Abstrakts

Fons: Rosa rugosa Thunb. fitoķīmiskās sastāvdaļas un bioloģiskās aktivitātes. var. plena tika pētītas Regal ziedu šūnu sulas (RFCS).

Saskaņā ar attiecīgiem pētījumiem,cistancheir izplatīts augs, kas pazīstams kā "brīnumaugs, kas pagarina mūžu". Tās galvenā sastāvdaļa ircistanozīds, kam ir dažādi efekti, piemēram,antioksidants, pretiekaisuma, unimūnās funkcijas veicināšana. Mehānisms starp cistanche un ādas balināšanu slēpjas cistanche antioksidanta iedarbībāglikozīdi. Melanīns cilvēka ādā veidojas, oksidējoties tirozīnam, ko katalizētirozināze, un oksidācijas reakcijai ir nepieciešama skābekļa līdzdalība, tāpēc skābekļa brīvie radikāļi organismā kļūst par svarīgu faktorukas ietekmē melanīna ražošanu. Cistanche satur cistanozīdu, kas ir antioksidants un var samazināt brīvo radikāļu veidošanos organismā, tādējādikavē melanīna ražošanu.

Noklikšķiniet uz Cistanche tablešu priekšrocības

Vairāk informācijas:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Metodes:Gaistošās sastāvdaļas, piemēram, linalols, feniletilspirts, citronelols un -bisabolols, tika identificētas ar GCMS. Hiperozīda, kaempferola -3-O-rutinoīda, rutīna un luteolīna saturs, kā arī kopējais flavonoīdu saturs RFCS tika noteikts ar HPLC un HPLC-MS. Kopējais polifenolu saturs tika novērtēts ar Folin-Ciocalteu kolorimetrisko metodi. RFCS un standartu antioksidantu aktivitātes tika novērtētas ar DPPH un ABTS radikāļu attīrīšanas testiem. Rožu paraugu un standartvielas tirozināzes inhibējošās aktivitātes tika noteiktas ar spektrofotometrisko metodi. RFC pretmikrobu iedarbība tika novērtēta pēc minimālās inhibējošās koncentrācijas (MIC) un minimālās baktericīdās koncentrācijas (MBC) vai minimālās fungicīdu koncentrācijas (MFC).

Rezultāti:Rožu frakcijā bija augsts bioloģiski aktīvo sastāvdaļu saturs. Kopējais gaistošo savienojumu saturs RFCS bija aptuveni 48,21 ± 2,76 ng/ml. Kopējais fenolskābes saturs un kopējais flavonoīdu saturs bija attiecīgi 0,31 ± 0.01 mg/mL un 0,43 ± 0,01 mg/mL. Tā IC50 vērtība DPPH testā bija 1120 ± 42 ug/mL, un tā IC50 vērtība ABTS radikāļu attīrīšanas aktivitātei bija 1430 ± 42 ug/mL.RFCS spēcīgi inhibēja L-tirozīna oksidāciju ar IC50 vērtību 5170 ug/mL. . Katram RFCS identificētam savienojumam bija plaša spektra pretmikrobu aktivitāte. F. nucleatum bija visjutīgākais pret RFCS ar MIC 64 ug/ml un MBC 250 ug/ml.

Secinājumi:Pateicoties tā rozei līdzīgajam aromātam, feniletilspirtu var kombinēt ar linalolu, lai to izmantotu kā dabisku ādas balināšanas līdzekli un ādas kopšanas piedevu farmācijas rūpniecībā.

Atslēgvārdi:RFCS, fitoķīmiskās sastāvdaļas, antioksidants, pretmikrobu līdzeklis, tirozināzi inhibējošas aktivitātes

Fons

Rosa rugosa Thunb zieds. var. plena Regal tiek izmantots ne tikai smaržu ražošanā, bet arī Āzijas valstīs tūkstošiem gadu izmantots kā veselīgs ēdiens un zāles. Turklāt rozes satur aktīvās vielas, piemēram, ēteriskās eļļas, polifenolus, flavonoīdus un antocianīnus, kas ir pazīstami ar savu pretmikrobu, pretiekaisuma, hipoglikēmisko un antioksidantu iedarbību [1–4]. Rozes var patērēt dažādos veidos, piemēram, rožu tējas, rožu cepumi un rožu eļļas. Ražojot rožu tēju vai žāvētas ziedu ziedlapiņas, zemā temperatūrā žāvējot rožu ziedus (Rosa rugosa cv. Plena), veidojas kondensāts, ko sauc par "rožu ziedu šūnu sulu" (RFCS). RFCS iznīcināšana ir liela resursu izšķērdēšana, jo tajā ir augsts polifenolu un rožu ēteriskās eļļas saturs, kam ir ļoti augsta bioloģiskā aktivitāte. Turklāt vides piesārņojumu var izraisīt nepareiza RFCS iznīcināšana, jo to ir grūti sadalīt. Turklāt ēteriskās eļļas un polifenoli ir aktīvās sastāvdaļas farmācijas, kosmētikas un pārtikas rūpniecībā. Žāvējot 1 kg neapstrādātu rožu ziedlapiņu vai ziedu pumpuru materiāla, var iegūt aptuveni 0,2 l kondensāta. Vienā rūpnieciskās žāvēšanas mikroviļņu krāsnī Pingjinā vien tiek izmantoti aptuveni 40,000 kg rožu ziedu pumpuru un 20,000 kg ziedlapu. Līdz šim neviens pētījums nav ziņojis par piemērotu metodi RFCS un tajā esošo bioaktīvo savienojumu iznīcināšanai.

Rožu eļļas destilācijas notekūdeņi (RODW) ir vēl viens blakusprodukts kaltētu rožu ziedu tvaika destilācijā, lai iegūtu rožu eļļu. Iepriekšējos pētījumos RODW tika koncentrēts, lai radītu ar polifenoliem bagātinātu atlikumu, kas satur negaistošus fenola savienojumus [5]. Turklāt RODW polifenola frakcija var spēcīgi inhibēt sēņu tirozināzi (IC5{5}} vērtība 0,41 ug/ml) [6]. Tādējādi RODW esošos polifenolus var izmantot kā bioaktīvu vielu, lai mazinātu hiperpigmentāciju.

Ar pārtiku saistītas patogēnās baktērijas izraisa pārtikas izraisītas slimības miljoniem cilvēku un pat simtiem nāves gadījumu katru gadu tikai ASV, un ar to saistītās izmaksas kopā ir aptuveni 2,4 miljardi USD [7]. Tādējādi pieaugošais pieprasījums pēc veselīgiem, netoksiskiem un efektīviem pretmikrobu līdzekļiem ir iedvesmojis veikt pētījumus par daudzfunkcionālām, dabiski ražotām pārtikas piedevām. Lai gan rožu eļļa galvenokārt satur ēteriskās eļļas, kas pazīstamas ar savu pretmikrobu iedarbību [8], RFC pretmikrobu iedarbība nav pētīta.

Ziedos esošajiem fenola savienojumiem un gaistošajām vielām ir spēcīga bioloģiska iedarbība, piemēram, antioksidanta un tirozināzes inhibējoša iedarbība [9]. Papildu metožu izstrāde tirozināzes aktivitātes inhibēšanai ir aktīva pētījumu joma funkcionālās kosmētikas un pārtikas rūpniecībā, pateicoties tirozināzes balinošajam efektam un spējai kontrolēt brūnināšanu [10, 11]. Antioksidanti var samazināt tādu veselības problēmu kā vēzis, novecošanās un aterosklerozes risku, samazinot reaktīvo skābekļa sugu (ROS) līmeni [12]. Ir ziņots, ka dažiem antioksidantiem, piemēram, askorbīnskābei, ir arī balinoša iedarbība [11].

Mūsu sākotnējā testā tika konstatētas Rosa rugosa Thunb RODW pretmikrobu, antioksidantu un tirozināzes inhibējošās aktivitātes. var. plena Regal tika novērtēts [13]. Tomēr literatūrā nav ziņojumu, kas pētītu Rosa rugosa cv. RFC fitoķīmisko sastāvu un bioloģiskās aktivitātes. Plēna. Šajā pētījumā tika pētīts (1) kopējo fenolu, flavonoīdu, pilnīgi cieto un gaistošo vielu saturs; (2) tika pārbaudīta katra aktīvā savienojuma un RFCS antibakteriālā (seši celmi) un pretsēnīšu (viens celms) aktivitāte, antioksidanta un tirozināzi inhibējošās aktivitātes. Mūsu rezultāti palīdzēs uzlabot rožu vērtību ārstniecības un kosmētikas jomā [13–16].

Metodes

Ķimikālijas

Feniletilspirts, -bisabolols, -terpineols, citronelols, mikonazola nitrāts, tetraciklīna hidrohlorīds, mentols un kampars tika iegādāti no J&K Scientific Ltd. (Pekina). Kojskābe, hiperozīds, kvercetīns, gallskābe, kaempferol-3-O-acetilglikozilramnosīds un kaempferola-3-O-glikozīds tika iegādāti no uzņēmuma Sigma (Šanhaja, Ķīna). Anaerobā asins agara bāzes barotne (CDC), aktinomicītu buljona barotne (GAM buljons), smadzeņu sirds infūzijas (BHI) buljons un uzturvielu agars tika iegūti no Suolaibao Biotech Co., Ltd. (Pekina, Ķīna). Pārējās ķīmiskās vielas bija analītiskas vai hromatogrāfiskas kvalitātes.

Parauga sagatavošana 

Rosa rugosa Thunb. var. plena Regal tika iegūts no Fragrant Rose Biological Technology Co., LTD Pingjinā. Pirms analīžu veikšanas paraugi tika filtrēti caur 0,42 μm mikrofiltrācijas membrānu. Kopējais RFCS cieto vielu saturs tika novērtēts ar liofilizēšanas palīdzību. Rosa rugosa Thunb identifikācija. var. plena Regal identificēja vecākais agronoms Guo un apstiprināja kupona paraugā (Ser. Nr. 0712), kas deponēts Herbārijā, Pingyin Rožu zinātņu institūtā.

HPLC analīzes

Polifenolu sastāvdaļu koncentrācija ekstraktā tika noteikta ar HPLC un UV analīzēm. HPLC iekārta bija LC-20A HPLC sistēma (Shimadzu Corporation, Kioto, Japāna), un tā bija aprīkota ar Ultrasphere 5 C18 kolonnu (4,6 mm × 250 mm, Ultrasphere Co., Ltd., Berkšīra, Apvienotā Karaliste). ). Mobilā fāze bija ūdens (A) un acetonitrila (B) gradienta eluēšana, un tā tika ieprogrammēta šādi: sākot ar 10 procentiem B 10 minūtes, 10–25 procenti B no 15 līdz 20 minūtēm, 25–30 procenti B no 20 minūtēm. un 25 minūtes, 30–60 procenti B no 25 līdz 50 minūtēm, 60–10 procenti B no 50 līdz 51 min un 10 procenti B no 51 līdz 55 min. Kustīgās fāzes plūsmas ātrums tika uzturēts 1 ml/min, detektora viļņa garums tika iestatīts uz 350 nm, kolonnas krāsns tika iestatīts uz 25 grādiem, un parauga injekcijas tilpums bija 10 μL.

HPLC-ESI-MS nosacījumi

Elektrosmidzināšanas jonizācijas (ESI) masas spektrometrijas (MS) dati tika reģistrēti ar Agilent-LC-1100 instrumentu (Agilent, ASV). HPLC apstākļi HPLC-ESI-MS analīzei bija tādi, kā aprakstīts iepriekš. ESI parametri bija šādi: sadursmes gāzes (N2) plūsmas ātrums tika uzturēts 10 ml/min, kolonnas krāsns bija 25 grādi, dati iegūti negatīvo jonu režīmā [MH]−, skenēšana veikta virs m/z 50 –2000, izsmidzināšanas spriegums bija 4,5 kV, kapilārais spriegums bija 10 V, kapilārā temperatūra bija 250 grādi. Sastāvdaļas paraugā tika identificētas, pamatojoties uz to masas spektra datiem un aiztures laiku.

GC/MS analīze

Gaistošās sastāvdaļas RFCS noteica ar Shimadzu GC/MS modeļa QP2010 Ultra sistēmu, kas aprīkota ar Rtx-5MS (30 m × 0,25 mm, plēves biezums 0,25 μm) kapilārā kolonna. Cepeškrāsns programma bija šāda: sākot no 60 grādiem, sildīšana līdz 120 grādiem ar ātrumu 1,7 grādi C/min, karsēšana līdz 200 grādiem ar ātrumu 2,5 grādi/min, sildīšana līdz 260 grādiem ar ātrumu 8 grādi/min un beidzot noturot 260 grādos 2 min. Par nesējgāzi tika izmantots hēlijs, un plūsmas ātrums bija 1,0 ml/min. Inžektora un detektora temperatūra tika uzturēta attiecīgi 250 grādi un 280 grādi. Dalītā injekcija tika veikta bezdalīšanas režīmā. Jonu avota temperatūra bija 250 grādi un tā jonizācijas enerģija bija 70 eV. Masas diapazons bija 35–500 Da. Sastāvdaļas paraugā tika identificētas, pamatojoties uz to masas spektra datiem un aiztures laiku.

Standarta līkņu sagatavošana

Feniletilspirta (2,23 mg), -bisabolola (2,1 mg), -terpineola (5,23 mg), citronelola (1,52 mg), mentola (1,32 mg) un kampara šķīdumus atsevišķi sagatavoja 1 ml acetonitrila. Pēc tam izejas šķīdumus atšķaidīja ar desmit tūkstošiem līdz vienam miljardam koeficientiem ar etilacetātu, un 1 μL katra parauga tika analizēts ar GS/MS. Kojskābes (1,12 mg), hiperozīda (1,07 mg), kvercetīna (1,07 mg), gallskābes (1,29 mg) un kaempferola -3-O-acetilglikozilramnozīda (1,15 mg) šķīdumus pagatavoja atsevišķi 1 ml metil. alkohols. Izejas šķīdumi tika atšķaidīti ar koeficientiem 2 ar metilspirtu, un 10 μL katra šķīduma tika analizēti ar HPLC. Katra darba šķīduma koncentrācija tika analizēta trīs reizes. Kalibrēšanas līknes tika attēlotas kā pīķa laukumi pret katra standarta koncentrāciju. Standartvielas saturs katrā paraugā tika aprēķināts, izmantojot kalibrēšanas līknes.

Kopējā fenola, flavonoīdu un kopējā cieto vielu satura noteikšana

Kopējais RFCS fenola saturs tika novērtēts ar Folin-Ciocalteu kolorimetrisko metodi [17]. Kopējais fenola saturs tika noteikts, salīdzinot ar gallskābes standarta līkni. Kopējais flavonoīdu saturs RFCS paraugos tika novērtēts ar HPLC, kas nodrošināja visu pārbaudīto flavonoīdu savienojumu kopējo daudzumu. 10- ml RFCS paraugs tika liofilizēts, lai noteiktu kopējo cieto vielu saturu. Katra noteikšana tika veikta trīs eksemplāros.

Antioksidanta īpašības

DPPH radikāļu attīrīšanas aktivitāte

RFCS un standartu antioksidanta aktivitāte tika novērtēta ar DPPH radikāļu attīrīšanas aktivitāti, izmantojot nedaudz modificētu iepriekš ziņotās metodes versiju [18]. Īsumā, 10 μL rožu paraugu alikvotas daļas (1000 ug/ml līdz 62,5 ug/ml) sajauca ar 190 μL 50% etanola, kas satur 0,4 mM DPPH, un inkubēja tumsā. 30 min. Supernatantu alikvotas (100 μL) tika pārnestas 96-iedobes mikroplāksnē, un katra absorbcija tika reģistrēta pie 517 nm, izmantojot spektrofotometru Spectramax Plus384 UV-Vis (Molecular Devices, Sunnyvale, Kalifornija, ASV). Kā pozitīvā kontrole tika izmantota askorbīnskābe (1000 ug/ml līdz 0,05 ug/ml), un DPPH šķīdums bez parauga tika izmantots kā negatīvā kontrole. Tika noteiktas IC50 vērtības, kas atspoguļo rožu paraugu un standartvielas koncentrāciju, pie kurām tika inhibēti 50 procenti DPPH radikāļa. Pārbaudes tika veiktas trīs eksemplāros, un DPPH attīrīšanas procentuālais daudzums tika aprēķināts, izmantojot šādu vienādojumu.

ABTS radikālas noņemšanas noteikšana

RFCS ABTS tests tika veikts saskaņā ar iepriekš ziņotās metodes modificētu versiju [19]. Īsumā, izejas šķīdumi tika iegūti, sajaucot vienādos daudzumos 7, 4 mM ABTS ● plus šķīdumu un 2, 6 mM kālija persulfāta šķīdumu, un maisījumu inkubēja istabas temperatūrā 12 stundas tumsā. Pēc tam šķīdums tika līdzsvarots ar 1 ml ABTS● plus šķīduma ar 50 procentiem etanola, kas kalpoja kā pozitīva kontrole. Šķīduma absorbcija pie 734 nm bija 1,17 ± 0.02 vienības. Rožu paraugu alikvotas (10 μL) (1000 ug/ml līdz 62,5 ug/ml) sajauca ar 1,0 ml atšķaidīta ABTS• plus šķīduma. Maisījumu enerģiski samaisa un inkubēja 30 grādu temperatūrā 30 minūtes. Pēc tam, izmantojot spektrofotometru, tika mērīta absorbcija pie 520 nm ar ierosmes viļņa garumu 734 nm. Pozitīvais standarts bija Trolox (2000 ug/ml līdz 0,05 ug/ml).

Inhibīcija( procenti )={(tukšā parauga absorbcija — parauga absorbcija)/tukšā parauga absorbcija} × 100

Tirozināzes inhibējošās aktivitātes noteikšana

Rožu paraugu un standartvielas tirozināzes inhibējošās aktivitātes tika noteiktas ar spektrofotometrisko metodi [17]. Vispirms 300 μL dažādu koncentrāciju alikvotas (1000 ug/mL līdz 62,5 ug/mL) no katra parauga tika atšķaidīti ar 700 μL 0,175 Tika pievienots M nātrija fosfāta buferšķīdums (pH 6,8), pēc tam tika pievienots 1,0 ml 10 mM DOPA šķīduma un 1,0 ml sēņu tirozināzes (220 vienības/ml). Etanolu (300 μL, 50 procenti) un kojskābi (2000 ug/mL līdz 0,1 ug/ml) izmantoja attiecīgi kā tukšo standartu un pozitīvo standartu. Reakcijas maisījums tika maisīts un uzturēts 37 grādu temperatūrā 15 minūtes, un pēc tam dopahroma absorbcijas maksimums (iestatīts pie 479 nm) tika mērīts, izmantojot mikroplašu lasītāju (Molecular Devices, Sunnyvale, Kalifornija, ASV). Testi tika veikti trīs eksemplāros, un tirozināzes inhibīcijas aktivitātes vērtība tika aprēķināta, kā aprakstīts iepriekš.

Pretmikrobu īpašības

Antibakteriālās un pretsēnīšu pārbaudes

Antimikrobiālā aktivitāte tika mērīta ar Xue [20] aprakstīto metodi. Visi standarta celmi tika iegūti no Guandunas mikrobioloģijas kultūras centra (Guandžou, Ķīna). Listeria ivanovii (ATCC 19119) kultivēja BHI, Salmonella enteritidis (ATCC 14028), Staphylococcus aureus (ATCC 25923) un Escherichia coli (ATCC 25922) kultivēja barības agarā (NA) 24 stundas un 37 grādu temperatūrā. Candida albicans (ATCC 10231) tika kultivēta PHB 37 grādu temperatūrā 24 stundas. Propionibacterium acnes (ATCC 6919) un Fusobacterium kodols um (ATCC 10953) tika kultivētas CDC agarā 37 grādu temperatūrā 48 stundas YQX-II anaerobā inkubatorā (Šanhaja, Ķīna). Galīgais šūnu skaits l ml buljona bija aptuveni 106 koloniju veidojošās vienības (KVV/ml). 10 mg/ml mikonazola nitrāta un tetraciklīna hidrohlorīda šķīdums ūdenī tika izmantots kā pozitīva kontrole attiecīgi pret sēnītēm un baktērijām.

Minimālās inhibējošās koncentrācijas (MIC) un minimālās baktericīdās koncentrācijas (MBC) vai minimālās fungicīdās koncentrācijas (MFC) noteikšana

MIC un MBC vai MFC vērtības tika noteiktas, kā iepriekš aprakstījis Xue. Īsumā, 100 μL atšķaidījumi (apmēram 100, 000 KVV/mL) Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Fusobacterium nucleatum un Candida albicans barības buljonā un Listeria ivanovium tika inkulēti mikrobaktēriju brokastīs un Propioniterīnā. plāksnes. Pēc tam pievienoja 100 μL testa savienojuma šķīdumu alikvotas daļas pēc divkāršas sērijas atšķaidīšanas ar barības vielu buljonu (no 2 mg/ml līdz 3 ug/ml). Kā kontroles tika izmantoti buljoni ar 5% (v/v) DMSO. Petri trauciņus inkubēja 37 grādu temperatūrā 24 stundas, izņemot Propionibacterium acnes un Fusobacterium nucleatum, kuras inkubēja 37 grādu temperatūrā 48 stundas. MIC tika reģistrēta kā zemākā parauga koncentrācija, kas neuzrāda nosakāmu augšanu. Lai noteiktu MBC vai MFC vērtības attiecībā uz baktēriju vai sēnīšu augšanu, 10 μL testējamo savienojumu subinhibējošās koncentrācijas tika inkubētas CDC vai GMA agara plāksnēs 24 vai 48 stundas. Katra noteikšana tika veikta trīs eksemplāros.

Datu analīze

Dati tiek parādīti kā trīs atkārtojumu vidējais rādītājs ± standartnovirze. Vienvirziena ANOVA ar Dankana vairāku diapazonu testu tika izmantota, lai analizētu rezultātus attiecīgi ar SPSS 13.0 un Sigma Plot 10.0, izmantojot datoru (Lenovo, Yangtian B). 41) aprīkots ar Win 7 operētājsistēmu. Tika noteikts, ka p-vērtība < 0,05 ir statistiski nozīmīga.

rezultāti un diskusija

Gaistošās vielas saturs

Tā kā RFCS paraugiem bija specifisks rožu aromāts, mēs analizējām un salīdzinājām tā etilacetāta ekstrakta gaistošās sastāvdaļas. RFCS etilacetāta ekstrakta gaistošo komponentu saturs tika noteikts ar GC/MS un analizēts, salīdzinot ar četrām standarta līknēm, un rezultāti ir izteikti kā ng/mL.

Sešas galvenās sastāvdaļas tika identificētas vienlaikus atbilstoši to standarta aiztures laikam un MS jonu fragmentiem. Standartvielas GC hromatogrammas RFC ir parādītas 1. attēlā. Katra elementa saturs katrā paraugā ir parādīts 1. tabulā. Kā parādīts 1. attēlā, gradienta temperatūras programmā tika veiksmīgi atdalīti seši savienojumi. Kopējais gaistošo savienojumu saturs RFCS bija aptuveni 48,21 ± 2,76 ng/mL un seši galvenie gaistošo savienojumu veidi, tostarp feniletilspirts (40,48 ± 2,24 ng/mL), citronelols (7,83 ± {{). Tika identificēti 16}},77 ng/mL), -bisabolols (0.08 ± 0,01 ng/mL) un feniletilacetāts (11,20 ± 0,89 ng/mL) (nav konstatēti divi maksimumi). identificēts un linalola saturs ir reti sastopams). Iepriekšējos pētījumos par gaistošajiem savienojumiem RODW, GC-MS, precīzāk HS-SPME/GC/MS, metodes ir plaši izmantotas [13, 21–24]. Atšķirībā no šiem iepriekšējiem pētījumiem, mūsu pētījums ziņo par komponentu absolūto saturu. Lai gan bija plašs gaistošo savienojumu klāsts, dominējošajos komponentos nebija atšķirību. Galvenie gaistošie savienojumi RFCS bija monoterpēna spirti (citronellols, linalols un feniletilspirts, kas ir raksturīgi mazām rozēm). RFC dominējošo komponentu veidi ir līdzīgi RODW komponentiem, taču ir būtiska atšķirība komponentu saturā [13]. Viens no iespējamiem šo atšķirību iemesliem ir tas, ka lielākā daļa gaistošo komponentu tika zaudēti rožu tējas žāvēšanas procesā.

Kopējais fenola, flavonoīdu un cieto vielu saturs

Flavonoīdi, to aiztures laiki un standarta savienojumu kalibrēšanas līknes RFCS, kas noteiktas, izmantojot HPLC, ir parādīti 2. attēlā. Gradienta temperatūras programmā tika veiksmīgi atdalīti četri savienojumi, kā parādīts 2. attēlā. Flavonoīdu kalibrēšanas līknes un regresijas koeficienti tika parādīti 2. tabulā. Tika konstatēts, ka atsauces savienojumiem bija laba linearitāte (R2 Lielāks vai vienāds ar 0.997). Tika konstatēts, ka RFCS satur trīs galvenās sastāvdaļas, proti, hiperozīdu (0.18 ± 0.01 mg/ml), kaempferolu{{10}}O -rutinēts (0,12 ± 0.{{20}}1 mg/ml) un rutīns (0,23 ± 0). 01 mg/ml). Kopējais fenola saturs un kopējais flavonoīdu saturs bija attiecīgi 0,31 ± 0,01 mg/ml un 0,43 ± 0,01 mg/ml. Kopējais cieto vielu saturs RFCS bija 1,45 ± 0,04 mg/ml.

Iepriekšējie pētījumi ziņoja, ka dominējošie fenola un flavonoīdu savienojumi rožu rugosa tējā bija gallskābe, katehīns, epikatehīns un kvercetīns, un kopējais polifenolu saturs un flavonoīdu saturs Rosa rugosa tējas polifenola ekstraktā bija 875,2 mg/g un 610,3 mg/g. , attiecīgi [1]. Turklāt RODW sveķu frakcijās tika atrasts arī rutīns, mulflorīns B, hiperozīds, kempferols un ellagskābe [6]. Turklāt atšķirībā no iepriekšējiem pētījumiem, lai gan mūsu pētījumā tika izmantota HPLC-MS, lai noteiktu fenola un flavonoīdu savienojumus RODW, šajā un iepriekšējos pētījumos tika atrasts tikai viens no dominējošajiem savienojumiem, kaempferol-3-O-rutinoīds [6 , 13]. Neviens no fenola savienojumiem netika atklāts RFCS ar HPLC galvenokārt tāpēc, ka fenolu un flavonoīdu koncentrācija RFCS ir ļoti zema, un tāpēc tos nevar noteikt ar HPLC. Šīs RFCS cietās vielas bija mazu molekulu maisījums.

Antioksidanta spēja 

3. tabulā parādītas RFCS un standarta savienojumu DPPH IC50 vērtības. Flavonoīdi ar IC50 vērtību < 1 ug/mL, ieskaitot hiperozīdu (IC50 vērtība 0,695 ± 0.021 ug/mL). ), kaempferol-3-O-rutinosīds (IC50 vērtība 0,808 ± 0.024 ug/ml) , rutīns (IC50 vērtība 0,715 ± {{60}}.017 ug/ml) un luteolīns (IC50 vērtība 0,507 ± 0,015 ug/mL), uzrādīja spēcīgākas DPPH radikāļu attīrīšanas aktivitātes nekā RFCS (IC50 vērtība 1120 ± 42 ug/ml). Atsevišķi gaistošie savienojumi, piemēram, linalols, feniletilspirts, citronelols un -bisabolols, uzrādīja vāju radikāļu attīrīšanas aktivitāti ar IC50 vērtībām > 10,000 ug/ml. Iepriekšējos ziņojumos dažādu dabisko produktu, tostarp rožu, antioksidantu aktivitātes tika attiecinātas uz fenola savienojumu saturu [25, 26]. ABTS radikāļu testu izmanto arī, lai novērtētu ūdeņradi nododošo un ķēdes pārtraucošo antioksidantu radikāļu attīrīšanas aktivitāti daudzos dabīgos produktos [27, 28]. Kā parādīts tabulā. 3, atsevišķu savienojumu un RFCS ABTS radikāļu attīrīšanas aktivitātes ir izteiktas kā ug/mL. Saskaņā ar iepriekšējiem darbiem flavonoīdiem bija ievērojami augstāka pretradikāļu aktivitāte un antioksidantu spējas nekā gaistošiem savienojumiem [8, 13]. Šajā pētījumā ABTS attīrīšanas rezultāti bija līdzīgi DPPH rezultātiem; flavonoīdu savienojumi ar IC50 vērtībām < 1 ug/mL, tostarp hiperozīds (IC50 vērtība 0,526 ± 0,014 ug/mL), kaempferol-3-O-rutinosīds (IC50 vērtība 0,719 ± 0,016 ug/mL), rutīns (IC50 vērtība) 0,621 ± 0,024 ug/mL) un luteolīns (IC50 vērtība 0,436 ± 0,026 ug/ml) uzrādīja spēcīgākas ABTS radikāļu attīrīšanas aktivitātes nekā RFCS (IC50 vērtība 1430 ± 49 ug/mL). Atsevišķi gaistošie savienojumi, piemēram, linalols, feniletilspirts, citronelols un -bisabolols, uzrādīja vāju antiradikālu aktivitāti (IC50 vērtības > 10, 000 ug/ml).

Tirozināzi inhibējošās aktivitātes

Tirozināze ir daudzfunkcionāls varu saturošs enzīms, kas atrodams sēnēs, zīdītājiem un augiem [29]. Tirozināzei ir divas atšķirīgas enzīmu aktivitātes, proti, monofenolāzes aktivitāte un difenolāzes aktivitāte [30]. Mēs veicām sākotnējo pētījumu par sēņu tirozināzes tirozināzes inhibējošo darbību. Saskaņā ar šo testu RFCS uzrādīja spēcīgas tirozināzes inhibējošās aktivitātes ar IC50 vērtību 570 ± 21 ug/ml (3. tabula). Gaistošie savienojumi, tostarp linalols, feniletilspirts, citronelols un bisabolols, arī uzrādīja no devas atkarīgu tirozināzes inhibējošo iedarbību ar IC50 vērtībām 730 ± 44 ug/mL, 315 ± 13 ug/mL, 825 ± 31 ug/mL, 635 ± 22 ug/mL, attiecīgi. Visi flavonoīdu savienojumi, proti, hiperozīds, kaempferola -3-O-rutinoīds un pat rutīns, bija spēcīgāki par kojskābi (80 ± 17 ug/ml), un tiem visiem bija IC50 vērtības zem 1 ug/ml. Līdzīgi kā Solimine ziņojumā, ar polifenoliem bagātinātajai RODW frakcijai, kas satur flavonoīdu savienojumus, ir acīmredzama tirozināzes inhibējoša aktivitāte ar IC50 vērtību 0,41 ± 0,01 ug/ml [6]. Tikmēr RFCS tirozināzes inhibējošā iedarbība ir spēcīgāka nekā RODW no Pingyin [13]. Flavonoīdu saturs veicina kopējo RODW tirozināzes inhibējošo iedarbību.

Pretmikrobu aktivitātes

Dažādu rožu frakciju, RFCS un standarta antibiotiku (tetraciklīna un hidrohlorīda) antimikrobiālās aktivitātes pētījumu rezultāti ir parādīti 4. tabulā. F. nucleatum bija visjutīgākais pret RFCS un uzrādīja MIC 64 ug/mL un MBC 250 ug/ml. MIC vērtības RFCS gan pret P. acnes, gan S. aureus bija 125 ug/ml. MIC vērtības pret citām baktērijām bija 250 ug/ml. Deviņu RFCS komponentu MIC un MBC vai MFC vērtības tika noteiktas, lai identificētu sastāvdaļas, kas ir atbildīgas par RFCS pretmikrobu iedarbību. Tika konstatēts, ka L. ivanovii un F. nucleatum ir visjutīgākie pret -bisabololu, un tiem pret šīm sugām MIC vērtības bija 8 ug/mL un MBC vērtības 32 ug/ml (4. tabula). Pēc bisabolola feniletilspirts uzrādīja zemākās MIC un MBC vai MFC vērtības starp visām RFCS sastāvdaļām. Kopumā gaistošajām sastāvdaļām bija svarīgāka loma nekā flavonoīdu savienojumiem RFCS pretmikrobu aktivitātē.

Iepriekšējie pētījumi par dažādu rožu frakciju pretmikrobu iedarbību ir ziņojuši par līdzīgiem rezultātiem [8, 28, 31]. Ēteriskā eļļa un dažādi rožu ekstrakti, tostarp ūdens ekstrakts, etanola ekstrakts, hloroforma ekstrakts, etilacetāta frakcija un butanola frakcija, piemīt plaša spektra pretmikrobu iedarbība. Izņemot etilacetāta frakciju, rožu ēteriskā eļļa ir salīdzinoši aktīvāka pret pārbaudītajām baktērijām [28]. Rožu absolūtās un ēteriskās eļļas satur augstu polifenolu un feniletilspirta līmeni, kas rada izcilas pretmikrobu īpašības [8]. Tā kā gaistošās eļļas saturs RODW ir augstāks nekā RFCS, RODW pretmikrobu iedarbība ir labāka nekā RFCS [13]. Ar polifenoliem bagātinātā ru gosa tējas frakcija varētu kavēt Escherichia coli un Pseudomonas aeruginosa kvoruma noteikšanu un bioplēves veidošanās nozīmīgumu [1]. Ir apstiprināta dažu rožu eļļas aktīvo sastāvdaļu, piemēram, linalola, citronelola un geraniola, pretmikrobu iedarbība [32, 33]. Līdz šim R. Fenghua RFCS pretmikrobu aktivitāte nav novērtēta. Šis rezultāts nepārprotami apstiprina faktu, ka augsts feniletilspirta un citu gaistošu komponentu saturs veicina RFCS pretmikrobu darbību [34].

Secinājumi

Mūsu pētījums parādīja RFCS spēcīgās antioksidantu, pretmikrobu un tirozināzi inhibējošās aktivitātes. Sakarā ar feniletilspirta rozā aromātu kombinācijā ar tirozināzi inhibējošo darbību un pretmikrobu iedarbību pret S. enteritidis pasugām enteritidis, C. albicans un P. acnes, RFCS var izmantot kā dabisku ādu balinošu un ādas kopšanas piedevu. kosmētikas nozarē. Turklāt, pateicoties tā antioksidanta iedarbībai un pretmikrobu iedarbībai pret L. ivanovii, S. pasugām, E. coli un S. aureus, RFCS var izmantot kā dabisku konservantu un pretmikrobu līdzekli pārtikas un farmācijas rūpniecībā.

Pateicības

Paldies Fragrant Rose Biological Technology Co., LTD Pingjinā par RFCS nodrošināšanu.

Finansējums

Šo darbu atbalstīja Žeņšeņa stādīšanas resursu kolekcija un inovācija (Nr. 20151FDA31290).

Datu un materiālu pieejamība

Pašreizējā pētījuma laikā izmantotās un/vai analizētās datu kopas pēc pamatota pieprasījuma ir pieejamas no attiecīgā autora.

Autoru ieguldījums

GR, GZ un PX izstrādāja pētījumu. GR un GZ bija atbildīgi par datu vākšanu un datu ievadi. PX un XS analizēja datus un uzrakstīja manuskriptu. Visi autori izlasīja un apstiprināja galīgo manuskriptu.

Ētikas apstiprinājums un piekrišana dalībai

Šajā nodaļā nav ietverti pētījumi ar cilvēkiem vai dzīvniekiem, ko veicis neviens no autoriem, un nav iesaistīta informēta piekrišana.

Piekrišana publicēšanai

Nav piemērojams.

Konkurējošas intereses

Autori paziņo, ka viņiem nav konkurējošu interešu.

Izdevēja piezīme

Springer Nature joprojām ir neitrāla attiecībā uz jurisdikcijas prasībām publicētajās kartēs un institucionālajās piederībās.

Atsauces

1. Zhang JM, Rui X, Wang L, Guan Y, Sun XM, Dong MS. Polifenola ekstrakts no Rosa rugosa tējas kavē baktēriju kvoruma noteikšanu un bioplēves veidošanos. Pārtikas kontrole. 2014;42:125–31.

2. Tursun X, Zhao YX, Talat Z, Xin XL, Tursun A, Abdulla R, Akber AH. Rosa rugosa ziedu ekstrakta pretiekaisuma iedarbība lipopolisaharīdu stimulētos RAW264.7 makrofāgos. Biomol Ther. 2016; 24:184–90.

3. Thao NP, Luyen BTT, Tai BH, Yang SY, Jo SH, Cuong NX, Nam NH, Kwon YI, Minh CV, Kim YH. Žurku zarnu saharāzes inhibīcija Rosa rugosa Thunb saknēm. Bioorg Med Chem Lett. 2014;24:1192–6.

4. Lee HJ, Ahn JW, Lee BJ, Moon SG, Seo Y. Rosa rugosa antioksidantu aktivitāte. Ksbb J. 2004;19:67–71.

5. Kovacheva N, Rusanov K, Atanassov I. Eļļas rožu un rožu eļļas ražošanas rūpnieciskā audzēšana Bulgārijā 21. gadsimtā, virzieni un izaicinājumi. Biotechnol Biotec Eq. 2010;24:1793–8.

6. Solimine J, Garo E, Wedler J, Rusanov K, Fertig O, Hamburger M, Atanassov I, Butterweck V. Tirozināzes inhibējošie komponenti no rožu eļļas destilācijas notekūdeņu polifenoliem bagātinātās frakcijas. Fitoterapija. 2016;108:13–9.

7. Callaway TR, Edrington TS, Anderson RC, Byrd JA, Nisbet DJ. Kuņģa-zarnu trakta mikrobu ekoloģija un mūsu pārtikas piegādes drošība saistībā ar salmonellu. J Anim Sci. 2008. gads;86:163–72.

8. Shohayeb M, Abdel-Hameed ESS, Bazaid SA, Maghrabi I. Rosa damascena MILL antibakteriālā un pretsēnīšu aktivitāte. Ēteriskā eļļa, dažādi rožu ziedlapiņu ekstrakti. Global J Pharmac. 2014;8:01–7.

9. Kim S, Lee S, Gwak K, Lee J, Choi I. Cryptomeria japonica ēterisko eļļu balinošais efekts un antioksidanta aktivitāte. Planta Med. 2011;77:1301.

10. Baek SH, Nam IJ, Kwak HS, Kim KC, Lee SH. Euryale ferox sēklu ekstrakta etilacetāta frakcijas šūnu anti-melanogēnā iedarbība, izmantojot lizosomu sadalīšanās mehānismu. Int J Mol Sci. 2015;16:9217–35.

11. Roh JS, Han JY, Kim JH, Hwang JK. No saflora (Carthamus tinctorius L.) sēklām izdalīto aktīvo savienojumu inhibējošā iedarbība melanoģenēzei. Biol Pharm Bull. 2004;27:1976–8.

12. Takaki A, Yamamoto K. Oksidatīvā stresa kontrole hepatocelulārā karcinomas gadījumā: noderīga vai kaitīga? Pasaules J Hepatol. 2015; 7:968–79.

13. Xue P, Sun XY, Zhang WY, Wang QC, Ren GX. RODW fitoķīmiskās sastāvdaļas, antioksidanti, pretmikrobu līdzekļi, tirozināzi inhibējošās aktivitātes. Modern Food Sci Tech. 2017;33:105–10.

14. Briehl MM. Skābeklis cilvēka veselībā no dzīves līdz nāvei – pieeja redoksbioloģijas un signalizācijas mācīšanai absolventiem un medicīnas studentiem. Redox Bio. 2015; 5:124–39.

15. Ellinsvorta DC. Arsēns, reaktīvais skābeklis un endotēlija disfunkcija. J Pharmacol Exp Ther. 2015;353:458–64.

16. Balaguer A, Chisvert A, Salvador A. Videi draudzīgs LC vienlaicīgai askorbīnskābes un tās atvasinājumu noteikšanai ādu balinošajā kosmētikā. J Sep Sci. 2008;31:229–36.

17. Fawole OA, Makunga NP, Opara UL. Granātābolu augļu mizas metanola ekstrakta antibakteriālās, antioksidanta un tirozināzes inhibējošās aktivitātes. BMC Complement Altern Med. 2012;12:1–11.

18. Park KM, Kwon KM, Lee SH. Antioksidantu aktivitāšu un tirozināzes inhibējošo īpašību novērtējums no micēlija kultūras ekstraktiem. Evid-Based Compl Alt Med. 2015;2015:616298–304.

19. Thaipong K, Boonprakob U, Crosby K. ABTS, DPPH, FRAP un ORAC testu salīdzinājums, lai novērtētu gvajaves augļu ekstraktu antioksidantu aktivitāti. J Food Compos Anal. 2006;19:669–75.

20. Xue P, Yao Y, Yang XS, Feng J, Ren GX. Uzlabota žeņšeņa ekstrakta pretmikrobu iedarbība ar siltuma transformāciju. J Gins Res. 2016;41:180–7.

21. Rusanov KE, Kovacheva NM, Atanassov II. Eļļu nesošās rozes rožu ziedu un destilētas eļļas gaistošo vielu salīdzinošā gc/ms analīze. Biotechnol Biotec Eq. 2014;25:2210–6.

22. Koksal N, Saribas R, Kafkas E, Aslancan H, Sadighazadi S. Pirmās rožu eļļas un pirmās rožu ūdens gaistošo savienojumu noteikšana ar hs-spme/GC/ms metodēm. Afr J Tradit Complement Alt Med. 2015; 1212:145–50.

23. Mahboubifar M, Shahabipour S, Javidnia K. Vērtīgo skābekli saturošo komponentu novērtējums Irānas rožu ūdenī. Intern Int J Chemtech Res. 2014; 6:4782–8.

24. Lei G, Wang L, Liu X, Zhang A. Ātra feniletilspirta kvantitatīva noteikšana rožu ūdenī un rožu ūdens un eļļas ķīmiskie profili Dienvidaustrumu Ķīnā. J Liq Chromatogr Rela Tech. 2015;38:823–32.

25. Wong PY, Kitts DD. Pētījumi par pētersīļu (Petroselinum crispum) un cilantro (Coriandrum sativum) ekstraktu dubultajām antioksidanta un antibakteriālajām īpašībām. Food Chem. 2006;97:505–15.

26. Li L, Ham H, Sung J, Kim Y, Lee H. Antioksidantu aktivitātes metanola ekstraktiem no četrām dažādām rožu šķirnēm. J Food Nutr Res. 2014;2:69–73.

27. Netzel M, Strass G, Bitsch I, Konitz R, Christmann M, Bitsch R. Vīnogu apstrādes ietekme uz atlasītiem antioksidantu fenoliem sarkanvīnā. J Pārtikas inž. 2003. gads; 56:223–8.

28. Džo SS, Kims YB, Lī DI. Baltās rozes zieda sekundāro metabolītu pretmikrobu un antioksidantu īpašības. Plant Pathol J. 2010;26:57–62.

29. Saanchez-Ferrer A, Rodríguez-López JN, García-Cánova F, García-Carmona F. Tyrosinase: visaptverošs tās mehānisma pārskats. Bioch Et Biophy Acta. 1995;1247:1–11.

30. Kim YJ, Uyama H. ​​Tirozināzes inhibitori no dabīgiem un sintētiskiem avotiem: struktūra, kavēšanas mehānisms un nākotnes perspektīva. Cell Mol Life Sci. 2005; 62:1707–23.

31. Said BOS, Haddadi-Guemghar H, Boulekbache-Makhlouf L, Rigou P, Remini H, Adjaoud A. Ēterisko eļļu sastāvs, eucalyptus globulus augļu hidrodestilācijas ekstrakta antibakteriālās un antioksidanta aktivitātes. Ind Crop Prod. 2016;89:167–75.

32. Aridogan BC, Baydar H, Kaya S, Demirci M, Mumcum E. Dažu ēterisko eļļu pretmikrobu aktivitāte un ķīmiskais sastāvs. Arch Pharm Res. 2002;25:860–4.

33. Gochev V, Wlcek K, Buchbauer G, Stoyanova A, Dobreva A, Schmidt E, Jirovetz L. Salīdzinošs novērtējums par antimikrobiālo aktivitāti un dažādu ģeogrāfisku izcelsmju rožu eļļu sastāvu, jo īpaši Bulgārijas rožu eļļu. Nat Prod Commun. 2008;3:1063–8.

34. Etschmann MMW, Bluemke W, Sell D, Schrader J. 2-Feniletanola biotehnoloģiskā ražošana. App Microbiol Biot. 2002;59:1–8.