Priekšējie talāmu kodoli: Kritisks substrāts netelpiskai pāra atmiņai žurkām 2. daļa

2|MATERIĀLI UN METODES

2.1|Dzīvnieki un turēšanas apstākļi

Long-Evans žurku tēviņi (12 mēneši veci; vidēji 630 g) tika izmitināti grupās pa trim vai četriem Makrolona būros (48 28 22 cm) apgrieztā 12-h gaismas-tumsas ciklā (gaisma ieslēdzas plkst. 20:00). ).

Uzvedības pārbaude notika gaismas cikla tumšajā fāzē, piecas sesijas nedēļā; novērojumi apstiprināja, ka žurkas bija salīdzinoši aktīvākas tumšajā fāzē. Žurkas tika uzturētas 85% no brīvi barojošās ķermeņa masas ar ūdeni ad libitum; barība tika ad libitum pirms un pēc operācijas pēcoperācijas atveseļošanai.

Ķirurģija ir slimības ārstēšanas un fiziskās veselības uzlabošanas process. Atveseļošanās process pēc operācijas prasa īpašu uzmanību. Papildus fiziskajai atveseļošanai, lai justos labi, ir jākoncentrējas arī uz atmiņas atjaunošanu. Pastāv cieša saikne starp pēcoperācijas atveseļošanos un atmiņu.

Operācijas laikā tādi faktori kā ķermeņa reakcija uz nelabvēlīgām situācijām un anestēzijas līdzekļu iedarbība bieži ietekmē smadzeņu atmiņas funkciju. Pēc ķermeņa atveseļošanās pievērsiet uzmanību pareizam uzturam, mērenai fiziskai slodzei un pietiekamam miegam. Atveseļošanās periodā ārpus slimnīcas jums jāturpina izvairīties no pārmērīgām aktivitātēm un uzturēt komfortablu ķermeņa stāvokli.

Papildus dzīves ieradumiem, saprātīgi psiholoģiski pielāgojumi ir noderīgi arī veselības un atmiņas atjaunošanai. Atpūtieties, saglabājiet mierīgu prātu un palīdziet sev pielāgoties atmiņas atjaunošanai. Tajā pašā laikā jums vajadzētu aktīvi piedalīties atpūtas aktivitātēs un sazināties ar radiem un draugiem, lai jūsu smadzenes būtu aktīvas un uzlabotu izziņas un atmiņas spējas. Šo aktivitāti var pakāpeniski palielināt, un to var veikt būtībā reizi nedēļā.

Īsāk sakot, atveseļošanās process pēc operācijas prasa visaptverošu uzmanību. Labu dzīves paradumu un psiholoģisko pielāgojumu saglabāšanai ir ļoti liela nozīme fiziskās atveseļošanās un atmiņas atjaunošanās veicināšanā. Apskatīsim to pozitīvi, ar pilnu pārliecību un cerību. Mums ir jāuzlabo atmiņa, un Cistanche deserticola var ievērojami uzlabot atmiņu, jo Cistanche deserticola var arī regulēt neirotransmiteru līdzsvaru, piemēram, palielināt acetilholīna un augšanas faktoru līmeni. Šīs vielas ir ļoti svarīgas atmiņai un mācībām. Turklāt gaļa var arī uzlabot asins plūsmu un veicināt skābekļa piegādi, kas var nodrošināt, ka smadzenes saņem pietiekami daudz barības vielu un enerģijas, tādējādi uzlabojot smadzeņu vitalitāti un izturību.

Noklikšķiniet uz zināt veidus, kā uzlabot smadzeņu darbību

Visas procedūras atbilda Kenterberijas Universitātes Dzīvnieku ētikas komitejas apstiprinātajām vadlīnijām. Četras žurku grupas tika izveidotas pēc nejaušības principa pēc iepazīšanās pirms operācijas radiālās rokas labirintā (RAM) un skrejceļā. Četras grupas bija divpusēji ATN bojājumi ar vai bez pēdām starp smaku un objekta stimuliem, kad tās tika apmācītas pārī saistītajā uzdevumā un atbilstošajās divās viltus bojājumu grupās.

Galīgais parauga lielums bija (1) fiktīvas-bez pēdas=7 (ti, fiktīvu bojājumu grupa bez intervāla starp smaržu un objekta stimuliem, kas izmantoti pārī saistītajā uzdevumā); (2) Sham-Trace=7 (Shamlesion grupai ir piešķirta 10-s izsekošana starp smakas parādīšanos un objekta stimuliem); (3) ATN No Trace=8; un (4) ATN Trace=9. Papildu ATN bojājuma žurka tika izslēgta, jo tā neatbilst bojājuma kritērijiem (skatīt zemāk).

2.2|Ķirurģija

Žurkas tika anestēzētas ar izoflurānu (indukcija 4%; uzturēšana 2, 5%) un ievietotas stereotaksiskā aparātā ar atraumatiskiem ausu stieņiem (Kopf, Tujunga, CA). Priekšzobu stienis tika iestatīts uz 7,5 mm zem interaurālās līnijas, lai samazinātu fornix bojājumus.

Katrā puslodē divas infūzijas tika vērstas uz anteroventrālo kodolu (AV; augšējais un apakšējais), un viena infūzija tika vērsta uz anteromediālo kodolu (AM). Katrai operācijai tika izmantota viena priekšējā un aizmugurējā (AP) koordināte attiecībā pret atsevišķas žurkas Bregma-Lambda attālumu (visas vērtības mm). AV bojājumiem AP koordinātas bija: 2,20 B–L 6,9–7,2; 2,25 B–L no 7,3 līdz 7,6; 2,30 B–L Lielāks vai vienāds ar 7,7. AV infūzijas tika veiktas 5, 68 un 5, 73 zem dura un 1, 52 sānis pret viduslīniju.

AM infūzija tika veikta par {{0}},1 mm vairāk priekšpuses nekā AV koordināte, 5,76 zem cietās zarnas un 1,16 sānu; pirmais AM bojājums tika veikts pēc visu AV infūziju pabeigšanas un sākās kontralaterālā virzienā pret pēdējo AV bojājuma vietu. 0,15 M N-metil-d-aspartāts (NMDA; Sigma, CastleHill, NSW) 0,1 M fosfāta buferšķīdumā (pH 7,20) tika ievadīts katrā vietā ar ātrumu 0,04 ul minūtē, izmantojot 2.{18}}ulHamilton šļirce (Reno, NV, ASV), izmantojot mikroinfūzijas sūkni (Stoelting, Wood Dale, IL).

AV sitesper puslode saņēma attiecīgi {{0}}.12 un 0.10 ul dorsaland ventrālajām vietām; Katrai AM vietnei tika izmantoti 0,06 ul. Šļirces adata pēc infūzijas palika in situ 3 minūtes vienā pusē.
Fiktīvas bojājuma operācijās tika izmantota tā pati procedūra, taču adata tika nolaista līdz 1 mm virs augšējās AV un AM bojājuma vietām, veicot noinfūziju.

2,3|Uzvedības uzdevumi

Astoņu roku RAM apstiprināja telpiskās atmiņas traucējumus ATN bojājumu žurkām pēc operācijas. Tika izmantots skrejceļa aparāts, lai apmācītu žurkas veikt visus netelpiskos uzdevumus, tas ir, vienkāršu smaku un vienkāršu objektu diskrimināciju un smakas–objekta un smakas–izsekošanas–objekta pāra-saistītus uzdevumus.

Pirms operācijas žurkas ar ierobežotu barību tika pieradinātas pie astoņu roku RAM, kas aprakstīta tālāk, lai iegūtu 0,1 g šokolādes gabaliņus (Foodfirst LTD Auckland, NZ) un pielāgotos roku durvju atvēršanai un aizvēršanai. Sarkanajā Perspex skrejceļā (1. attēls) žurkām bija arī tāda forma, lai tās iedurtu 2-cm apaļu baltu plastmasas vāciņu, kas atradās 10 cm virs grīdas līmeņa, un tieva sūkļa centrā uz caurspīdīga Perspex ieliktņa, kas bija piestiprināts gala siena.

Tie tika arī veidoti tā, lai nospiestu (izmantojot degunu vai ķepu) priekšmetu, kas piestiprināts tā pamatnes aizmugurē, uz pārtikas iedobes augšpusi, kas bija padziļināta 5 x 8,5 3 cm koka bloka centrā. Ēdienā bija šokolādes gabaliņi (un zem padziļinājuma tika turēts nepieejamais ēdiens). Priekšapmācībai izmantotais priekšmets atkārtoti netika izmantots. Pēc operācijas atveseļošanās žurkas tika no jauna iepazīstinātas gan ar RAM, gan ar skrejceļu.

2,4|Telpiskā darba atmiņa RAM

Pēcoperācijas telpiskā darba atmiņa tika pārbaudīta, izmantojot RAM, kas atrodas bezlogu telpas centrā (3 3 m). Labirintam bija pelēki krāsots koka 35 cm plats centrālais rumbs ar astoņām alumīnija svirām (65 cm garas, 8,6 cm platas, ar 4,5 cm augstām apmalēm), kas paceltas 67,5 cm virs istabas grīdas. Caurspīdīgas Perspex sienas (19 cm garas un 25 cm augstas) stiepās gar katras rokas vienu malu no rumbas, lai novērstu žurku lēkšanu starp rokām.

Katras rokas galā tika novietota melna koka pārtikas iedobe (5 x 8,5 x 3 cm) ar nepieejamu pārtiku. Pārbaudes laikā katras pārtikas iedobes sākumā bija 2 0,1 g šokolādes gabaliņi. tiesa. Caurspīdīgas perspeksgiljotīnas durvis, kuras no rumbas varēja pacelt ar skriemeļu sistēmu, kontrolēja piekļuvi rumbas svirām.

Telpiskās darba atmiņas pārbaudei tika izmantotas desmit secīgas formālās apmācības dienas RAM. Žurka tika ievietota centrālajā centrmezglā, un pēc 10 sekundēm visas astoņas rokas tika atvērtas, un žurkai tika atļauts izdarīt izvēli, kas definēta kā abas pakaļkājas virs rokas sliekšņa. Kad žurka bija iekļuvusi rokā, visas durvis tika aizvērtas, un tā tika aprobežota ar roku uz 15 sekundēm neatkarīgi no tā, vai tā izdarīja pareizo izvēli.

Pēc tam žurku ielaida atpakaļ centrālajā centrmezglā un turēja tur 10 sekundes, pirms visas durvis tika atkārtoti atvērtas, lai varētu izvēlēties citu roku. Izmēģinājums noslēdzās, kad rathads apmeklēja visas astoņas rokas, bija izdarītas 20 roku izvēles vai bija pagājušas 10 minūtes.

2,5|Netelpiski uzdevumi: vienkārša diskriminācija un mācīšanās pāros

Gan vienkāršie diskriminācijas uzdevumi, gan pārī saistītie uzdevumi izmantoja to pašu sarkano Perspex skrejceļu (93 26 26 cm), kas novietots uz 75-cm augsta galda (1. attēls). Skrejceļu var sadalīt ar trim vertikāli noņemamām durvīm (redPerspex, 26 26 cm), kas tika izvēlētas, pamatojoties uz konkrēto uzvedības uzdevumu. Runājot par iepazīšanos, 6,5 6 8 mm plānais sūklis ar vāciņu centrā saturēja šokolādes pārtikas balvu (1. attēls).

Sūklis tika piestiprināts pie noņemamām durvīm skrejceļā (pārī saistītiem uzdevumiem) vai skrejceļa gala sienai (vienkāršam diskriminācijas uzdevumam). Katrai smaržai tika izmantots atšķirīgs durvju plus sūklis, kas tika ievadīts blakus tvertnei ar 5 ml saulespuķu eļļas, kas sajaukta ar 20 ul Jaunzēlandes ēterisko eļļu.

Smarža bija citrona un krustnagliņas, veicot pārus saistītos uzdevumus, un kanēļa un laima smakas, veicot vienkāršus diskriminācijas uzdevumus, vai otrādi – līdzsvarotās grupās. Viegli un vizuāli atšķirīgi objekti (1. attēls) tika piestiprināti ar eņģēm tās pamatnes aizmugurē pie barības iedobes augšdaļas, lai žurka varētu viegli atstumt priekšmetu atpakaļ (degunu vai ķepu), lai akā meklētu atlīdzību par pārtiku.

Koka rāmis (1,8 m augsts no grīdas, 1,3 m plats), pārklāts ar melniem aizkariem, norobežoja visas testa zonas malas, lai samazinātu telpiskās norādes pārbaudes laikā.

Vienkāršā diskriminācija (tikai smarža; tikai objekts) un pārī saistītie uzdevumi izmantoja procedūru “go/no-go”.

Katras sesijas pirmais izmēģinājums sākās ar žurkas savaldīšanu sākuma zonā 120 sekundes, lai no jauna aklimatizētos pie labirinta; turpmākajos izmēģinājumos šajā starta zonā tika izmantotas 20 s. Allrats saņēma 12 masveida izmēģinājumus vienā dienas sesijā, ar sešiem (apbalvotiem) un sešiem no-gos (bez atlīdzības) izmēģinājumiem apseidorandomizētā secībā. Vienā sesijā secīgi tika veikti ne vairāk kā trīs aiziet vai trīs no-go izmēģinājumi.

Neviens no četriem dažādiem smaržas un objekta stimulu pāriem netika atkārtots secīgos pētījumos. Pareizie elementi vienkāršajos diskriminācijas uzdevumos un pareizie stimulu pāri pārī saistītajos uzdevumos tika līdzsvaroti.

Vienkāršai smakas diskriminācijai atbilde tika definēta kā deguna ieduršana vāciņā, kas atrodas aromātiskā sūkļa centrā; tikai sūkļa šņaukšana tika uzskatīta par aizliedzošu atbildi. Pārtika vienmēr atradās vāciņā sūkļa centrā, lai veiktu uzdevumus, kas saistīti ar smaržu-objektu-pāriem; iet/no-go aspekts šeit attiecas uz to, vai objekts tika pastumts, lai atklātu, vai zem tā skrejceļa galā ir atlīdzība par pārtiku.

Objektiem atbilde tika definēta kā jebkurš grūdiens ar degunu vai ķepu, kas sasver objektu atpakaļ. Latentums no brīža, kad tika paceltas pēdējās durvis un kad žurka mijiedarbojās ar smaku (iebāzt degunu vāciņā; vienkāršas smakas diskriminācijai) vai ar objektu (nobīdīts atpakaļ uz eņģes, vienkāršu objektu atšķiršanai un pārī saistītiem uzdevumiem). mēra, izmantojot klusu hronometru (Diks Smits, Jaunzēlande).

Novērotājs sēdēja aizkaros un blakus skrejceļam, lai darbinātu durvis un reģistrētu uzvedību. Izmēģinājums tika apzīmēts kā “pareizs”, ja žurka reaģēja mazāk nekā 8 s laikā, vai izmēģinājuma laikā nereaģēja pirms 8 s.

2,6|Vienkāršas diskriminācijas

Puse no žurkām saņēma apmācību vienkāršajā smakas diskriminācijas uzdevumā, kam sekoja vienkārša objektu diskriminācija, un otrā puse. Tika reģistrēts latentums starp durvīm X (1.a attēls) un mijiedarbība ar smakas oroobjektu skrejceļa galā. Žurkas tika apmācītas vienkāršajā smakas un vienkāršu objektu diskriminācijas uzdevumā, līdz tās sasniedza kritēriju (80% pareizi 2 dienas pēc kārtas).

Vienkāršajam smaku diskriminācijas uzdevumam katrā izmēģinājumā tika parādīta viena smaka. Rathad, lai atšķirtu, kura no divām smaržām tika savienota pārī ar pārtikas atlīdzību, kas atrodas sūklī B nodalījuma galā (1.a attēls).

Vienkāršajā objektu diskriminācijas uzdevumā katrā izmēģinājumā tika parādīts viens objekts B nodalījuma beigās (nav parādīts 1. attēlā). Theratam bija jāiemācās, kurš no diviem objektiem ir savienots ar pārtikas atlīdzību, kas pasniegta zem objekta.

2,7|Pārī saistītie uzdevumi (trace andno-trace)Šajos uzdevumos tika izmantots jauns vertikāli noņemamu durvju izkārtojums (1. attēls). Žurkas uzzināja, kurš no diviem smaržas-objekta pāriem tiks apbalvots (piemēram, Smarža 1 + ObjektsA un Smaka 2 + Objekts B) un kuri pāri netiek apbalvoti (ti, Smarža 1 + Objekts B un Smaka 2 + Objekts A).

Neatkarīgi no savienošanas pārī žurkas vienmēr saņēma atlīdzību par smakas parādīšanos, kad tās tika ielaistas skrejceļa otrajā nodalījumā. Tas bija C nodalījums par stāvokli “bez pēdas”, kurā A nodalījums netika izmantots un B nodalījums bija starta nodalījums. Smarža atradās B nodalījuma galā "izsekošanas" stāvoklī, kuram A nodalījums tika izmantots kā sākuma kaste.

Žurkas, kas atradās izsekojamības stāvoklī, tika pakļautas 10- s aizkavei starp smakas parādīšanos un objekta stimuliem, turot tās C nodalījumā, turpretim žurkas bez pēdas tika pakļautas objektam tūlīt pēc mijiedarbības ar smaku (pēc apēst atlīdzību). Gan izsekojamības, gan bezizsekošanas apstākļos mēs reģistrējām latentumu, lai šķērsotu D nodalījumu, no brīža, kad DoorZ tika pacelts, līdz žurka mijiedarbojās ar objektu vai atturējās no mijiedarbības ar to 8 sekundes.

Divas žurku grupas (viltīgs bojājums un ATN bojājums) tika apmācītas uzdevumiem, kas saistīti ar smaržu-objektu-saistītiem uzdevumiem (bez izsekošanas grupām), un divas atbilstošas ​​grupas tika apmācītas par smaržas-izsekošanas-objekta pārī-saistītajiem uzdevumiem (izsekošanas grupas), līdz viņi sasniedza kritēriju (80% pareizu izmēģinājumu 3 dienu laikā) vai ne vairāk kā 50 dienas.

2,8|Pēcapgūšanas saglabāšanas tests

Pārī saistītā uzdevuma saglabāšana jebkurai žurkai tika veikta 5 dienas pēc kritērija sasniegšanas vai pēc 50 dienu apmācības. Šajā sesijā tika izmantoti 12 masveida atalgoti/neapbalvoti izmēģinājumi vienā dienā identiskā veidā, ko iepriekš izmantoja šai žurkai.

2,9|Histoloģija

2.9.1|Perfūzija un audu savākšana

Trīs dienas pirms aiztures testa atsevišķas žurkas 90 minūtes tika iepazīstinātas ar tukšu tīru būru tumšā, klusā telpā. Tūlīt pēc pēdējā noturības testa izmēģinājuma žurka tika ievietota būrī pazīstamā tumšā klusā telpā 90 minūtes pirms perfūzijas.

Žurkas tika dziļi anestēzētas ar nātrija pentobarbitālu (125 mg/kg) un transkardiāli perfūzētas ar fizioloģisko šķīdumu, kam sekoja paraformaldehīds [4% PFA 0,1 M fosfāta buferšķīdumā (PB)], lai nostiprinātu smadzenes. Smadzenes tika pēcfiksētas 4% PFA, kam sekoja vismaz 48 stundas ilgtermiņa šķīdumā (20% glicerīna 0,1 M PB). Koronālās 40-μm sekcijas tika savāktas, izmantojot saldēšanas mikrotomu (Thermo Fisher, UK) un uzglabātas krioaizsargājošā šķīdumā (30% glicerīns, 30% etilēnglikols 0,1 M PB) 20 C temperatūrā līdz apstrādei imūnhistoķīmijai.

Koronālās sekcijas tika savāktas divās atsevišķās sērijās. Pirmajā sērijā tika uzņemtas secīgas sekcijas piecos krioviālos imūnhistoķīmijas noteikšanai (ti, katrā piektajā). Šī sērija ietvēra sekciju priekšējo bloku no prefrontālās garozas līdz starpsienas zonai (apmēram {{0}},7 līdz 0,6 mm no Bregmas) un aizmugurējo bloku no mediodorsālā talāma (apmēram 3,5 mm no Bregmas) līdz astes daļai. retrospleniālā garoza.

Otrajā sērijā tika uzņemtas secīgas sadaļas bojājumu pārbaudei. Šīs sekcijas tika savāktas četros krioviālos no tieši ATN priekšpuses līdz aizmugurējam mediodorsālajam talāmam (apmēram 0,6 līdz 3,5 mm no Bregmas).

2.9.2|Neu-N krāsošana un ATN bojājumu pārbaude

Brīvi peldošās sekcijas visā ATN reģionā tika mazgātas (3 10 min) 0,1 M fosfātu buferšķīdumā ar Triton-X (0,2%; PBSTx) pirms inkubācijas endogēnā peroksidāzes bloķējošā buferšķīdumā 30 min [1% ūdeņraža peroksīds (H2O2), 50% metanols (CH3OH) 2% PBSTx].

Sekcijas tika inkubētas nakti 4 C inanti-NeuN primārajā antivielā (1:5000; monoklonālā-MouseCat# MAB377; Millipore, California USA) PBSTx ar 1% normālu kazas serumu (NGS; Life Technologies, NZ).

Antivielu bufera pārpalikums tika noņemts ar PBSTx un tam sekoja inkubācija biotinilētā kazas anti-peles sekundārajā antivielā (1:1000 Cat# BP-9200-50: VectorLaboratories, California USA) 4 C temperatūrā PBSTx un 1% NGS. Sekcijas tika ievietotas ExtrAvidin (konjugēts ar peroksidāzi; 1:1000; Sigma, NSW Australia), PBSTx un 1% NGS 2 stundas istabas temperatūrā.

Lai noņemtu lieko ExtrAvidin un Triton X{{0}}, sekcijas tika mazgātas PBS, PB un pēc tam Tris buferšķīdumā (pH 7,4 destilētā H20), lai sagatavotu sekcijas vizualizācijai ar svaigi sagatavotu diaminobenzidīnu ( DAB 0,05%; Sigma, 0,01% H2O2 Tris buferšķīdumā).

DAB reakcija (apmēram 5 minūtes) tika apturēta, izmantojot Tris buferšķīdumu (mazgāšana 1 10 minūtes), un sekcijas tika ievietotas PB temperatūrā 4 C uz nakti, pirms tās tika uzstādītas uz želatinizētiem priekšmetstikliņiem un ļāva nožūt. Priekšmetstikliņi tika dehidrēti cauri spirtam (70–100%), pirms tie tika attīrīti no inksilola un uzstādīti ar DPX (06522; Sigma-Aldrich) un pārklājumu.

Lai noteiktu bojājuma apjomu, tika izmantots Neu-N pozitīvo šūnu skaits ATN. Tajā tika izmantotas sadaļas gan no kreisās, gan labās puslodes katrai četrai 40- μm sekcijai visā ATN un apgabalā, kas tika kvantificēts, izmantojot ImageJ (NIH, ASV). NeuN pozitīvā šūnu krāsošana tika fotografēta pie 5 objektīviem ar LeicaDM6 B vertikālo mikroskopu un DFC7000T kameru (Leica Microsystems, Vācija).

Automatizēts šūnu skaits tika iegūts, izmantojot ImageJ (attēlu analīzes programmatūra, Nacionālais veselības institūts, NIH, ASV). Apgabals, kas ieskauj neironus ATN reģionā, tika manuāli atlasīts, un attēli tika pārveidoti {{0}}bitpelēkā skalā, fons tika atņemts (ritošs=40), pārveidots par masku un tika piemērota ūdensšķirtnes funkcija, un tika saskaitītas visas neironu šūnas, kas pārsniedz slieksni ('MaxEntropy' slieksnis, cirkularitāte 0,5–1,0).

Noteikšanas slieksnis visām sekcijām bija vienāds. Lai izteiktu šūnu skaitu ATN, deviņās no viltotajām žurkām tika saskaitīti automatizēti ar NeuN krāsoti šūnu kodoli (piecas Sham-Trace grupā un četras Sham-No Trace grupā).

Automātiskais NeuN krāsoto izglābto šūnu kodolu skaits visās ATN bojājumu žurkās tika salīdzināts ar vidējo NeuN šūnu skaitu, kas novērots viltus žurkām. Pieņemamie bojājumi tika definēti kā tādi, kas sasniedz 50% šūnu zuduma kritēriju ATN, ar vismaz 25% katrā puslodē. Tas atbilst ATN bojājuma kritērijiem iepriekšējos pētījumos (Mitchell & Dalrymple-Alford, 2005, 2006; Perryet al., 2018).

2.9.3|Zif268 imūnhistoķīmija

Brīvi peldošās sekcijas tika apstrādātas līdzīgi kā NeuN, bet inkubētas trušu poliklonālajā Zif268 primārajā antivielā (Egr-1; 1:1000 Cat# sc-110; Santa CruzBiotechnology, ASV) 72 stundas plkst. 4 C PBSTx ar 1%NGS, kam sekoja inkubācija biotinilētā kazas prettrušu sekundārajā antivielā (1:1000: Vector LaboratoriesBA{11}}) nakti PBSTx un 1% NGS.

Pēc DAB vizualizācijas (18 min.), Zif268-pozitīva šūnu iekrāsošanās katrā interesējošajā reģionā tika nofotografēta ar 10 objektīvu ar gaismas mikroskopu (Leica, Vācija). NIH, ASV) tādā pašā veidā kā NeuNpositive šūnas, izņemot to, ka cirkularitāte tika iestatīta uz 0,65–1,0.

Zif{0}}pozitīvo šūnu skaits visos reģionos izmantoja vienu un to pašu sliekšņa algoritmu, un katrā žurkā tika noteiktas divas līdz sešas sadaļas katram interesējošajam reģionam. Tika izmantots vidējais Zif268-pozitīvs šūnu skaits uz mm2 sadaļās (no abām puslodēm) interesējošajā reģionā.

2.10|Datu analīze

ANOVA, izmantojot Statistica (v13; Dell Inc.), tika veikta, lai pārbaudītu vidējās atšķirības četrās žurku grupās (Sham-No Trace, Sham-Trace, ATN-No Trace un ATNTrace). Tika pievienoti atkārtotu mērījumu faktori dienām (RAM un vienkārša diskriminācija), izmēģinājumu bloki (pārī saistīti uzdevumi) un Zif268 skaits saistītos interesējošos reģionos vai apakšreģionos.

ANOVA gan RAM, gan vienkāršiem diskriminācijas uzdevumiem salīdzināja četras grupas, lai apstiprinātu, ka divas Sham bojājumu grupas un divas ATN bojājumu grupas atbilst viena otrai, taču ņemiet vērā, ka RAM vai vienkāršos diskriminācijas uzdevumos nebija izsekojamības komponenta. Gan vienkāršai diskriminācijai, gan pārī saistītiem uzdevumiem skrejceļā tika izmantota latentuma datu savstarpēja transformācija atsevišķos izmēģinājumos, lai nodrošinātu dispersijas viendabīgumu.

Jebkurā testa dienā pārveidotie latentumi ģenerēja vidējo latentumu katram no sešiem bezatlīdzības izmēģinājumiem un sešiem atalgotiem izmēģinājumiem. Lai veiktu vienkāršus diskriminācijas uzdevumus, mēs analizējām vidējo latentuma atšķirības punktu (apbalvoto izmēģinājumu vidējais rādītājs mīnus pēc tam neapmaksāto izmēģinājumu vidējais rādītājs), bet ne atalgotos un neapmaksātos izmēģinājumus atsevišķi datu uzglabāšanas kļūmes dēļ.

Visi trīs latentuma mērījumi bija pieejami pārī saistītiem atmiņas uzdevumiem (neatlīdzības izmēģinājumi, atalgotie izmēģinājumi un latentuma atšķirība). Lai ņemtu vērā vairākus salīdzinājumus un līdzsvarotu I un II tipa kļūdas, uzvedības analīzēs izmantojām nozīmīguma līmeni p < 0.02, jo pārī saistītajā uzdevumā bija trīs saistīti pasākumi (bez atalgojuma izmēģinājumi, atalgotie izmēģinājumi). un vidējā latentuma atšķirība).

Bija sešas primārās analīzes interesējošo reģionu Zif268 ekspresijai, nozīmīgums šajās analīzēs tika iestatīts uz p < 0.01. Posthoc Newman-Keuls (NK) testi novērtēja pāru grupu atšķirības. Vienkārša galveno efektu analīze tika izmantota, ja bija nozīmīga mijiedarbība, kas ietver atkārtotu pasākumu faktorus.

3|REZULTĀTI

3.1|Bojājuma pārbaude

Visas, izņemot vienu, no 18 žurkām ar ATN bojājumiem atbilda apriori kritērijam, proti, 50% divpusēju bojājumu ATN un vismaz 25% katrā puslodē. Vidējais divpusējais bojājums bija 76% abās ATN bojājumu grupās (diapazons: ATN-No Trace, 61%–93%; ATN-Trace, 63%–93%; 2. attēls). Izslēgtajai žurkai bija apmierinošs bojājums tikai vienā puslodē (48% kopā, 75% kreisajā un 20% labajā pusē).

2d attēlā parādīts, ka NeuN skaits ATN neironiem ATN bojājuma žurkām (M=3388, SD=2024) bija krietni zemāks par vērtībām, kas konstatētas viltus bojājuma žurkām (M=15, 339, SD=1065; šis skaits bija līdzīgs tam, ko ziņoja Frosts et al., 2020). Astoņām no 17 bojājuma žurkām (četras Trace grupā un četras No-Trace grupā) nebija bojājumu ne mediodorsālajā talāmā (MD), ne atkalapvienošanās/romboīdos (Re/Rh) kodolos, un bija salīdzinoši mazs bojājums. šīs struktūras atlikušajās deviņās žurkās ar bojājumiem.

Kad radās MD bojājums, tas bija priekšējos aspektos, kas atrodas blakus ATN. Tātad MD bojājums tika novērtēts no aptuveni {{0}},72 līdz +2,10 mm no Bregmas, kur tas svārstījās no 0% līdz 41% šūnu zuduma visā pasaulē. grupa (vidēji=21%). Kad radās Re/Rh bojājums, tas atradās arī blakus ATN reģionam, tāpēc tika novērtēts aptuveni 1,08 līdz 2,04 mm attālumā no Bregmas, kur tas svārstījās no 0% līdz 33% (vidēji=6%). Ņemiet vērā, ka šīs procentuālās traumas vērtības neatspoguļo visu MD un Re / Rhreģionu, jo abu kodolu aizmugurējie reģioni bija neskarti visām ATN bojājumu žurkām.

For more information:1950477648nn@gmail.com