RNA M6 A lasītājs YTHDF2 kontrolē NK šūnu pretaudzēju un pretvīrusu imunitāti, 2. daļa

YTHDF2 ir nepieciešams NK šūnu pretvīrusu funkcijai

Lai noteiktu, vai Ythdf2 deficīts ietekmē NK šūnu pretvīrusu aktivitāti, mēs injicējām 2, 5 × 104 PFU MCMV Ythdf2WT pelēm un Ythdf2ΔNK pelēm.

Pretvīrusu darbība un imunitāte ir nedalāmas, un tām ir ciešas attiecības. Vīrusi ir ļoti mazi mikroorganismi, taču smagos gadījumos tie var izraisīt daudzas slimības un pat nāvi.

Pretvīrusu darbība attiecas uz ķermeņa spēju cīnīties ar vīrusiem. Cilvēki ar augstu pretvīrusu aktivitātes līmeni var ātrāk iztīrīt vīrusus un efektīvāk pretoties slimības sākumam. Imunitāte attiecas uz aizsargājošām vielām, ko organisms ražo pēc adaptācijas perioda, kas var izvadīt no organisma kaitīgās vielas.

Lai saglabātu labu veselību, ir ārkārtīgi svarīgi pietiekami gulēt, ēst veselīgu uzturu un vingrot. Šie faktori var uzlabot cilvēka imunitāti un tādējādi pastiprināt organisma pretvīrusu aktivitāti. Īpaši šajā COVID{0}} pandēmijas laikā ir svarīgi saglabāt veselību.

Turklāt stabils garastāvoklis lieliski ietekmē arī imunitāti. Optimistiska attieksme var likt cilvēkiem justies fiziski un garīgi komfortabli, tādējādi uzlabojot imunitāti un pretvīrusu aktivitāti. Gluži pretēji, pesimistiskas emocijas mazinās organisma imunitāti un padarīs organismu neaizsargātāku pret vīrusu uzbrukumiem.

Īsāk sakot, pretvīrusu aktivitāte un imunitāte ir savstarpēji saistītas, un mums vajadzētu pievērst uzmanību organisma imunitātes un pretvīrusu aktivitātes uzlabošanai dažādos veidos, lai nodrošinātu fizisko veselību un veselīgu dzīvesveidu. Var redzēt, ka mums ir jāuzlabo atmiņa, un Cistanche deserticola var ievērojami uzlabot atmiņu, jo Cistanche deserticola piemīt antioksidanta, pretiekaisuma un pretnovecošanās iedarbība, kas var palīdzēt samazināt oksidācijas un iekaisuma reakcijas smadzenēs, tādējādi aizsargājot nervu sistēmas veselība. Turklāt Cistanche deserticola var arī veicināt nervu šūnu augšanu un atjaunošanos, tādējādi uzlabojot neironu tīklu savienojamību un darbību. Šie efekti var palīdzēt uzlabot atmiņu, mācīšanos un domāšanas ātrumu, kā arī var novērst kognitīvo disfunkciju un neirodeģeneratīvo slimību attīstību.

Noklikšķiniet uz zināt papildinājumus, lai uzlabotu atmiņu

Rezultāti parādīja, ka Ythdf2ΔNK peles bija jutīgākas pret MCMV infekciju, par ko liecina ievērojams svara zudums un paaugstināts vīrusu titri asinīs, liesā un aknās, salīdzinot ar Ythdf2WT pelēm (3., A un B att.; un S2, A un B att.). .

Mēs arī novērojām ievērojamu kopējo NKšūnu procentuālā un absolūtā skaita samazināšanos Ythdf2ΔNK peles liesā un asinīs, salīdzinot ar Ythdf2WT pelēm pēc inficēšanās (3. att., C un D; un S2, C un D att.). Papildu analīze parādīja, ka NK šūnām no Ythdf2ΔNK pelēm bija ievērojami zemāka Ki67 ekspresija nekā Ythdf2WT pelēm (3. att., E–G).

Tomēr NK šūnu dzīvotspēja bija līdzīga starp Ythdf2WT pelēm un Ythdf2ΔNK pelēm, kā parādīts aneksīna V iekrāsošanā (S2 E att.). Šie dati liecina, ka YTHDF2 deficīts NK šūnās izraisa šūnu proliferācijas defektu, nevis šūnu izdzīvošanu vīrusu infekcijas laikā.

NKšūnas inhibē MCMV infekciju caur aktivējošiem receptoriemLy49H un Ly49D, un procesu raksturo perforīna vai IFN mediēta pretvīrusu reakcija (Arase et al., 2002; Lee et al., 2009; Loh et al., 2005; Orr et al. al., 2010; Sumaria et al., 2009). Mēs noskaidrojām, ka Ythdf2ΔNK pelēm pēc inficēšanās bija ievērojami samazināts Ly49H + un Ly49D + NK šūnu skaits liesā un asinīs, salīdzinot ar Ythdf2WT pelēm (3. att., H–J; un S2 att., F–K).

Papildu analīze parādīja, ka, lai gan procentos tikai Ly49D+Ly49H+ šūnas uzrādīja atšķirību Ythdf2ΔNK pelēm salīdzinājumā ar Ythdf2WT pelēm, Ly49D−Ly49H+ NK šūnu, Ly49D+Ly49H−NK šūnu un Ly49D+Ly49H+ NK šūnu un Ly49H+ Ly49H+ šūnu skaits. liesa un asinis bija ievērojami samazināts Ythdf2ΔNK pelēm, salīdzinot ar Ythdf2WTmice pēc inficēšanās (S2 att., L-W).

Mūsu dati liecina, ka MCMV infekcijas kontrole ar YTHDF2, šķiet, galvenokārt ir saistīta ar Ly49D + Ly49H + NK šūnām. Granzīms B un IFN-produkcija ar NK šūnām Ythdf2ΔNK pelēm bija salīdzināma ar Ythdf2WT pelēm (S2, X un Y att.).

Mēs atklājām ievērojami samazinātu perforīna ražošanu Ythdf2ΔNK pelēm, salīdzinot ar Ythdf2WT pelēm, gan liesā, gan asinīs 7 dienas pēc inficēšanās (3. att., K–M), kas norāda, ka YTHDF2 galvenokārt ietekmē sperforīna mediēto pretvīrusu aktivitāti pret MCMV NK šūnās. Šie dati. liecina, ka YTHDF2 ir būtiska NK šūnu paplašināšanai un efektora funkcijai MCMV infekcijas laikā.

YTHDF2 kontrolē NK šūnu homeostāzi un terminālu nobriešanu līdzsvara stāvoklī

Iepriekš minētie atklājumi, ka Ythdf2 deficīts NK šūnās pastiprināja audzēja metastāzes un traucēja NK šūnu spēju kontrolēt MCMV infekciju, mudināja mūs izpētīt, vai YTHDF2 ir nepieciešams NK šūnu uzturēšanai līdzsvara stāvoklī.

Kā parādīts attēlā.

Tomēr BM (Fathman et al., 2011) starp Ythdf2WT un Ythdf2ΔNK pelēm nebija būtisku izmaiņu starp parasto limfoīdo priekšteču, pirms NK šūnu priekšteci un rafinētu NK šūnu priekšteci (NKP), kas liecina, ka S3 A ​​attēls. YTHDF2 var neietekmēt NK šūnu agrīnu attīstību mūsu modelī. Lai izpētītu iespējamos mehānismus, kas ir atbildīgi par NK šūnu samazināšanos Ythdf2ΔNK pelēm, mēs pētījām šūnu proliferāciju, dzīvotspēju un NK šūnu tirdzniecības spēju pēc Ythdf2 dzēšanas līdzsvara stāvoklī.

Proliferating NK šūnu procentuālais daudzums bija salīdzināms starp Ythdf2WT un Ythdf2ΔNK pelēm, par ko liecina Ki67 krāsošana (S3 B att.). NKcells dzīvotspēja bija arī līdzvērtīga starp Ythdf2WT un Ythdf2ΔNK pelēm, kā parādīts ar aneksīna V krāsošanu (att. S3 C).

Lai pārbaudītu, vai YTHDF2 ietekmē NK šūnu izkļūšanu no BM uz perifēriju, Ythdf2WT un Ythdf2ΔNK pelēm iv injicēja antiCD45 antivielu, lai iezīmētu imūnās šūnas, un pēc 2 minūtēm tika iznīcinātas, un tika analizētas to BM šūnas. Tas ļāva mums kvantitatīvi noteikt NK šūnu skaitu BM sinusoidālajos un parenhimālajos reģionos, kas ir indikators NK šūnu pārvietošanai no KM uz perifērajām asinīm līdzsvara stāvoklī (Leong et al., 2015).

Rezultāti liecināja par būtisku CD45+ NK šūnu biežuma samazināšanos Ythdf2ΔNK pelēm, salīdzinot ar Ythdf2WT pelēm sinusoīdos (4. B ​​att.), norādot, ka Ythdf2 deficīts kavē NK šūnu izkļūšanu no BM uz asinsrites sistēmu in vivo. .Imūnās šūnas tiek pakļautas homeostatiskai proliferācijai limfopēnijas laikā, ko izraisa noteiktas vīrusu infekcijas vai ko izraisa ķīmijterapija (Sun et al., 2011).

Lai gan mēs atklājām, ka YTHDF2 nav nepieciešams NK šūnu proliferācijai līdzsvara stāvoklī, mēs novērojām ievērojamu šūnu proliferācijas samazināšanos MCMV infekcijas laikā (3. att., E-G). Tāpēc mēs pētījām YTHDF2 lomu NK šūnu homeostatiskās proliferācijas regulēšanā limfopēniskā vidē in vivo. Mēs līdzpārnesām vienādu skaitu liesas NK šūnu no CD45.2 Ythdf2ΔNK pelēm vai CD45.1 kongēnām pelēm uz Rag2−/−Il2rg−/− pelēm ar limfocītu deficītu.

Rezultāti parādīja, ka lielāka NK šūnu daļa tika iegūta no CD45.1WT kontroles pelēm nekā no CD45.2 Ythdf2ΔNK pelēm 3. dienā pēc šūnu nodošanas (att. S3 D). Papildu analīze parādīja, ka NK šūnu samazināšanās no Ythdf2ΔNK pelēm bija saistīta ar traucētu šūnu proliferāciju (S3 att. E), bet ne šūnu apoptozi (S3 F att.), kas liecina, ka YTHDF2 virza NK šūnu homeostatisko proliferāciju in vivo limfopēnijas apstākļos.

Tālāku peles NK šūnu diferenciāciju var iedalīt nenobriedušā (CD11b-CD27+), vidēji nobriedušā (CD11b+CD27+) un galīgajā nobriedušajā (CD11b+CD27−) stadijā, pamatojoties uz CD11b un CD27 līmeni ( Chiossone et al., 2009; Geiger and Sun, 2016).

Mēs noskaidrojām, ka Ythdf2 ekspresija palielinājās līdz ar nobriešanu un ka CD11b-CD27+, CD11b+CD27+ un CD11b+CD27− uzrādīja attiecīgi zemāko, vidējo un augstāko Ythdf2 ekspresijas līmeni (S3 G att. ), norādot, ka YTHDF2 var būt iesaistīts NK šūnu nobriešanā. Tāpēc mēs pētījām YTHDF2 lomu NK šūnu nobriešanā, ko nosaka šūnu virsmas marķieri CD11b un CD27.

Mēs atklājām, ka Ythdf2 zudums NK šūnās izraisīja būtisku nobriedušu NK šūnu biežuma samazināšanos un/vai nenobriedušu un vidēji nobriedušu NK šūnu skaita palielināšanos liesā, aknās, plaušās un asinīs, bet ne KM (4. att. S3 H att.), kas norāda, ka YTHDF2 pozitīvi regulē terminālo NK šūnu nobriešanu. Saskaņā ar šiem datiem KLRG1, kas ir gala NK šūnu nobriešanas marķieris, līmenis Ythdf2ΔNK pelēm liesā, aknās un plaušās bija ievērojami zemāks, bet ne BM, salīdzinot ar ka Ythdf2WT pelēm attiecīgajos orgānos vai audu nodalījumos (4. att. D).

Lai noteiktu, vai Ythdf2 deficīta dēļ samazinātais nobriedušo NK šūnu skaits ir raksturīgs, mēs izveidojām himēras Rag2−/−Il2rg−/− pelēm, injicējot BM šūnas no CD45.1 WT un CD45.2 Ythdf2ΔNK pelēm, kas sajauktas 1:1. attiecība.

Kā liecina plūsmas citometrija 8 nedēļas pēc transplantācijas, no CD45.2 Ythdf2ΔNK BM šūnām tika iegūta samazināta terminālo nobriedušo NK šūnu daļa nekā no CD45.1 WT kontroles šūnām (4. E att.), kas liecina, ka NK šūnu terminālo nobriešanu kontrolē YTHDF2. ir šūnai raksturīgs.T-box transkripcijas faktori Eomes un Tbet ir kritiski svarīgi NKšūnu nobriešanai (Daussy et al., 2014; Gordon et al., 2012).

Intracelulārā krāsošana atklāja ievērojamu samazinājumu theprotein līmeni Eomes NK šūnās no Ythdf2ΔNK pelēm, salīdzinot ar Ythdf2WT pelēm (S3 I att.). Turklāt mēs atklājām, ka Eomes olbaltumvielu un mRNS līmeņu samazināšana īpaši radās terminālajos nobriedušos (CD11b + CD27-) NK šūnās (S3, J-L att.).

Tomēr, atšķirībā no Eomes, Tbet ekspresija bija ekvivalenta NK šūnās starp Ythdf2ΔNK un Ythdf2WT pelēm (S3, I un K att.), norādot, ka YTHDF2, iespējams, regulē NKcell termināla nobriešanu, mērķējot uz Eomes.

YTHDF2 veicina NK šūnu efektora funkciju

Mūsu atklājums, ka Ythdf2 deficīts kavē NK šūnu homeostāzi un nobriešanu, motivēja mūs noteikt, vai YTHDF2 arī nomāca NK šūnu efektora funkciju. Galvenais mehānisms, kas regulē NK šūnu darbību, ir inhibējošo un aktivizējošo receptoru relatīvais ieguldījums (Chan et al., 2014).

Pēc tam mēs pārbaudījām ar NKšūnu aktivāciju vai inhibīciju saistīto molekulu ekspresijas līmeņus. Mēs atklājām, ka aktivizējošo receptoru CD226 un NKG2D, bet ne CD69, ekspresijas līmenis Ythdf2ΔNK peles liesas NK šūnās ir pazemināts, salīdzinot ar Ythdf2WT pelēm (5. att. A), savukārt inhibējošie receptori NKG2A, TIGIT un PD{{ 7}} bija līdzīgas starp Ythdf2ΔNK pelēm un Ythdf2WT pelēm (att. 5 A un Fig. S3 M).

Turklāt Ythdf2ΔNK NK šūnas radīja ievērojami mazāk IFN- nekā Ythdf2WT NK šūnas, ja tās stimulēja ar IL-12plus IL-18 vai YAC-1 peles limfomas šūnām (5., B un C att. ).

Pēc tam mēs pārbaudījām Ythdf2ΔNK NK šūnu citotoksisko spēju. Mēs noskaidrojām, ka Ythdf2ΔNK NK šūnām bija ievērojami samazināta citotoksicitāte pret MHC I klases deficīta peļu limfomas šūnu līnijām RMA-S (5. att. D), bet tām bija līdzīga citotoksicitāte pret MHC I klases pietiekamām RMA šūnām (S3 N att.), kā parādīts 51Crassay. . Kopumā šie atklājumi parāda, ka YTHDF2 ir būtiska NK šūnu efektora funkcijai.

For more information:1950477648nn@gmail.com