UPLC-Q-TOF-MSE neapstrādātas un apstrādātas Cistanche Deserticola ķīmisko profilu un metabolītu pētījums žurkām

E-pasts saziņaitina.xiang@wecistanche.comlai iegūtu vairāk informācijas

Abstrakts

Fons: Ķīniešu materia medica apstrāde ir izcila un unikāla farmaceitiskā tehnika tradicionālajā ķīniešu medicīnā (TCM), ko izmanto, lai samazinātu blakusparādības un palielinātu vai pat mainītu neapstrādātu augu terapeitisko efektivitāti. Par ārstniecības augu efektivitātes palielināšanos galvenokārt ir atbildīgas optimizētas apstrādes procedūras izraisītās izmaiņas galvenajos komponentos. Tvaicētu rīsu vīna nieres-jaņu uzmundrinošais efektsCistanche deserticola(C.deserticola) bija spēcīgāks par neapstrādātu C.deserticola (CD).

Metodes: Salīdzināšanas analīze tika veikta, izmantojot UPLC-Q-TOF-MS' ar UNIFl informātikas platformu, lai noteiktu apstrādes ietekmi. Tika veikti in vitro pētījumi, lai raksturotu sastāvdaļas, kā arīmetabolītiin vivo. Ķīmiskās sastāvdaļas tika noteiktas CD un tā pārstrādes produktos. Tika veiktas daudzfaktoru statistiskās analīzes, lai novērtētu atšķirības starp tām, savukārt OPLS-DA tika izmantota pāru salīdzināšanai.

Rezultāti: šī pētījuma rezultāti atklāja ievērojamas atšķirības feniletanoīdu glikozīdos (PhG) uniridoīdipēc apstrādes. CD un tā pārstrādātā produkta ekstraktos kopumā konstatēti 97 savienojumi. PhG, kam ir 4-O-kofeoilgrupa 8-O- -D-glikopiranozila daļā, piemēram, akteozīds, cistanozīds C, kampneozīds Il, osmantusīds pēc apstrādes samazinājās, savukārt PhG ar 6' -O-kafeoilgrupa 8-O- -D-glikopiranozila daļā, piemēram, izoacetozīds, izocistanosīds C, izokampneozīds l, izomartynozīds, īpaši CD-NP grupā. Palielinājās arī ehinakozīda un cistanozīda B intensitāte, kuru struktūrā ir 6'-O- -D-glikopiranozilgrupa. In vivo pētījumā žurku plazmā, izkārnījumos un urīnā tika atklāti 10 prototipu komponenti un 44 metabolīti. Iegūtie rezultāti atklāja, ka apstrāde izraisa ievērojamas CD ķīmisko sastāvdaļu atšķirības un ietekmē savienojumu izvietojumu in vivo, un Ⅱ fāzes vielmaiņas procesi ir katra savienojuma galvenās kaskādes, un lielākā daļa metabolītu ir saistīti ar ehinakozīdu vai akteozīds.

Secinājumi: Šis ir pirmais globālais neapstrādātu un apstrādātu kompaktdisku salīdzināšanas pētījums. Šie atklājumi papildina mūsu izpratni par CD apstrādes ietekmi un sniedz svarīgus datus turpmākiem efektivitātes pētījumiem.

Atslēgvārdi: Cistanche deserticola, apstrāde, UPLC-Q-TOF-MS5, ķīmiskie profili, metabolīti in vivo

Ievads

Ķīniešu materia medica (CMM) apstrāde ir pierādījusi nozīmīgu pielietojamību tradicionālās ķīniešu medicīnas (TCM) klīniskajā praksē, un tā ir uzskatīta par dzīvotspējīgu ārstēšanu vairākus gadsimtus. Šī ir unikāla farmācijas tehnoloģija, kas iegūta no TCM teorijas. Pēc apstrādes tika identificētas būtiskas atšķirības visu veidu TCM izskatā, ķīmiskajās sastāvdaļās, īpašībās un medicīniskajā nozīmībai, kas ļauj pieņemt, ka apstrāde varētu uzlabot TCM efektivitāti vai samazināt to toksisko iedarbību.

Simtiem gadu,Cistanche deserticola(Rou Cong Rong ķīniešu valodā, CD) parasti izmanto TCM klīniskajā praksē, lai papildinātu nieru funkcijas. Tas arī palīdz mitrināt zarnas, kas veicina zarnu relaksāciju [1].Cistanchevispirms tika ierakstīts ShenNongBencaoJing. Tas parasti ir sastopams sausos un daļēji sausos biotopos visā Eirāzijā un Ziemeļāfrikā, tostarp Irānā, Ķīnā, Indijā un Mongolijā [2]. CD apstrāde ir veikta, tvaicējot ar rīsu vīnu normālā spiedienā, kas ir Ķīnas farmakopejā dokumentēta sagatavošanas metode (ķīniešu valodā Jiucongrong, turpmāk tekstā "CD-NP"). Un CD tvaicēšana ar rīsu vīnu zem augsta spiediena ir efektīvāka sagatavošanas metode (turpmāk tekstā "CD-HP") [3, 4]. Vairākos pētījumos ir atklāts, ka CD farmakoloģiskā iedarbība atšķiras no tā pārstrādes produktiem [5]. CD var tonizēt nieres-jangu un atslābināt zarnas, savukārt pēc tvaicēšanas ar rīsu-vīnu pastiprinās nieres-jaņ papildināšanas efekts. Mūsu iepriekšējā pētījumā tika atklāts, ka CD-NP var uzlabot nieru tonifikāciju un atbalstīt jaņ, kā arī mazināt zarnu mitrināšanas un defekācijas efektu [6–8]. Klīniskajā praksē visizplatītākā forma ir apstrādāti produkti.

Līdz šim vairākos pētījumos ir analizētas CD ķīmiskās sastāvdaļas, kam sekoja vairāk nekā 100 savienojumu izolēšana un identificēšana [9–11], piemēram, feniletanola glikozīdi (PhG),iridoīdilignāni un oligosaharīdi kā galvenās ķīmiskās sastāvdaļas. Ir arī ziņots, ka PhG ir daudzas farmakoloģiskās aktivitātes, tostarp imūnmodulējošas, neiroprotektīvas, hepatoprotektīvas, pretiekaisuma, antioksidatīvas utt. [12–14]. Iridoīdiem piemīt pretiekaisuma iedarbība [15, 16]. Iepriekšējie pētījumi arī atklāja, ka daži ķīmiskie komponenti apstrādes laikā mainījās [17–20]. Pamatojoties uz šiem ziņojumiem, var pieņemt, ka pēcapstrāde ķīmiskā sastāva izmaiņas izraisa dažādus farmakoloģiskus efektus, kas ir jāturpina izpētīt.

Šajā pētījumā salīdzinošai analīzei tika veikta jutīga un efektīva metode, ti, īpaši augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfija kopā ar TOF-MSE (UPLC-Q-TOF-MSE), un tika veikti in vitro pētījumi, lai kvalitatīvi analizētu ekstraktus. CD, CD-NP un CD-HP, lai noskaidrotu to ķīmiskos profilus. Parasti eksogēnās ķīmiskās vielas ar lielu iedarbību mērķa orgānos tika uzskatītas par efektīvām sastāvdaļām. Tāpēc žurkām CD un tā apstrādātie produkti tika ievadīti attiecīgi iekšķīgi, kam sekoja to raksturojums. Esošais pētījums pirmo reizi atklāj neapstrādāta un apstrādāta CD salīdzinošu pētījumu (gan in vitro, gan in vivo). Iegūtie rezultāti paplašinātu mūsu izpratni par CD apstrādes ietekmi, kas varētu būt noderīgi turpmākiem pētījumiem.

materiāli un metodes

Materiāli

Ajugola (180120) un 2'-acetilacetozīda (M0601AS) standarta savienojumus nodrošināja Chendu Pure Chem-Standard Co., Ltd (Chengdu, Ķīna). Cistanosīdu F(MUST-17022620), ehinakozīdu (D1105AS), cistano pusi A(M0906AS) un izoakteozīdu (M0106AS) nodrošināja uzņēmums Must (Sichuan China); akteozīds (O0618AS), salidrosīds (J0526AS), katalpols. (S0728AS), genipozīds (A0407AS) un genipozīnskābe (MB6001-S) tika iegādātas no Dalian Meilun Bio.Co.,Ltd (Dalian, Ķīna).8-Epidoksilogānskābe (B31123) iegūts no Shanghai Yuanye Biological Technology Co., Ltd, Ķīna. Metanols un acetonitrils bija MS kategorijas un tika iegūti no Merck KGaA, Darmštate, Vācija. HPLC kvalitātes metānskābi (CH, O,) nodrošināja Merck KGaA (Darmštate, Vācija). Esošajā pētījumā izmantotais ūdens tika apstrādāts, izmantojot Milli-Q sistēmu (18, 2 MQ, Millipore, Ma, ASV). Rīsu vīnu nodrošināja Brand Tower Shaoxing Wine Co., Ltd. (Džedzjana, Ķīna).

Cistanch deserticola tika savākta no Neimenggu wangyedi cistanche Co.Ltd. Paraugus identificēja prof. Yanjun Zhai (farmācijas skola, Liaoningas Universitātes TCM). Paraugi tika iesniegti Liaoningas tradicionālās ķīniešu medicīnas universitātē.

Dzīvnieki

Sprague–Dawley žurku tēviņus (SPF pakāpe) ar 180–220 g kopējā ķermeņa svara nodrošināja Liaoning Changsheng biotechnology Co. Ltd. (Liaoningas provinces laboratorijas dzīvnieku resursu centrs, licences numurs: SCXK-2015–0001). Šīs žurkas vienu nedēļu tika izmitinātas audzēšanas telpā ar labi uzturētu temperatūru un mitrumu, ti, 20–26 grādi, 50–70 procenti. Pirms eksperimenta žurkas tika barotas ar parasto laboratorijas barību un ūdeni. Dzīvnieki gavēja nakti, tomēr ūdens tika nodrošināts ad libitum pirms eksperimenta. Te žurkas tika izpildītas ar 10 procentu hlorālhidrāta anestēzijas līdzekli. Ķīniešu medicīnas Liaoningas provinces slimnīcas Institucionālā dzīvnieku ētikas komiteja apstiprināja visus eksperimentālos protokolus (2019.03.25., 2019.015.).

CD, CD-NP un CD-HP ekstrakta sagatavošana

CD-NP, CD-HP tika apstrādāti no vienas un tās pašas Cistanch deserticola partijas. Lai sagatavotu CD-NP, sausie CD gabali (5 mm biezi, 100 g) tika samitrināti ar rīsu vīnu (30 ml) un tvaicēti 100 grādos 16 stundas, kam sekoja žāvēšana 55 grādos žāvēšanas krāsnī. Kamēr CD-HP tika sagatavots, infiltrējot sausus CD gabalus (5 mm biezi, 100 g) ar rīsu vīnu (30 ml), kam sekoja tvaicēšana 1, 25 atmosfēras spiedienā 4 stundas. un pēc tam žāvē žāvēšanas krāsnī 55 grādos.

100 ml mērkolbā vienu gramu pulvera izsijāja caur sietu Nr. 4, pēc tam pievienoja 50 procentus metanola (50 ml), pēc tam cieši pārklāja un samaisa. Šis maisījums tika nosvērts, pēc tam pusstundu. macerācija. Pēc macerācijas maisījumu 40 minūtes apstrādāja ar ultraskaņu (jauda 250 W, frekvence 35 kHz), pēc tam atdzesēja un vēlreiz nosvēra. Masas zudumu papildināja ar 50% metanola, pareizi samaisa un ļāva nostāvēties, pēc tam filtrēja supernatantu un pēc tam izmantoja iegūto filtrātu kā testa šķīdumu.

Aktīvo komponentu MSE analīze

Standarta vielu sagatavošana: tubulozīds-A (3.02 mg), ehinakozīds (3.00 mg), 2'-acetilakteozīds (2,34 mg), akteozīds (2,45 mg), izoakteozīds (0,61). mg), cistanozīds-F (2,14 mg), salidrozīds (3,39 mg), genipozīds (2,84 mg), ajugols (1,58 mg), katalpols (2,39 mg), genipozidīnskābe (2,56 mg) un 8-epideoksilogāns skābe (2,34 mg) tika pievienota 10 ml tilpuma mērinstrumentā, pievienots konstants metanola tilpums līdz mērogam, konfigurēts atbilstošā koncentrācijas standartšķīdumā. Katrs no 100 μL tika konfigurēts jauktā standartšķīdumā.

MS analīzes nosacījums: masas vērtība tika koriģēta pirms eksperimenta, un tika izmantots negatīvo jonu režīms. Masas diapazons bija 50–1200 Da, un paraugs tika ievadīts caur plūsmas iesmidzināšanas sūkni. Konusa ātrums bija 100 l/h, šķīdinātāja plūsmas ātrums tika iestatīts uz 800 l/h. Kapilārais un konusa spriegums tika fiksēts attiecīgi 2500 un 40 V. Jonu avota un šķīstošās gāzes temperatūra bija attiecīgi 100 grādi un 400 grādi, un signāla uztveršanas frekvence bija 0,5 S−1.

CD ekstrakta UPLC-Q-TOF-MS analīze (15–16 min), 65–55 procenti A (16–18 min). Plūsmas ātrums bija 0,3 ml min-1, savukārt automātiskās paraugu ņemšanas telpas un kolonnas temperatūra bija 30 grādi un 8 grādi atsevišķi. Injekcijas tilpums bija 1,0 μL.

Masu spektrometriskais novērtējums tika veikts, izmantojot Waters XEVO G{{0}}XS QTOF MS (Waters Corporation, Milford, MA, ASV), kas ietver ESI avotu. Slāpekļa gāzes plūsmas ātrums tika fiksēts 800 L·h−1 ar 400 grādu temperatūru, avota temperatūra tika fiksēta 100 grādi un konusa gāze tika iestatīta uz 50 L h−1. Konusa un kapilāra spriegums tika noregulēts attiecīgi uz 40 un 2000 V. Rampas sadursmes enerģija tika izmantota diapazonā no 20 līdz 30 V. Visu paraugu centrētie dati tika iegūti no 50 līdz 1200 Da ar 5-skenēšanas laiku 0,5 s 10 minūtes analīzes laikā. . Masas precizitātes apstiprināšanai tika izmantots LockSpray TM. Par slēdzenes masu tika izmantots leicīna enkefalīna Te [M–H]-jons (200 pg·μL–1 infūzijas plūsmas ātrums 10 μL min–1) pie m/z 554,2615. Precīzai masai, prekursoru jonu sastāvam un fragmentu jonu aprēķināšanai tika izmantota programmatūra Te MassLynx V4.1 (Waters Co., Milford, ASV).

Datu analīze Masslynx platformā

Turklāt, pamatojoties uz literatūru, tika izveidota iekšējā bibliotēka, kurā bija savienojuma nosaukums, tā struktūra un molekulārā formula (mol.). Visi savienojumi tika atzīmēti īpašā veidnē, kas izgatavota programmā Excel. Turklāt visu atsevišķo savienojumu struktūru mol faili (Chemdraw Ultra 8.0, Cam-bridge soft, ASV) un Excel faili arī tika saglabāti vietējā datorā. Izveidotā Excel lapa ar svarīgiem datiem tika tieši importēta UNIFI zinātniskajā bibliotēkā

Strukturālo īpašību, īpaši raksturīgo fragmentu un MS sadrumstalotības, novērtēšanai tika izmantota UNIFI 1.8.2, Waters, Manchester, UK. 2D maksimuma noteikšanai tika iestatīts minimālais pīķa laukums 500. 3D pīķu atklāšanas laikā tika izvēlēta zema enerģijas maksimālā intensitāte vairāk nekā 300 skaitījumu un paaugstināta enerģijas maksimālā intensitāte vairāk nekā 80 skaitījumu. Tika konstatēts, ka zināmiem savienojumiem masas kļūda ir līdz ± 10 ppm, un aiztures laika pielaide tika iestatīta diapazonā no ± 0, 1 min. Mēs atlasījām negatīvos aduktus, kas satur -H un HCOOH. No MS iegūto neapstrādāto datu apstrāde tika veikta, izmantojot racionalizētu UNIFI programmatūru, lai ātri noteiktu ķīmiskās sastāvdaļas, kas atbilst standartiem, izmantojot pašu izveidoto datubāzi un iekšējo tradicionālās medicīnas bibliotēku.

Pēc tam, lai pārbaudītu katra mērķa savienojuma ķīmisko struktūru, izomēri tika atšķirti pēc tiem raksturīgajiem MS fragmentācijas modeļiem, kas tika atklāti ziņotajos pētījumos, un salīdzinot atsauces standartu aiztures laikus.

Metabolisma analīze, kuras pamatā ir daudzfaktoru statistiskā analīze

Pirms neapstrādāto datu apstrādes tika iestatīti parametri, piemēram, masa diapazonā no 150 līdz 1200 Da, aiztures laika diapazons (0 līdz 20 min), sliekšņa intensitāte ( 2000 skaitījumu), masas pielaide, ti, 5 MDA, savukārt masas un aiztures laika logs bija attiecīgi 0,20 min un 0,05 Da. Nākamajā datu bāzes sarakstā jonu identifikators bija RT-m / pāri attiecībā uz to eluēšanas laiku. Tās pašas RT un m/z vērtības dažādās paraugu partijās tika uzskatītas par vienu un to pašu savienojumu.

Tika veikta daudzfaktoru statistiskā analīze, lai novērtētu efektīvus biomarķierus, kas ievērojami veicināja atšķirības dažādās grupās. Analīzes laikā tika izmantota galveno komponentu analīze (PCA), lai norādītu maksimālās atšķirības un modeļa atpazīšanu, lai iegūtu pārskatu un klasifikāciju. OPLS-DA ir modelēšanas rīks, kas nodrošina OPLS-DA paredzamā komponenta ielādes vizualizāciju, lai palīdzētu modeļa novērtēšanā. Projekcijas mainīgā nozīme (VIP) tika izmantota, lai novērtētu dažādu komponentu novērtējumu, unmetabolītiwith VIP values>1.0 un P vērtību<0.05 were="" regarded="" as="" effective="" markers.="" furthermore,="" a="" permutation="" test="" was="" conducted="" for="" providing="" reference="" distributions="" for="" the="" r²/o²values="" that="" could="" show="" the="" statistical="">

Eksperimenti ar dzīvniekiem žurkas tika nejauši iedalītas četrās grupās (n=6 katrai grupai), kam sekoja dažādu ekstraktu perorāla ievadīšana: (1) Tukša kontroles grupa: žurkām tika dots normāls sāls šķīdums (2 ml/100 g). ; (2) CD grupa: žurkām tika dots CD ekstrakts (2 ml/100 g); (3) CD-NP grupa: žurkām tika dots CD-NP ekstrakts (2 ml/100 g); (4) CD-HP grupa: žurkām tika dots CD-HP ekstrakts (2 ml/100 g). Tālāka visu grupu iedalīšana tika veikta trīs apakšgrupās attiecīgi plazmai, urīnam un fekālijām. Pēc divām stundām katrai žurkai iekšķīgi ievadīja tādu pašu un vienādu ekstraktu daudzumu.

Pēc ievadīšanas asins paraugu ņemšana tika veikta 1.0 h, 20 h un 40 h heparinizētās 1,5 ml polietilēna mēģenēs (no orbitālajām vēnām). , kam seko visu paraugu centrifugēšana (pie 4500 apgr./min) 15 minūtes.

Urīna un fekāliju paraugiem žurkas tika turētas vielmaiņas būros, un pēc tam 24 stundas pēc ievadīšanas tika savākti urīna un fekāliju paraugi. Urīna paraugu centrifugēšana tika veikta ar 4500 apgr./min 15 minūtes, savukārt fekāliju paraugus žāvēja ēnā, samala pulverī, pēc tam paņēma 0,2 g un pievienoja 0,5 ml fizioloģiskā šķīduma. šķīdums, ultraskaņa 5 minūtes un centrifugēta ar ātrumu 12, 000 apgr./min 15 minūtes. Visi bioparaugi līdz analīzei tika turēti -80 grādu temperatūrā.

Bioloģisko paraugu sagatavošana. Plazmas, urīna un fekāliju paraugu pievienošana tika veikta ar 3 tilpumiem metanola, kam sekoja vortekss 3 minūtes. Pēc tam maisījumus centrifugēja (pie 12, 000 apgr./min.) 10 minūtes, pēc tam pārnesa supernatantu EP mēģenē un pēc tam žāvēja ar slāpekli 37 grādu temperatūrā. Turklāt tika pievienots 200 μL HCN-H2O (50 procenti) šķīduma. Desmit, virpulis tika izmantots sajaukšanai (1 min.), kam sekoja centrifugēšana (pie 12, 000 apgr./min) 5 minūtes. Apstrādāto paraugu supernatants (5 μL) tika ievadīts UPLC-Q-TOF-MSE sistēmā.

Šķidruma hromatogrāfiskais un masas spektrometriskais stāvoklismetabolītito veica arī Waters UPLC instruments, izmantojot ESI saskarni. Atdalīšana tika veikta, izmantojot Acquity UPLC HSS T3 kolonnu (100 mm × 2,1 mm, 1,8 µm), kustīgā fāze bija 0,1% skudrskābe (A): acetonitrils (B), gradienta eluēšanas nosacījums bija 0-3 min (99,8 procenti → 98 procenti A).3-5 min (98 procenti → 95 procenti A),5-8 min (95 procenti → 90 procenti A), { {18}} min (90 procenti → 85 procenti A),12-17 min (85 procenti → 70 procenti A), 17-22 min (70 procenti → 60 procenti A), 22-23 min (60 procenti →58 procenti A), 23-25 min (58 procenti A),25-32 min (58 procenti →45 procenti A) un 32-37 min (45 procenti →35 procenti A) ),0,4 ml min-1 bija plūsmas ātrums. Temperatūra kolonnai un parauga telpai tika iestatīta attiecīgi 40 grādi un 8 grādi. Tika izmantoti iepriekš minētie masas spektrometrijas apstākļi.

Bioparaugu metabolītu sistemātiskas analīzes stratēģija Datu apstrādei tika izmantota UNIFI (1.8.2) programmatūra. Efektīvu metabolītu identificēšanai tika izmantota funkcija Binary Compare. Novērtētie metabolīti nebija līdzvērtīgā kontroles paraugā vai pastāv ar zemu jonu intensitāti. Relatīvās intensitātes slieksnis tika noteikts 3 vai 5, un varēja novērtēt metabolītus, kas atbilda pasvītrotajiem kritērijiem. Pēc tam EIC noteica parastos un paredzamos metabolītus. Divfāzu metabolītu meklēšanai tika izmantota NLF funkcija. Piemēram, UNIFI programmatūrā parametrus var iestatīt uz 176.0321, lai meklētu iespējamos glikuronskābes konjugātus. Pēcapstrādes metodē var iestatīt vai identificēt neitrālus zaudējumus. MassFragment tika izmantots atklāto metabolītu struktūru noteikšanai vai raksturošanai, UNIFI spektrālās interpretācijas funkcija ir galvenā funkcija, ko izmanto, lai analizētu sekundāro sākotnējo komponentu fragmentāciju. Šo funkciju var izmantot, lai ātri pārbaudītu sadrumstalotības ceļu, vai tas ir saprātīgi.

Rezultāti

Feniletanoīdu glikozīdu un iridoīdu masas sadrumstalotības noteikums

Feniletanoīdu glikozīdi ir CD galvenās ķīmiskās sastāvdaļas. izoakteozīda standarta šķīdumi,

Tika ņemts cistanozīds F, tubulozīds A, ehinakozīds, akteozīds un 2'-acetil-akteozīds, kam sekoja cita līmeņa sadursmes enerģijas nodrošināšana (1. tabula), un pēc tam tika iegūtas atbilstošas ​​MS2 kartes (1. att.).

Masu spektrometriskā analīze atklāja, ka feniletanoīdu glikozīdiem ir līdzīgi masas spektra fragmentācijas modeļi, šķelšanās ceļi negatīvo jonu režīmā galvenokārt ietver (1) estera saites šķelšanos: neitrālas kofeoilgrupas (C, H, O162.03) un neitrālas acetilgrupas zudumu. grupa (C, H, O,42.00);(2) Glikozīdu šķelšanās: neitrālu ramnozes atlikumu (C.HIO, 146,05) un neitrālas glikozes atlikuma (CgHO, 162,05) zudums. No augstas izšķirtspējas masas spektrometrijas var atšķirt kofeoilu (162.03) un glikozes atlikumu (162.05).

Tika ņemti iridoīdu ajugola, katalpola, genipozidīnskābes, genipozīda un 8-epide oksilogānskābes standartšķīdumi, kam sekoja dažādu sadursmju enerģijas nodrošināšana, un tika iegūtas atbilstošas ​​MS kartes (2. att.).

Iridoīdu glikozīdiem ir līdzīgi masas spektra fragmentācijas modeļi, šķelšanās ceļi negatīvo jonu režīmā galvenokārt ietver (1) glikozīdu šķelšanos: neitrālas glikozes atlikuma (CHoO, 162,05) zudumu; (2) neitrāla CO, (43,99) un H zudumu. , O(18.01).

Savienojumu identifikācija CD, CD-NP un CD-HP ekstraktos

UPLC-QTOF-MSE analīze

Tika veikta hromatogrāfisko apstākļu optimizācija. Pēc tam CistancheHerba savienojumi tika novērtēti gan negatīvos, gan pozitīvos jonu režīmos ar augstu, kā arī zemu CE. Iegūtie rezultāti atklāja, ka šiem savienojumiem negatīvā režīma saderība bija augstāka salīdzinājumā ar pozitīvo režīmu. 3. attēlā parādīta MS pamata pīķa jonu (BPI) hromatogramma, kas iezīmēta ar numurētiem pīķiem. Katra atklātā jona intensitāte UPLC-Q-TOF-MS analīzē tika normalizēta attiecībā pret visu jonu skaitu, lai izveidotu datu matricu, kas sastāvēja no m/z vērtības, normalizētā pīķa laukuma un aiztures laika.

Komponenšu novērtēšana no kompaktdiska un tā apstrādātajiem produktiem UNIFl platformā

Kopā 97 savienojumi tika identificēti ar -SEM (n=6) režīmu no CD un tā apstrādātā produkta (2. tabula), tostarp feniletanoīdu glikozīdi (PhG), iridoīdi, lignāni un oligosaharīdi. 95, 91 un 94 komponenti tika attiecīgi noteikti CD, CD-NP un CD-HP. No tiem 64 bija feniletanoīdi, 13 bija iridoīdi un tika noteikti 20 citi savienojumu veidi. CD un tā pārstrādātā produkta ķīmiskajā sastāvā bija līdzība, tomēr tika konstatēts, ka komponentu daudzums CD un tā pārstrādātajā produktā ir atšķirīgs.

Apstrādātu produktu ķīmisko komponentu izmaiņas Daudzfaktoru datu matricas analīzei tika izmantota programmatūra Simca-P 13.{2}}. Pirms PCA visi mainīgie tika centrēti uz vidējo un Pareto mērogā, kam sekoja iespējamo diskriminējošo mainīgo identificēšana. PCA rezultātu diagrammā katrs punkts parādīja atsevišķu paraugu. Paraugi, kuru ķīmiskās sastāvdaļas bija līdzīgas, tika izkaisīti blakus viens otram, bet tie, kuriem bija atšķirības to komponentos, tika sadalīti. Kā redzams PCA (4. att.), CD-HP grupa tika atdalīta no CD un CD-NP grupām.

To distinguish CD from CD-HP and CD-NP, OPLS-DA, permutation test, S-plot, and VIP value were developed. (Figs.5, 6,7)The obtained results revealed that many components were key characteristic components of each product. The screening condition was the VIP>1 un P<0.05. from="" the="" date="" of="" the="" s-plot,="" the="" characteristic="" components="" were="" evaluated,="" which="" were="" commonly="" existing="" in="" the="" three="">

No 8. att. mēs atklājām akteozīda (54), cistanīda C (74), kampneozīda I (43), osmantusīda (75) un 2'-aktilakteozīda (80) intensitāti, kam ir 4'-O-kofeoilgrupa. 8-O- -D-glikopiranozila daļa (skat. 9. att.) samazinās pēc apstrādes ar rīsu vīnu, savukārt izoacetozīda(60) intensitāte ir kastanozīds (71), izokampneozīds I. (69), izomartynozīds (86), kam ir 6'-O-kofeoilgrupa (sk. 9. att.), ir palielināts, īpaši CD-NP grupai. Lai gan tubulozīdam B (72) ir 6'-O-kofeoilgrupa, tāda pati kā izoakteozīdam, intensitāte samazinājās tā 2'-acetilgrupas dēļ. Ehinakozīda(38) un cistanozīda B ar 6'-O- -D-glikopiranozilgrupām intensitāte palielinājās, bet tubulozīda A (55) intensitāte samazinājās arī tā 2'-acetilgrupas dēļ.

Mūsu pētnieku grupa pētīja arī akteozīda un izoakteozīda termisko stabilitāti un konstatēja, ka akteozīds bija nestabils ūdenī, metanolā un dzeltenā rīsu vīna šķīdumā, un to var daļēji pārveidot par izoakteozīdu karsēšanas apstākļos. Bet izoakteozīda termostabilitāte bija labāka, īpaši dzeltenā rīsu vīna šķīdumā. 10. attēlā parādītas iespējamās PhG izmaiņas CD apstrādes laikā:

Metabolītu identifikācija žurkām No augstas izšķirtspējas masas spektrometrijas datiem tika analizēta un salīdzināta precīza metabolītu un protomolekulu savienojumu molekulmasa un elementu sastāvs. Tā kā viena veida savienojumi TCM uzrādīja līdzību vielmaiņas modifikācijās, fitoķīmisko sastāvdaļu korelācijas in vitro var paplašināties līdz to metabolītiem in vivo . Tikmēr, pamatojoties uz parastajiem biotransformācijas ceļiem, tika secināts par saprātīgām molekulmasas izmaiņām. Visbeidzot, metabolīti tika identificēti, analizējot metabolītu un protosavienojumu fragmentācijas ceļu MSE masas spektrus masu spektrā [21, 22]. Salīdzinot ar tukšo paraugu, tā sastāvdaļas tika identificētas in vivo, pamatojoties uz informāciju, ko sniedz hromatogrammas-masas spektrs, vielmaiņas reakcijas iespējamību, savienojuma struktūras īpašībām un tā masas spektra fragmentācijas likumu. Skatīt 3. tabulu.

Ar feniletanola glikozīdiem saistīto metabolītu identificēšana

Apstrādei tika izmantota UNIFI platforma. 11. attēlā parādīts urīna, fekāliju un plazmas TIC hromatogrāfs CD un tā apstrādātajiem produktiem. Salīdzinot ar tukšajiem paraugiem, žurkām tika identificēti 54 metabolīti, tostarp 10 prototipa komponenti un 44 metabolīti, no kuriem attiecīgi 24, 49 un 6 bija izkārnījumos, urīnā un plazmā.

Pamatojoties uz precīzu masu, sadrumstalotības kaskādi un paredzamiem neitrāliem zudumiem biotransformācijas rezultātā, provizoriski tika novērtēti kopumā 35 ar feniletanoīdu glikozīdiem saistīti metabolīti. Saistītajiem feniletanoīdu glikozīdu metabolītiem ir līdzīgi masas spektra fragmentācijas modeļi, piemēram, tipiskajam dekofeoila fragmentam m/z 461,1605, pēc tam tos tālāk hidrolizē ar glikozīdu un esteru saitēm in vivo un metabolizējas par hidroksitirozolu (HT) (m/). z153,0504, C.HO.4,73 min) un kofeīnskābe (CA) (m/z179,0389, CH, O0,77 min), skatiet 12.A attēlu.

M11 norādīts [MH] ~ pie m/ 153,0504 ar formulu, ti, C.HO, un identificēts kā HT. M16 uzrādīja [MH]- pie m/z 329,0851, kas bija par 176 Da paaugstināts nekā HT, atklājot, ka tas varētu būt HT glikuronizēts metabolīts. M26 [MH] bija pie m/z 343,1037,14 Da augstāks nekā HT-glikuronīdam. Tāpēc M26 tika identificēts kā HT-metilēts glikuronīds. M17 tika identificēts kā HT-sulfāts, pamatojoties uz tā [MH]-pie m/z 233,0112,80 Da virs HT, ko varēja tālāk metilēt, pēc tam tika iegūts M22, kas uzrādīja m/z 247,0278, norādot, ka tas ir HT- metilēts sulfāts metabolīts. M7 (m/167,0335) un M5 (m/z 167,0762) tika uzskatīti attiecīgi par oksidācijas produktiem un metilētu HT (12.B att.).

M1 uzrādīja [MH]- pie m/z 179,0389, noskaidrotā molekulārā formula bija CH-O un identificēta kā kofeīnskābe (CA). M25 atklāja [MH]- pie m/355,0704, kas bija par 176 Da paaugstināts nekā CA. ka tas varētu būt glikuronizēts CA metabolīts. M27 m/z bija 258,994, kas bija par 80 Da augstāks nekā CA, tāpēc mēs to noskaidrojām kā CA sulfātu, un tas varēja radīt M35 (m/z 273,0064). Tā kā M4 dod [MH]7 pie m/z 193,0524,14 Da augstāku nekā CA, tas tika identificēts kā CA metilēts metabolīts. M39 bija CA dehidroksilēšanas metabolīts ar m/z 163,04, un to varēja sulfatēt par M32 (m/z 242,9951).

M33 (m/z 181.0491, C.HO, 9,06 min) bija CA, tas ir, 3,4-dihidroksibenzolpropionskābes, reducēšanās produkts, ko varēja metilēt par M19 (m /z 195,0623, C10H12O4, 0,93 min). M33 varētu dehidrēt par M43, tas ir, 3-HES (m/z 165,0558, C9H10O3, 11,29 min) un M31 (m/z 341,0942, C15H17O9, 8,90 min) un M29 (m/z, C9,05, H26, 25, 25) 8,52 min) bija glikuronizētie un sulfētie produkti (12. C attēls).

Ar feniletanoīdu glikozīdiem saistītajiem metabolītiem galvenās metabolisma kaskādes bija II fāzes metabolisma reakcijas, ti, glikuronizācija, metilēšana un sulfācija. Piedāvātās feniletanoīdu vielmaiņas kaskādes ir attēlotas 13. attēlā.

Ar iridoīdiem saistīto metabolītu identificēšana

Analizējot metabolītu elementāro sastāvu, MSE fragmentāciju un saistīto literatūru, kopumā tika provizoriski novērtēti 19 ar iridoīdu saistīti metabolīti. Iridoīdu glikozīdi tika hidrolizēti ar glikozīdu saitēm, veidojot atbilstošos aglikonus. M/z 185,117 bija M8, par 162 Da mazāks nekā ajugolam, ko radīja glikozes atlikuma zudums.

M40 (m/z 199,0641, Rt 10,91 min) bija katalpola deglikozilēts produkts. M45 m/z 169,0487, Rt 12,15 min) bija mazāks par 30 Da katalpola deglikozilētā metabolīta vērtību, un tika identificēts kā CH, O metabolīta molekulas noņemšana. M34 (m/z 151,0352, Rt 9,08 min) bija turpmāks H, O metabolīta zudums.

M44 (m/z 211,0665, Rt 11,31 min) bija genipozīda deglikozilēts metabolīts, un M37 (m/z 197,0833, Rt 15,03 min) bija 8-epideoksilogānskābes deglikozilēšana. Iridoīdu vielmaiņas reakcijas var atklāt kā degglikozilācijas I fāzes metabolisms (12. D attēls).

Metabolisma profilu salīdzinājums plazmā, urīnā un izkārnījumos starp CD un tā apstrādātajiem produktiem

Tika salīdzināti 2 prototipi plazmā, 7 urīnā un 3 izkārnījumos. Bija 7 prototipi absorbēti CD, 7 prototipi absorbēti CD-NP un 8 prototipi CD-HP. M21 tika atklāts tikai CD-NP fekāliju grupā, un M38 un M51 tika atklāti tikai CD-HP urīna grupās. Salīdzinot ar metabolītiem, identiski metabolīti plazmā, urīnā un izkārnījumos bija attiecīgi 4, 42 un 21. CD grupā tika absorbēti 34 metabolīti, 39 CD-NP un 40 CD-HP grupā. M5, M7, M40 un M52 tika atklāti tikai CD-NP grupās, savukārt M24, M4l un M48 tika atklāti tikai CD-HP grupās.

Tika novērotas izmaiņas aktīvo savienojumu absorbcijā, kā arī metabolismā dažādos CD pārstrādes produktos. No 14. att. mēs atklājām, ka HT-sulfāta konjugācijas (M17) intensitāte bija visaugstākā urīnā, kam sekoja 3-HPP sulfāta konjugācija (M29), metilētā HT sulfāta konjugācija (M22), dehidroksilētais CA sulfāts. konjugācija (M32) un 3,4-dihidroksibenzola propionskābes sulfāta konjugācija (M19). Metabolisma produktu saturs pārstrādātajā grupā bija lielāks nekā CD grupā, īpaši M22, M29, M27, M16, M19, M1, M2. To prekursoru 6'-O-kofeoilgrupai 8-O- -D-glikopiranozila daļā, savienojumiem, piemēram, hidroksitirozolam, piemīt pretaudzēju, pretiekaisuma, antibakteriālas, pretvīrusu un pretsēnīšu īpašības [ 23]. Kofeīnskābei piemīt pretiekaisuma, pretvēža un pretvīrusu iedarbība [24]. Tas atbilda CD un tā apstrādāto produktu klīniskajai lietošanai.

Diskusija

CD ir TCM, un tā galvenie bioaktīvie komponenti, tostarp PhG, iridoīdi, polisaharīdi, ir dokumentēti dažādos pētījumos. TCM klīniskajā praksē pārstrādātie CD produkti ir plaši izmantoti salīdzinājumā ar neapstrādātiem produktiem. Apstrādes laikā tiks mainīts ķīmiskais sastāvs, kas var izraisīt ārstnieciskās iedarbības izmaiņas (14. att.).

PhG ir fenola savienojuma veids, kam raksturīga -glikopiranozīda struktūra, kas satur hidroksifeniletilgrupu kā aglikonu. Šie savienojumi bieži satur kofeīnskābi un ramnozi, kas attiecīgi pievienotas glikozes atlikumam ar esteru vai glikozīdu saitēm. Šajā pētījumā CD, CD-NP kvalitatīvās analīzes. un CD-HP, un kopumā tika identificēti 97 savienojumi, tostarp feniletanoīdu glikozīdi (PhG), iridoīdi utt. Iegūtie rezultāti parādīja ķīmiskā sastāva izmaiņas pirms un pēc apstrādes. PhG, kam ir 4'-O-kofeoilgrupa 8-O- -D-glikopiranozila daļā, piemēram, akteozīds, cistanīds C, kampneozīds II, osmantusa puse, pēc apstrādes samazinājās, savukārt PhGs ar

piemēram, izoacetozīds, izocistanosīds, izokampneozīds I, izomartynozīds, īpaši CD-NP grupā. Palielinājās arī ehinakozīda un cistanozīda B intensitāte, kuru struktūrā ir 6'-O- -D-glikopiranozilgrupa. PhG ar 2'-acetilgrupu bieži samazinājās hidrolīzes reakcijas dēļ procesa laikā, piemēram, tubulozīds B, 2-acetilakteozīds.

In vivo absorbēto metabolītu izpēte tika veikta pēc CD un tā apstrādāto produktu perorālas lietošanas. II fāzes vielmaiņas procesi bija galvenās kaskādes, un lielākā daļa metabolītu bija sulfāts, glikuronīds un metilēti konjugāti. Feniletanola glikozīdiem ir zema perorālā uzsūkšanās un izmantošana. Tie ir grūti uzsūcas asinīs un darbojas kā priekšteči, lai pildītu savas lomas pēc vielmaiņas aktivācijas in vivo. Feniletanoīdi, kas veidojas feniletanolaglikonā, piemēram, hidroksitirozols (HT) un kofeīnskābe (CA) un tās atvasinājums 3-hidroksifenilpropionskābe (3-HPP), šie metabolīti var vieglāk uzsūkties plazmā un tiem ir labāka ārstnieciskā iedarbība.

CD un tā pārstrādes produkti. Vislielākā intensitāte urīnā ir HT-sulfāta konjugācijai (M17), kam seko 3-HPP sulfāta konjugācija (M29), metilētā HT sulfāta konjugācija (M22), dehidroksilētā CA sulfāta konjugācija (M32) un 3,{{ 7}}dihidroksibenzolpropionskābes sulfāta konjugācija (M19). Metabolisma produktu saturs pārstrādātajā grupā bija lielāks nekā CD grupā, īpaši M22, M29, M27, M16, M19, M1, M2.

Parasti sastāvdaļas, kurām ir liela iedarbība uz mērķa orgāniem, varētu būt efektīvas. In vitro ir novērtēts un noteikts pietiekams daudzums feniletanoīdu un to atvasinājumu. Akteozīds ir raksturīgs savienojums, kura saturs pēc apstrādes ar rīsu vīnu samazinājās, un attiecīgi palielinājās izoakteozīda, izocistanosīda C, izokampneozīda I saturs. PhG noārdīšanās produktus, piemēram, CA un HT atvasinājumus, varēja novērtēt bioparaugos, un rīsu vīna apstrāde var uzlabot metabolītu uzsūkšanos in vivo .

Secinājums

Šajā pētījumā CD un tā pārstrādātā produkta ekstraktos tika atklāti 97 savienojumi. Dažu glikozīdu noārdīšanās notika paaugstinātā temperatūrā, un rezultātā tika sintezēti daži jauni izomēri un kompleksi. In vivo pētījumā tika noteikti vai provizoriski novērtēti prototipa komponenti (10) un metabolīti (44) žurku plazmā, izkārnījumos un urīnā. II fāzes vielmaiņas procesi bija galvenās kaskādes, lielākā daļa metabolītu bija saistīti ar ehinakozīdu vai akteozīdu, piemēram, HT, CA un to atvasinājumiem 3-hidroksifenilpropionskābe 3-HPP. Šie metabolīti var vieglāk uzsūkties plazmā un tiem ir labāka ārstnieciskā iedarbība. Iegūtie rezultāti parādīja, ka CD ķīmiskais sastāvs ir atšķirīgs un ietekmēja savienojuma izvietojumu in vitro un in vivo.

Saīsinājumi

PhGs: feniletanoīdu glikozīdi; CD: Cistanche deserticola; CMM: ķīniešu Materia Medica; TCM: tradicionālā ķīniešu medicīna; CD-NP: Gistanche deserticola Apstrādāts, tvaicējot ar rīsu vīnu normālā spiedienā; CD-HP: Cistanche deserticola Apstrādāts, tvaicējot ar rīsu vīnu zem augsta spiediena; UPLC-Q-TOF-MS: īpaši augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfija kopā ar TOF-MS; PCA: galveno komponentu analīze; VIP: mainīga nozīme projekcijā; CA: Caffeicacid; HA: hidroksitirozols.

Pateicības

Nav piemērojams.

Autoru ieguldījums

LZ, LBN, SJ piedalījās rokraksta izstrādē, rakstīšanā. RJ, LPP palīdzēja veikt eksperimentus ar dzīvniekiem un izstrādāja un pabeidza visus attēlus un tabulas. ZC, HY. ITZ palīdzēja izstrādāt un veikt šo pētījumu un pārskatīja manuskriptu. Visi autori izlasīja un apstiprināja galīgo manuskriptu.

Finansējums

Šo darbu atbalstīja Ķīnas Nacionālais dabaszinātņu fonds (granta Nr.: 81874345) un Liaoningas provinces Dabaszinātņu fonds (Dotācijas Nr.: 2020-MS-223).

Datu un materiālu pieejamība

Pašreizējā pētījuma laikā izmantotās un/vai analizētās datu kopas pēc pamatota pieprasījuma ir pieejamas no attiecīgā autora.

Deklarācijas

Ētikas apstiprinājums un piekrišana dalībai

Ētisks apstiprinājums eksperimentālo dzīvnieku izmantošanai šajā pētījumā tika iegūts Liaoningas Tradicionālās ķīniešu medicīnas universitātes Medicīnas ētikas komitejā (apstiprinājuma numurs: 2018YS(DW)-044-01). Visas eksperimentālās procedūras šajā pētījumā bija saskaņā ar ētikas standartiem. Liaoningas Tradicionālās ķīniešu medicīnas universitātes medicīnas ētikas komiteja.

Piekrišana publicēšanai

Nav piemērojams.

Konkurējošas intereses

Autori paziņo, ka viņiem nav interešu konfliktu, ko atklāt.

Sīkāka informācija par autoru

"Farmācijas nodaļa, Liaoningas tradicionālās ķīniešu medicīnas universitāte, Dalian, Liaoning, Ķīna." Monos grupas Zāļu pētniecības institūts, Ulaanbatora 14250, Mongolija.

Saņemts: 2021. gada 31. maijā Pieņemts: 2021. gada 17. septembrī Publicēts tiešsaistē: 2021. gada 28. septembrī

Zhe Li1, Lkhaasuren Ryenchindorj2, Bonan Liu1, Ji Shi1*, Chao Zhang1, Yue Hua1, Pengpeng Liu1, Guoshun Shan1 un Tianzhu Jia1

Atsauces

1. Ķīnas Farmakopejas komisija. Pharmacopeia of The People's Republic of China, vol. I. Pekina: Ķīnas medicīnas zinātnes prese; 2020. lpp. 140.
2. Li Z, Lin H, Gu L, Gao J, Tzeng CM. Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): viena no labākajām tradicionālās ķīniešu medicīnas farmaceitiskajām dāvanām. Front Pharmacol. 2016;7:41.
3. Liu BN, Shi J, Zhang C, Li Z, Hua Y, Liu PP, Jia TZ. Dažādu Fresh Cistanche deserticola žāvēšanas apstrādes metožu ietekme uz tā sastāvdaļu saturu. J Chin Med Mater. 2020;10:2414–8.
4. Liu BN, Shi J, Jia TZ, Lv TT, Li Z. Optimization of the high-pressure steaming process for Cistanches Herba. Chin Trad Patent Med. 2019; 11:2576–80.
5. Fan YN, Huang YQ, Jia TZ, Wang J, La-Sika, Shi J. Cistanches herba ietekme pirms un pēc apstrādes uz D-galaktozes izraisītu novecojošu žurku pretnovecošanās funkciju un imūno funkciju. Chin Arch Trad Chin Med, 2017; 11:2882–2885.
6. Gao YJ, Jiang Y, Dai F, Han ZL, Liu HY, Bao Z, Zhang TM, Tu PF. Pētījums par caureju veicinošām sastāvdaļām Cistanche deserticola YMCA. Mūsdienu Chin Med. 2015;17(4):307–10.
7. Liu BN, Shi J, Li Z, Zhang C, Liu P, Yao W, Jia T. Pētījums par Cistanche deserticola un tās rīsu vīna tvaicēšanas produktu neiroendokrīni imūnsistēmu funkciju glikokortikoīdu izraisītā žurku modelī. Evid Based Complement Alternatīvā Med. 2020;22:5321976.
8. Guo Y, Wang L, Li Q, Zhao C, He P, Ma X. Enhancement of nieru uzmundrinoša funkcija peles modelī, izmantojot Cistanches herba, kas ātri žāvēta vidēji augstā temperatūrā. J Med Food. 2019;22(12):1246–53.
9. Wang T, Zhang X, Xie W. Cistanche deserticola YC Ma, "Tuksneša žeņšeņs": pārskats. Esmu J Chin Med. 2012;40(6):1123–41.
10. Fu Z, Fan X, Wang X, Gao X. Cistanches Herba: pārskats par tās ķīmijas, farmakoloģijas un farmakokinētikas īpašībām. J Etnopharmacol kol. 2018; 219:233–47.
11. Lei H, Wang X, Zhang Y, Cheng T, Mi R, Xu X, Zu X, Zhang W. Herba Cistanche (Rou Cong Rong): tās fitoķīmijas un farmakoloģijas pārskats. Chem Pharm Bull. 2020;68(8):694–712.
12. Geng X, Tian X, Tu P, Pu X. Ehinakozīda neiroprotektīvie efekti Parkinsona slimības peles MPTP modelī. Eur J Pharmacol. 2007;564:66–74.

13. Deng M, Zhao JY, Ju XD, Tu PF, Jiang Y, Li ZB. Tubulozīda B aizsargājošā iedarbība uz TNF alfa izraisītu apoptozi neironu šūnās. Acta Pharmacol Sin. 2004;25(10):1276–84.
14. Nan ZD, Zhao MB, Zeng KW, Tian SH, Wang WN, Jiang Y, Tu PF. Pretiekaisuma iridoīdi no Cistanche deserticola kātiem, kas kultivēti Tarimas tuksnesī. Chin J Nat Med. 2016;14(1):61–5.
15. Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y, Tu PF. Feniletanoīdu glikozīdi ar pretiekaisuma iedarbību no Cistanche deserticola kātiem, kas kultivēti Tarimas tuksnesī. Fitoterapija. 2013; 89:167–74.
16. Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Yuan D, Yoshikawa M, Hayakawa T, Muraoka O. Iridoīds un acikliskie monoterpēna glikozīdi, kankanosīdi L, M, N, O un P no Cistanche tubulosa. Chem Pharm Bull. 2010;58(10):1403–7.
17. Li SL, Song JZ, Qiao CF u.c. Jauna stratēģija, lai ātri izpētītu iespējamos ķīmiskos marķierus, lai ar UHPLC-TOF-MS palīdzību atšķirtu neapstrādātu un apstrādātu Radix Rehmanniae ar daudzfaktoru statistisko analīzi. J Pharm Biomed Anal. 2010;51(4):812–23.
18. Peng F, Chen J, Wang X, Xu CQ, Liu TN, Xu R. Izmaiņas feniletanoīdu glikozīdu līmeņos, antioksidantu aktivitātē un citās kvalitātes pazīmēs Cistanche deserticola šķēlēs, apstrādājot ar tvaiku. Chem Pharm Bull. 2016; 64:1024–30.
19. Ma ZG, Tan YX. Sešu feniletanoīdu glikozīdu saturs mainās tvaicēšanas laikā ar vīnu Desertliving Cistanche. Chin Trad Pat ent Med. 2011;33(11):1951–4.
20. Peng F, Xu R, Wang X, Xu C, Liu T, Chen J. Tvaicēšanas procesa ietekme uz pēc novākšanas cistanche deserticola kvalitāti medicīniskai lietošanai žāvēšanas laikā saulē. Biol Pharm Bull. 2016;39(12):2066–70.
21. Cui Q, Pan Y, Zhang W, Zhang Y, Ren S, Wang D, Wang Z, Liu X, Xiao W. Diētiskā akteozīda metabolīti: profili, izolācija, identificēšana un hepatoprotektīvas spējas. J Agric Food Chem. 2018; 66(11): 2660–8.
22. Cui Q, Pan Y, Bai X, Zhang W, Chen L, Liu X. Cistanche tubulosa ehinakozīda un akteozīda metabolītu sistemātisks raksturojums žurku plazmā, žultī, urīnā un izkārnījumos, pamatojoties uz UPLC-ESI-Q-TOF -JAUNKUNDZE. Biomed Chromatogr. 2016;30(9):1406–15.
23. Bertelli M, Kiani AK, Paolacci S, Manara E, Kurti D, Dhuli K, Bushati V, Miertus J, Pangallo D, Baglivo M, Beccari T, Michelini S. Hidroksitirosols: dabisks savienojums ar daudzsološām farmakoloģiskām aktivitātēm. J Biotechnol. 2020; 309:29–33.
24. Touaibia M, Jean-François J, Doiron J. Cafeic Acid, daudzpusīga farmakofora: pārskats. Mini Rev Med Chem. 2011;11(8):695–713.

Izdevēja piezīme

Springer Nature joprojām ir neitrāla attiecībā uz jurisdikcijas prasībām publicētajās kartēs un institucionālajās piederībās.