības ar normāliem enterocītiem, tas kalpo kā labi pieņemts in vitro modelis zāļu absorbcijas potenciāla un transportēšanas īpašību izpētei zarnās [3, 4].

Pretstatā ķīmiskajām vielām augu ekstrakti (PE) ir maisījumi, kuru bioloģiskā aktivitāte un aktīvās sastāvdaļas bieži vien nav labi identificētas [5]. Turklāt PE zarnu transporta īpašības, atšķirībā no tā sastāvdaļu īpašībām, ir cieši saistītas ar klīnisko lietošanu. Caco{1}} šūnu monoslāņa testa parauga plūsmas mērījumi parasti ietver ķīmiskas metodes, piemēram, HPLC, LC/MS utt. Lai gan šīs metodes ir spēcīgi rīki, tās ir sarežģītas, laikietilpīgas, dārgas un dažkārt. nepieciešamas sarežģītas iekārtas. Vēl svarīgāk ir tas, ka ne viens, ne mazākuma komponents nevar atspoguļot PE kopumā. Tādējādi ir jāizveido jauna pieeja, kas nav atkarīga no sastāvdaļu noteikšanas, lai identificētu un novērtētu PE transportēšanas īpašības.

CistanchedeserticolaYC Ma (CD), holoparazītu augs, ir izplatīta tradicionālā ķīniešu medicīna, ko galvenokārt izmanto nieru mazspējas, ķermeņa vājuma un aizcietējumu ārstēšanai, un šie lietojumi ir oficiāli reģistrēti Ķīnas farmakopejā [6]. Feniletanoīdu glikozīdi (PhG), tostarp ehinakozīds (EC), akteozīds (AC), izoakteozīds (IS) utt., ir polifenolu savienojumu klase [7]. Tās tiek uzskatītas par vienu no galvenajām bioaktīvajām sastāvdaļāmCistanchesugas [8]. Farmakoloģiskie pētījumi ir parādījuši, ka bioaktivitātePhGsir daudzveidīga un ietver antioksidantu [9], pretnoguruma [10], hepatoprotektīvu [11], imūnmodulējošu [12], pretiekaisuma [7, 13] un neiroprotektīvu iedarbību [14]. Tomēr zarnu transporta īpašībasPhGsnav izmeklēti. Šajā pētījumā mēs pētījām ar PhG bagātu ekstraktu (PRE) no CD kā integrētas sistēmas zarnu caurlaidību un trīs galveno PhG (AC, IS un EC) caurlaidību diferencētās Caco{1}} šūnās. Mūsu rezultāti liecināja, ka PRE galvenokārt tiek transportēts ar slikti absorbētu pasīvo difūziju pa koncentrācijas gradientu bez izplūdes, kas nodrošina farmakokinētisko pamatu PhG klīniskai lietošanai CD.

Materiāli un metodes

Materiāli

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS and EC (>98 procenti ) tika iegādāti no Must Biotechnology Co. (Čendu, Ķīna). Dulbecco modificēto Ērgļa barotni (DMEM), liellopu augļa serumu (FBS) un neaizvietojamās aminoskābes (NEAA) ražoja Gibco BRL (Grand Island, NY, ASV). 6-Akas TranswellTM plāksnes (ieliktņa membrānas augšanas laukums 4,67 cm2) tika iegūtas no Corning (Costar) Inc. (Tewksbury, MA, ASV). Žurkas astes kolagēns tika iegūts no Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, ASV). Visi reaģenti un ķīmiskās vielas HPLC analīzei bija analītiskas kvalitātes.

PRE sagatavošana no Cistanche deserticola

Gaisa žāvētais CD materiāls tika sasmalcināts pulverī un ekstrahēts, perkolējot ar 70% etanolu. PhG bagātā frakcija tika sagatavota, kā aprakstīts iepriekš [10], un ekstrahēta ar ūdeni piesātinātu n-butilspirtu. Ekstrakta šķidrums tika koncentrēts un žāvēts pazeminātā spiedienā. Makroporaino sveķu-UV spektrofotometrija [15] noteica PhG saturu 78,4% apmērā. Galīgais paraugs pārstāvēja 1,75 procentus izejvielas pēc sausnas svara. Iegūtais paraugs tika uzglabāts -20 grādu temperatūrā līdz turpmākai lietošanai.

AC, IS un EC noteikšana ar HPLC

Shimadzu HPLC sistēma, kas aprīkota ar LC risinājuma programmatūru, tika izmantota, lai pārbaudītu AC, IS un EC saturu PRE. Tika izmantota apgrieztās fāzes Intersil C18 kolonna (4,6 mm × 25{6}} mm, 5 μm), kas tika uzturēta istabas temperatūrā. Kustīgās fāzes bija acetonitrils un ūdens, kas satur 0,1% fosforskābes (v/v) ar gradienta eluēšanu (1. tabula) ar plūsmas ātrumu 1,0 ml/min. UV spektrofotometra detektors tika iestatīts uz 334 nm. Lai precīzi noteiktu maiņstrāvas un IS plūsmu, mēs izstrādājām jaunu HPLC-fluorescences noteikšanas (HPLC-FLD) metodi. Pēc strukturālās analīzes un fluorescences viļņa garuma skenēšanas (dati nav parādīti), mēs ieguvām optimālos fluorescences noteikšanas apstākļus maiņstrāvai (piemēram, 338 nm, Em: 448 nm) un IS (piemēram, 320 nm, Em: 434 nm)

HPLC analītiskā metode tika apstiprināta, izmantojot šādus veiktspējas raksturlielumus: stabilitāte, linearitāte, jutība, precizitāte (mainība dienas laikā un starplaikā) un precizitāte. Transportēšanas buferšķīdumā esošās analizējamās vielas tika uzglabātas 25 grādu temperatūrā tumsā 24 stundas, un tika mērīta to stabilitāte. Analīti C vitamīna klātbūtnē bija ļoti stabili (0,4 procenti), jo relatīvās standarta novirzes (RSD) vērtības pīķu zonās bija < 3,5="" procenti.="" lineārās="" regresijas="" vienādojums,="" korelācijas="" koeficients,="" linearitātes="" diapazons,="" lod="" un="" loq="" ac,="" is="" un="" ec="" ir="" parādīti="" 2.="" tabulā.="" lod="" (18–30="" nm)="" un="" loq="" (60–100="" nm)="" vērtības="" parāda,="" ka="" hplc-fld="" un="" hplc-uv="" metodes="" ir="" ļoti="" jutīgas.="" visas="" rsd="" vērtības,="" kas="" izsaka="" metodes="" precizitāti,="" bija="">< 2="" procenti="" dienas="" un="" starpdienu="" mainīgumam,="" kas="" liecina="" par="" labu="" precizitāti.="" reģenerācijas="" novērtēšanai="" transporta="" buferim="" tika="" pievienots="" ac,="" is="" un="" ec,="" lai="" iegūtu="" trīs="" (augstu,="" vidēju="" un="" zemu)="" koncentrācijas="" līmeņus.="" metodes="" atgūstamības="" vērtības="" attiecībā="" uz="" analītiem="" ir="" apkopotas="" 3.="" tabulā.="" vidējā="" atgūstamība="" svārstījās="" no="" 90,0="" procentiem="" līdz="" 96,4="" procentiem,="" kas="" liecina="" par="" labu="" precizitāti.="" noslēgumā="" jāsaka,="" ka="" izveidotās="" hplc="" metodes="" ir="" apmierinošas="" attiecībā="" uz="" linearitāti,="" jutību,="" precizitāti="" un="" precizitāti="" ac,="" is="" un="" ec="" kvantitatīvai="" noteikšanai="" transporta="">

PRE noteikšana ar biotestu sistēmu

Biotests (kopējā antioksidanta spēja) balstījās uz FRAP (dzelzs reducējošās/antioksidanta jaudas) testu, ko mēs iepriekš aprakstījām [16] un apstiprinājām linearitātes un precizitātes ziņā (mainība dienas laikā un starplaikā). Bioloģiskās pārbaudes metodes linearitāte tika noteikta, pamatojoties uz kalibrēšanas līknēm. Linearitātes koncentrācijas diapazons bija 0.0625 − 40 ug/ml (y=0.0258x plus 0.0968, R2=0.996). Izveidotās bioloģiskās analīzes metodes precizitāte tika noteikta, ņemot vērā mainīgumu dienas laikā un starp dienu PRE analīzei (10,0 ug/ml). Metodes atkārtojamība dienas laikā tika noteikta, pamatojoties uz piecām secīgām noteikšanām tajā pašā dienā. Starpdienu atkārtojamība tika mērīta, pamatojoties uz piecām secīgām noteikšanām trīs dažādās dienās. RSD vērtības metodes precizitātei bija attiecīgi 1,014 procenti un 4,72 procenti dienas un starpdienu mainīgumam, kas norāda uz labu precizitāti. Tādējādi izveidotā biotesta metode ir apmierinoša attiecībā uz linearitāti, precizitāti un precizitāti PRE kvantitatīvai noteikšanai transporta buferšķīdumā.

Šūnu kultūra

Caco{{0}} šūnas tika kultivētas 37 grādu temperatūrā un 95% relatīvā mitruma atmosfērā, kas satur 5% CO2 un barotni, kas sastāvēja no DMEM, 10% FBS, 1% NEAA, 1% L-glutamīna, penicilīna ( 100 V/ml) ​​un streptomicīnu (100 ug/ml). Barotne tika mainīta katru otro dienu šūnu augšanas un diferenciācijas laikā. Šūnas tika audzētas 75-cm2 plastmasas kolbās un savāktas ik pēc 3–5 dienām ar 0,05 procentiem EDTA-tripsīna. Transporta eksperimentiem šūnas tika iesētas ar blīvumu 1 × 105 šūnas / cm2 uz Transwell ieliktņiem, kas pārklāti ar kolagēnu. Aptuveni 21 dienu pēc sēšanas vienslāņi tika izmantoti transportēšanas eksperimentiem. To integritāte tika noteikta, mērot trans-epitēlija elektrisko pretestību (TEER) pāri monoslāņiem ar EVOM, kas aprīkots ar ENDOHM-SNAP (World Precision Instruments, Inc., ASV). Caco-2 šūnu monoslāņa TEER vērtībām bija jāpārsniedz 500 O∙cm2.

Transporta eksperimenti

Vienslānis tika mazgāts ar transportēšanas buferšķīdumu (P-buferis, kas satur 10 mM HEPES, 1 mM nātrija piruvātu, 10 mM glikozes, 3 mM CaCl2 un 145 mM NaCl, pH 7,4) un pēc tam iepriekš inkubēja 20 minūtes plkst. 37 grādi. Pēc transportēšanas bufera noņemšanas svaigu transportēšanas buferšķīdumu, kas satur testa paraugus, pievienoja apikālajai (AP) kamerai (1, 5 ml) AP, lai veiktu bazolaterālo (BL) virziena pētījumus, vai BL kamerā (2, 5 ml) BL uz AP virziena pētījumiem. Maiņstrāvas, IS un EK testiem, izmantojot HPLC, no katras uztvērēja kameras ar dažādiem laika intervāliem (30, 60, 90 un 120 min) tika izņemta alikvota daļa (300 ul). Pēc katras parauga ņemšanas uztvērēja kamera tika papildināta ar tādu pašu daudzumu svaiga iepriekš uzkarsēta (37 grādi) transportēšanas buferšķīduma. Savāktie paraugi tika uzglabāti -20 grādu temperatūrā turpmākai lietošanai. PRE noteikšanai, izmantojot biotestu, tika ņemti tikai paraugi 120 minūtēs. PRE, AC, IS un EC nestabilitātes dēļ paraugu stabilizēšanai tika pievienoti 0,4% (w/v) C vitamīna, lai ar HPLC noteiktu AC, IS un EC saturu, un paraugus PRE. biotesti tika pārbaudīti tūlīt pēc paraugu ņemšanas. Tika aprēķināta katra parauga šķietamā caurlaidības koeficienta (Papp vai 'Papp) vērtība.

Datu analīze

Papp vērtības AC, IS un EC virzienos AP BL vai BLAP tika aprēķinātas, pamatojoties uz šādu vienādojumu: Papp {{0}} (4Q/4t)/(AC0), kur Papp ir šķietamais caurlaidības koeficients (cm/s), kas noteikts ar HPLC. (4Q/4t) ir testa savienojuma (AC, IS vai EC) parādīšanās ātrums uztvērēja pusē (μmol/s); A ir ieliktņa virsmas laukums (cm2 ); C0 ir sākotnējā testa savienojuma koncentrācija donora pusē (μmol/ml). Konkrēti, aprēķinot Papp vērtības, tika izmantota masas vienība "ug", nevis "μmol". Dati ir izteikti kā vidējie ± SD.

Rezultāti

Akteozīda, izoakteozīda un ehinakozīda sastāvs PRE no Cistanche Deserticola

Tā kā AC, IS un EC tiek uzskatīti par galvenajiem Cistanche sugu bioaktīvajiem PhG [8], mēs analizējām to saturu PRE, izmantojot HPLC-UV. Reprezentatīvā hromatogramma ir parādīta 1. attēlā. Šo sastāvdaļu identifikācija tika balstīta uz aiztures laiku un UV spektra salīdzināšanu ar autentiskajiem standartiem pie viļņa garuma 334 nm. AC, IS un EC saturs PRE bija attiecīgi 26,60 procenti, 1,84 procenti un 32,83 procenti. Tādējādi šie trīs savienojumi veido 61,27 procentus no PRE; turklāt iepriekš minētie rezultāti liecina, ka PhG saturs PRE ir 78,4 procenti. Tāpēc AC, IS un EC veido aptuveni 80 procentus no PRE PhG.

PRE, AC, IS un EC kopējās antioksidācijas spējas

Ir ziņots par CD PhG antioksidatīvās aktivitātes pētījumiem [9], un AC, IS un EC veido aptuveni 80 procentus no PRE PhG. Tādējādi tika pārbaudītas PRE, AC, IS un EC kopējās antioksidācijas spējas, un tās ir izteiktas, izmantojot FRAP vērtības (× 10–6 mmol). Kā parādīts 2. attēlā, kad FRAP vērtība bija 8 × 10–6 mmol, PRE, AC, IS un EC galīgās koncentrācijas bija 6,20 ug/ml, 3,14 ug/ml, 22,92 ug/ml un 4,89 ug/ml. ml, attiecīgi norādot, ka šo četru paraugu kopējā antioksidācijas spēja bija šāda: AC > EC > PRE > IS. PRE bioaktivitāte ir saistīta ar tā aktīvo sastāvdaļu grupām (AIG). Apmēram 60 procentiem PRE AC un EC uzrādīja spēcīgāku kopējo antioksidatīvo aktivitāti nekā PRE un IS. Tā kā IS (1,84 procenti) veido ļoti nelielu PRE daļu, citi komponenti, piemēram, vāji antioksidatīvais IS, arī nepārprotami ir aktīvi PRE. Pārsteidzoši, ka kopējā antioksidatīvā aktivitāte starp AC un tā izomēru IS atšķīrās gandrīz 7-kārtīgi, norādot ne tikai fenola hidroksilgrupu skaitu [9], bet arī fenola hidroksilgrupu atrašanās vietu molekulā, kas ietekmēja anti. - oksidatīvā iedarbība.

Caco-2 monoslāņu validācija

Lai apstiprinātu Caco-2 šūnu vienslāņu sistēmu, propranolola (labi trans portētais marķieris) un Lucifera dzeltenā (slikti transportēta marķiera) Papp vērtības no AP uz BL pāri Caco-2 monoslāņiem. tika noteiktas attiecīgi kā 1, 51 × 10–5 cm / s un 2, 8 × 10–7 cm / s, un šīs vērtības sakrita ar tām, kas publicētas iepriekšējos ziņojumos [17, 18]. Sārmainās fosfatāzes aktivitātes tests arī apstiprināja, ka Caco-2 šūnu monoslāņi bija kvalitatīvi salīdzināmi ar tievās zarnas epitēliju [19]

Akteozīda, izoakteozīda un ehinakozīda caurlaidība

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.0 × 10–5 cm/s), turpretim slikti uzsūcas medikamentu rādītāji bija zemi (< 1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3].="" as="" shown="" in="" table="" 4,="" the="" papp="" values="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" nearly="" on="" the="" order="" of="" 10–7="" cm/s,="" indicating="" that="" these="" compounds="" were="" poorly="" permeable.="" furthermore,="" efflux="" or="" active="" transport="" were="" not="" observed="" because="" the="" ratios="" of="" papp="" bl="" to="" ap="" papp="" ap="" to="" bl="" for="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" between="" 0.90="" ~="" 1.55,="" and="" the="" criterion="" of="" net="" efflux="" proposed="" by="" the="" fda="" guidance="" is="" a="" ratio="" less="" than="" 2="" [20].="" based="" on="" the="" kinetic="" curves="" presented="" in="" fig.="" 3,="" the="" bidirectional="" transport="" percentages="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" at="" 200="" μm="" increased="" linearly="" with="" time.="" the="" transport="" rate="" (tr)="" values="" of="" the="" three="" compounds="" increased="" linearly="" in="" both="" directions="" between="" approximately="" 100="" and="" 300="" μm="" (fig.="" 4).="" these="" results="" indicate="" that="" the="" main="" transport="" mechanism="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" is="" also="" passive="">

PRE caurlaidība

Iepriekš minētie rezultāti liecina, ka PRE kopējā antioksidanta spēja ir saistīta vismaz ar 61,27 procentiem AIG no PRE. Tādējādi mēs novērtējām PRE TR, pamatojoties uz tā kopējās antioksidanta spējas koncentrācijas un iedarbības līkni, un aprēķinājām Papp vērtības, lai atspoguļotu PRE transporta īpašības. AP!BL un BL!AP PRE PAPP vērtības bija (2,16 ± 0,26) × 10–7 cm/s un (3,13 ± 0,29) × 10–7 cm/ s, attiecīgi norādot, ka šis savienojums bija slikti caurlaidīgs. Turklāt izplūde vai aktīvā transportēšana nebija acīmredzama, jo “Papp BL pret AP / “Papp AP pret BL attiecība pret PRE bija 1,45 [20]. Turklāt PRE divvirzienu TR lineāri palielinājās no aptuveni 300 līdz 900 ug/ml (5. att.). Rezultātu virziena izvēles trūkums liecina, ka pasīvā difūzija ir galvenais PRE transporta mehānisms.

Diskusija

Salīdzinot ar augsti attīrītiem medikamentiem, PE parasti ir maisījums, kas sastāv no simtiem sastāvdaļu ar ļoti atšķirīgām fizikāli ķīmiskajām īpašībām. Tāpēc PE rada sistemātisku, daudzmērķu un daudzkanālu sinerģisku darbību to sarežģītā AIG [21] dēļ, kas kavē PE transporta raksturlielumu analīzi. Lai zinātniskāk novērtētu PE transportēšanas īpašības, daži pētnieki PE ir identificējuši vairākus komponentus, nevis vienu komponentu [22–24]. Tomēr ierobežots skaits sastāvdaļu nevar atspoguļot PE kopumā. Tomēr visu PE komponentu noteikšana nav iespējama. Turklāt, ja dažādiem PE komponentiem ir pilnīgi atšķirīgas transporta īpašības, PE holistiskās transporta īpašības būs grūti noteikt.

Deviņdesmitajos gados tika izmantotas biotestu sistēmas, lai novērtētu pretmikrobu līdzekļu TR [25]. Līdz 2005. gadam Eguči un viņa kolēģi [26] bija novērtējuši burkānu ekstrakta antioksidatīvo aktivitāti, izmantojot BL barotnes no diferencētām Caco-2 šūnām; šī pieeja ir piemērotāka, lai atspoguļotu in vivo situācijas.

Pamatojoties uz iepriekšējo ziņojumu par PhG aktivitāti [9] un mūsu rezultātiem (2. att.), AIG TR PRE var novērtēt, nosakot barotnes kopējo antioksidācijas spēju uztvērēja kamerā. Pēc transportēšanas eksperimentiem mēs atklājām, ka PRE TR bija līdzīgs abos virzienos, un šis transports bija nepiesātināts un slikti absorbēts ('Papp < ​​1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3]="" un="" tas="" neliecināja="" par="" izplūdi,="" kas="" liecina,="" ka="" pasīvā="" difūzija="" lejup="" pa="" koncentrācijas="" gradientu="" ir="" galvenais="" pre="" transportēšanas="" mehānisms="" (5.="" att.).="" turklāt="" pre="" transporta="" raksturlielumi="" atbilst="" ac,="" is="" un="" ec,="" efektīvo="" komponentu,="" kam="" piemīt="" antioksidatīva="" aktivitāte="" pre,="" transportēšanas="" īpašībām="" (4.="" attēls="" un="" 4.="" tabula).="" šis="" rezultāts="" bija="" sagaidāms="" un="" norādīja,="" ka="" pašreizējā="" biotestu="" sistēma="" ir="" piemērota="" un="" uzticama,="" lai="" novērtētu="" aig="" transportēšanas="" īpašības="" pre="" diferencētās="" caco{11}}="">

Atšķirībā no kanoniskās Papp vērtības, ko parasti izmanto, lai atspoguļotu viena savienojuma transportēšanu, 'Papp vērtība, kas iegūta no TR, pamatojoties uz koncentrācijas-efekta līkni, var ne tikai atspoguļot sastāvdaļas, kas iekļūst monoslāņos ar neskartu struktūru, bet ietver arī citus faktorus, kas saistīti ar mērķa aktivitāti, piemēram, komponentu metabolītus, ķīmiski noārdītus produktus un pat dažus citokīnus, kas izdalīti no Caco-2 šūnām, reaģējot uz stimulāciju, kas var ietekmēt mērķa bioaktivitāti. Tādējādi iepriekš minētais daudzfaktors, nevis tikai transportētie neskartie komponenti, nosaka Papp vērtību. Tāpēc “Papp var spēcīgāk korelēt Vivo situācijās nekā kanoniskā Papp vērtība [26]. Šajā pētījumā mēs noskaidrojām PRE pasīvi izkliedēto un slikti absorbēto raksturu, pamatojoties uz tā “Papp vērtību”, un šis raksturs var būt saistīts ar CD lielo devu un ilgu klīniskās ārstēšanas periodu [27]. Tomēr šie atklājumi sniegs sistemātiskākus norādījumus klīnicistiem CD pielietošanā, ja ir identificētas tikai vairuma AIG CD transportēšanas īpašības, ne tikai PhG.

Tomēr atlasītajam bioaktivitātes vienumam jābūt pietiekami jutīgam, lai to varētu noteikt uztvērēja kameras vidē, kas rada izaicinājumu biotestu sistēmas izveidei, lai novērtētu PE transportēšanas īpašības. Turklāt bioaktivitātei jābūt atkarīgai arī no pēc iespējas vairāk komponentu. Mūsu pētījumā kopējās antioksidācijas spējas tests bija piemērotāks nekā vairākas citas metodes (S1 attēls). Bet pat tādā gadījumā mūsu tests var noteikt PRE TR tikai pēc 120 minūtēm.

Kopumā šajā pētījumā tika izveidota jauna biotestu sistēma, lai novērtētu PRE zarnu caurlaidību diferencētās Caco{0}} šūnās. Iegūtie rezultāti parādīja, ka slikti absorbēta pasīvā difūzija lejup pa koncentrācijas gradientu bez izplūdes ir galvenais PRE transportēšanas mehānisms (5. att.), kas nodrošina farmakokinētisko pamatu PhG klīniskai lietošanai CD. Ir nepārprotami iespējams izmantot jaunu biotestu sistēmu, lai novērtētu TR un tādējādi aprēķinātu “Papp vērtības, lai novērtētu AIG zarnu transportēšanas īpašību PE. Šī pieeja var būt piemērota arī citam PE ar atbilstošu bioaktivitāti

Atbalsta informācija

S1 attēls. PRE ietekme uz (A) superoksīda anjonu, (B) hidroksilradikāli, (C) lipīdu peroksidācijas produktu un (D) DPPH radikāli. Testa procedūras tika veiktas saskaņā ar iepriekšējiem ziņojumiem [1, 2], neizmantojot transportēšanas buferi. IC50 (50 procentu inhibīcijas koncentrācija) un SC50 (50 procentu attīrīšanas koncentrācija) vērtības tika aprēķinātas, pamatojoties uz standarta koncentrācijas-atbildes līknēm. (DOCX)

Autoru ieguldījums

Izgudroja un izstrādāja eksperimentus: YG XC YQ. Eksperimentus veica: YG CZ FL LF RC YS. Analizētie dati: CZ YG YQ. Pievienotie reaģenti/materiāli/analīzes rīki: RC. Uzrakstīja darbu: YG YQ

Farmakoloģijas un toksikoloģijas pētniecības centra departaments, Ķīnas Medicīnas zinātņu akadēmijas Ārstniecības augu attīstības institūts un Pekinas Savienības Medicīnas koledža, Pekina, Ķīnas PR,

Heilundzjanas Ķīniešu medicīnas universitāte, Harbina, Heilundzjana, Ķīna