Molekulārie ceļi, kas saistīti ar Cistanche Tubulosa ilgmūžības veicināšanu un kognitīvo uzlabošanu Drosofilā

lai iegūtu plašāku informāciju:ali.ma@wecistanche.com

Wei-Yong Lin et al

Abstract:

Fons:Tiek uzskatīts, ka novecošanās process, tostarp fiziskā disfunkcija un ar vecumu saistīti atmiņas traucējumi (AMI), ir saistīti ar kumulatīviem oksidatīviem bojājumiem un insulīna/IGF-1 signālu ceļiem. Mērķis: šī pētījuma mērķis bija noskaidrot in vivo ietekme uz novecošanās aizkavēšanu un AMI uzlabošanu un pamatā esošos molekulāros mehānismusCistanche tubulosa(CT), ārstniecības augs, ko izmanto tradicionālajā ķīniešu medicīnā, lai uzlabotu seksuālo funkciju un ārstētu nieru darbības traucējumus

Metodes:Mušas, apstrādātas un neapstrādātas ar CT(Cistanche Tubulosa), tika novērots mūža ilgums, rezistence pret oksidatīvo stresu ar H2O2 vai parakvātu, bada tests, kognitīvā uzvedība ar T veida labirintu un mērķa gēnu transkripcijas līmeņi ar kvantitatīvo RT-PCR.

Rezultāti:CT ievadīšana(Cistanche Tubulosa)pagarināja vidējo un maksimālo mūža ilgumu un palielināja mušu izturību pret oksidatīvo stresu. CT(Cistanche Tubulosa)papildināšana arī uzlaboja atmiņas veidošanos jaunām mušām un nomāca AMI novecošanos. Ir identificēti vairāki gēni un signalizācijas ceļi, tostarp rapamicīna (mTOR) un Notch tīklu mehāniskais mērķis, kas izraisa šo farmakoloģisko iedarbību un izmaiņas glutamāta receptoru gēnu ekspresijā.

Secinājums:Mūsu rezultāti liecina, ka CT(Cistanche Tubulosa)Papildinājumi var palīdzēt palēnināt novecošanās fenotipus un atvieglot mušu kognitīvās uzvedības samazināšanos, norādot uz iespējamo pielietojamību cilvēku veselības uzlabošanai un samazināt uzņēmību pret ar vecumu saistītiem traucējumiem.

Atslēgvārdi:novecošana,Cistanche tubulosa,Kognitīvā uzvedība, Herb

Noklikšķiniet uz Cistanche kāta produktiem

Ievads

Tā kā visā pasaulē pieaug vecāka gadagājuma iedzīvotāju skaits, veselīgas novecošanas un ilgmūžības veicināšana ir arvien svarīgāka sabiedrības veselības problēma zinātnei, sabiedrībai un medicīniskās aprūpes jomā. Ir ierosināts, ka novecošanās procesu kontrolē sarežģīti mehānismi, ko veicina plaša ģenētisko un vides faktoru mijiedarbība. Tā kā pakāpeniski tiek bojāti šūnu un audu līmeņi, vecums ir riska faktors un ir cieši saistīts ar jutību pret hroniskām slimībām, piemēram, vēzi, kā arī sirds un asinsvadu un neirodeģeneratīvām slimībām (Kenyon, 2005). Novecošana samazina arī sinaptisko aktivitāti, jaunu olbaltumvielu sintēzi un kognitīvo funkciju. Šīs funkcionālās izmaiņas veicina ar vecumu saistītus atmiņas traucējumus (AMI) (Burke and Barnes, 2010; Schimanski andBarnes, 2010). Tāpēc zāļu izstrāde, lai aizkavētu ar vecumu saistītu patoloģiju un kognitīvo novecošanos, varētu būt labvēlīga cilvēka dzīves kvalitātei. Šajā pētījumā mēs izmantojām Drosophila melanogaster, kas ir ideāls organisms in vivo novecošanās pētījumiem tā īsa mūža ilguma dēļ, lai novērtētu zāļu efektivitāti un izpētītu molekulāros mehānismus, kas ir pamatā novecošanās un AMI uzlabošanai.

Herbacistanche, pazīstams arī ar savu ķīniešu nosaukumu Rou CongRong, ir parazitārs augs, kas galvenokārt izplatīts Ķīnas ziemeļrietumu tuksnešos. Divas Cistanche sugas, Cistanche deserticolaY. C. Ma unCistanchetubulosa(Schrenk) Wight ir iekļauti Ķīnas farmakopejā (2005. gada izdevums) to līdzīgo ķīmisko sastāvdaļu un farmakoloģisko aktivitāšu dēļ. To stublāju ekstrakts ir plaši izmantots tūkstošiem gadu kā tonizējošs līdzeklis, galvenokārt dažādu simptomu, tostarp nieru darbības traucējumu, impotences, neauglības, ārstēšanai un katarses atvieglošanai, kā aprakstīts senās ķīniešu medicīnas grāmatās. Ir izdalītas daudzas ķīmiskas sastāvdaļas, tostarp ēteriskās eļļas, feniletanoīdu glikozīdi (PhG), iridoīdi, lignāni un saharīdi.Cistanchesugas un divi galvenie PhG komponenti, akteozīds un andehinakozīds, parasti tiek izvēlēti kā marķieri Herba cistanche kvalitātes novērtēšanai to ievērojamās farmakoloģiskās iedarbības dēļ (Wang et al., 2012).

Cistanche tubulosa(CT) ekstraktiem piemīt dažādas bioloģiskas funkcijas, kas ietver imūnās aktivitātes modulēšanu, seksuālās funkcijas uzlabošanu, matu augšanas veicināšanu un citus antioksidācijas, hepatoaizsardzības, pretosteoporozes un pretaudzēju ieguvumus (Li et al., 2016; Seok et al., 2015). Wang et al., 2012). Turklāt in vitro pētījums atklāja, ka Herbacistancheekstrakts var aizsargāt dopamīnam līdzīgus neironus no H2O2-inducētiem oksidatīviem bojājumiem un ievērojami palielināt nervu augšanas faktora un no smadzenēs iegūtā neirotrofiskā faktora līmeni (Lin et al., 2013). Ehinakozīds novērsa dopamīna neironu nāvi Parkinsona slimības MPTP bojātā peles modelī (Zhao et al., 2010). Turklāt CT(Cistanche Tubulosa)ekstrakts uzlaboja kognitīvo disfunkciju, samazinot amiloīda nogulsnēšanos un palielinot acetilholīna un dopamīna līmeni Alcheimera slimības (AD) žurku modelī (Wu et al., 2014). Lai gan Herba terapeitiskā iedarbībacistanchejoprojām ir nepieciešams, lai apstiprinātu, maza izmēra, neplacebo kontrolētu klīnisko pētījumu par CT(Cistanche Tubulosa)glikozīdu ekstrakti parādīja, ka zāles spēj ārstēt pacientus ar vieglu līdz vidēji smagu AD un ir ar salīdzinoši vieglām blakusparādībām pat pēc ilgstošas ​​lietošanas (Guo et al., 2013). Šie dati liecina, ka Herba satur glikozīdu ekstraktuscistanchepiemīt neiroprotektīva un anti-demences iedarbība. Neskatoties uz dažādām CT priekšrocībām(Cistanche Tubulosa), tā molekulārie mehānismi un ietekme uz novecošanās aizkavēšanu un AMI uzlabošanos nav noskaidroti. Šajā pētījumā CT ietekme(Cistanche Tubulosa)Ievērojami pagarinot dzīves ilgumu, tika pārbaudīta uzlabota izturība pret vides stresu un nomākta ar vecumu saistīta kognitīvā disfunkcija, lai noteiktu iespējamo CT klīnisko lietderību.(Cistanche Tubulosa)palēninot novecošanās procesu.

Materiāli un metode

Augu izcelsmes zāles

Izcelsmes identifikācijaCistanche tubulosa(Schrenk) Wight (Orobanchaceae) (CT) tika pārbaudīts Ko Da PharmaceuticalCo. Ltd. (Taoyuan, Taivāna), kurā tiek glabāti kuponu paraugi (10 603 205) un tiek ražotas CT koncentrētas augu izcelsmes zāles. Īsumā, žāvētais gaļīgais CT stublājs tika ekstrahēts 12-kārtīgi vārītā ūdenī 1 stundu, pēc tam filtrēja. Filtrāti tika savākti un pakļauti vakuuma un pazemināta spiediena koncentrācijai 1 stundu, lai iegūtu ekstraktus. CT ekstrakti tika sajaukti ar cieti proporcijā 1: 1 (w/w) un tika pakļauti izsmidzināšanai, lai iegūtu CT pulveri.

Mušu krājumu uzturēšana un mūža mērīšana

Šajā pētījumā izmantotā savvaļas tipa mušu līnija bija CantonS, kas iegūta no Bloomington Drosophila Stock Center. Mušas tika audzētas un turētas kukurūzas miltu standarta barotnē 25 grādu temperatūrā 50–60 procentu relatīvajā mitrumā 12-h gaismas-tumsas ciklā. Jaunās pieaugušās mušas tika savāktas 24 stundu laikā un atdalītas pēc dzimuma. No agras brieduma vecuma mušas tika papildinātas ar CT. CT(Cistanche Tubulosa)pulveris tika izšķīdināts ūdenī un pievienots kukurūzas miltu barotnei 5, 4, 10, 8 un 21, 6 mg / ml koncentrācijās, kas bija proporcionālas efektīvai dienas devai perorālai lietošanai. Dzīves ilguma analīzē divdesmit līdz trīsdesmit mušas tika izaudzētas pārtikas flakonā ar vai bez CT(Cistanche Tubulosa); katrai apstrādei tika veiktas vismaz 250 mušas. Pārtikas flakoni tika nomainīti ik pēc 3 līdz 4 dienām, un tajā laikā tika skaitītas mirušās mušas

Stresa izturības testi

Pieaugušas mušas tika savāktas un pēc tam iepriekš apstrādātas ar kontroles diētu bez CT(Cistanche Tubulosa)un eksperimentālās diētas, kas papildinātas ar 5,4, 10,8 un 21,6 mg/ml CT 20 dienas 25 grādu temperatūrā. Izsalkuma analīzei mušas tika turētas tikai flakonos ar mitru papīru un novērtēja to izturību pret bada izraisītu oksidatīvo stresu. Lai veiktu oksidatīvā stresa testus, mušas tika pārvietotas uz flakoniem, kas nesatur pārtiku un saturēja filtrpapīru ar ūdeņraža peroksīdu (H2O2) (Sigma Aldrich) 5% glikozes šķīdumā, lai noteiktu mušu izturību pret H2O2-inducēto hidroksilradikāli (OH). −) stress. Līdzīgi mušas tika pārvietotas uz flakoniem, kuros bija filtrpapīrs, kas piesātināts ar 10 mM parakvātu (Sigma-Aldrich), kas rada superoksīda anjonus (O2), kas izraisa oksidatīvus bojājumus dzīvniekiem. Mušu mirstība tika vērtēta vismaz trīs reizes dienā, līdz visas bija mirušas. Tika veiktas vismaz 250 mušas vienā ārstēšanā. Lai kāptu, kā teikts, mušas, kas bija pakļautas parakvātam 0 un 16 stundas, tika ievietotas plastmasas flakonā un viegli piesitot tās apakšai. Mušu skaits flakona augšpusē tika skaitīts pēc 18 sekunžu kāpšanas.

Auglības novērtējums

Gan neapstrādāti tēviņi, gan mātītes baroja 5,4 un 10,8 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa)20 dienas kalpoja kā eksperimentālās grupas. Desmit eksperimentālās mātītes tika pārotas ar vienādu skaitu neapstrādātu tēviņu, kuri bija 9-dienu veci un nebija saņēmuši CT. Līdzīgi eksperimentālie tēviņi tika pāroti ar neapstrādātām mātītēm tādā pašā stāvoklī. Pēc tam pārojušās mušas tika pārvietotas uz jaunu flakonu olu dēšanai uz 24 stundām, un kopējās flakonos izdētās olas tika skaitītas manuāli. Auglības anindekss tika aprēķināts kā vidējā dienas olu ražošana uz vienu mātīti. Vienā apstrādē tika veikti vismaz pieci flakoni, un kopējais mušu skaits n=50–80.

Ožas asociatīvā mācīšanās un atmiņa

Mušas tika savāktas pēc eklozijas un iepriekš apstrādātas ar 5,4, 10,8 un 21,6 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa)kalpoja kā eksperimentālās grupas, un kontroles mušas nebija saņēmušas CT(Cistanche Tubulosa)5 un 20 dienas 25 grādu temperatūrā. Viens apmācības izmēģinājums tika veikts saskaņā ar iepriekšējo pētījumu (Dubnau et al., 2001). Īsi sakot, aptuveni 100 mušas tika pakļautas divām smaržām, vai nu 3-oktanola (OCT, Sigma-Aldrich) vai 4-metilcikloheksanola (MCH, Sigma-Aldrich) smaržai. Mušas, kas pakļautas pirmajai smakai (kondicionētais stimuls, CS plus ), tika savienotas pārī ar 80 V elektrošoku un pēc tam saņēma otru smaku (CS-) bez triecieniem. Mācīšanās spējas tika noteiktas uzreiz pēc apmācības un 3- un {{ spējas. 12}}h atmiņa ir veikusi testu pēcapmācības procedūru attiecīgi 3 un 24 h. Lai veiktu testu, apmācītās mušas tika iesprostotas T veida labirinta izvēles punktā, kurā tās vienlaikus tika pakļautas OCT un MCH iedarbībai. Veiktspējas indekss (PI) tika aprēķināts, lai atspoguļotu kondicionētu smaku novēršanu. Nulles PI norādīja uz 50:50 sadalījumu, un aPI 100 uzrādīja sadalījumu 0:100 prom no CS plus smakas.

Transkripta līmeņu mērījumi, izmantojot reāllaika kvantitatīvo PCR (qPCR)

Mušas tika savāktas pēc eklozijas un iepriekš apstrādātas ar 5,4 un 10,8 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa)20 dienas 25 grādu temperatūrā darbojās kā eksperimentālās grupas, un kontroles mušas nebija saņēmušas CT. Kopējā RNS tika ekstrahēta, izmantojot RNeasy Mini komplektu (Qiagen), un cDNS tika sintezēta no kopējās RNS, izmantojot reversās transkripcijas reakciju, izmantojot lielas ietilpības cDNS reverso transkripciju (Thermo Fisher Scientific). Mērķa gēnu transkripta līmeņi tika kvantificēti, izmantojot reāllaika kvantitatīvo polimerāzes ķēdes reakciju (Applied Biosystems ViiATM 7 Real-Time PCR System), izmantojot FastStart SYBR Green Master (Roche) saskaņā ar ražotāja norādījumiem. Relatīvais transkripta daudzums tika normalizēts, izmantojot salīdzinošo cikla sliekšņa metodi ar mājturības gēnu RpLP0 kā iekšējo standartu. Relatīvās ekspresijas atšķirības eksperimentālo grupu mērķa gēnos tika normalizētas ar kontroles grupas atšķirībām un tika parādītas kā locījuma izmaiņas. Mērķa gēnu praimeri ir uzskaitīti 1. papildu tabulā.

Tīkla izbūve un analīze

Lai analizētu funkcionālo interpretāciju un bioloģiskos procesus, ko veicina mūsu identificētie atšķirīgi izteiktie gēni, anotācijas, vizualizācijas un integrētā atklāšanas datu bāze (DAVID) tika izmantota, lai anotētu un analizētu Kioto gēnu un genoma enciklopēdijas (KEGG) ceļa un gēnu bagātināšanu. Šo gēnu ontoloģija (Jiao et al., 2012). Lai analizētu diferencēti izteiktu gēnu tiešo un netiešo mijiedarbību, gēnu saraksts tika augšupielādēts arī meklēšanas rīkā mijiedarbojošo gēnu/proteīnu izgūšanai (STRING), lai izgūtu mijiedarbības informāciju un ģenerētu proteīnu mijiedarbības tīklus (Franceschini et al., 2013).

Statistiskā analīze

Visi eksperimenti tika veikti ar vismaz trim neatkarīgiem atkārtojumiem, un statistiskās analīzes tika veiktas ar SigmaStat v3.5 programmatūru (Systat Software, Inc., IL). Dati par dzīves ilguma pagarināšanu un oksidatīvā stresa izaicinājumiem tika veikti ar kopējo mušu skaitu no 250–350, un log-rank tests tika novērtēts dažādām analīzēm. Grupu salīdzinājumus auglības novērtēšanai un kognitīvo testu novērtēja ar vienvirziena dispersijas analīzi (ANOVA), kam sekoja Daneta post-hoc tests. Citi eksperimentālie salīdzinājumi tika veikti, veicot Stjudenta t-testu, salīdzinot ar kontroles grupu. Dati ir attēloti kā vidējais ± SEM, un p-vērtība < 0,05="" tika="" uzskatīta="" par="">

Rezultāti

CT (Cistanche Tubulosa) papildinājums palielina mušu mūžu

Lai pārbaudītu, vai CT(Cistanche Tubulosa)papildināšana var pagarināt mušu mūža ilgumu, mušas tika papildinātas ar 5,4, 10,8 un 21,6 mg/ml CT uzreiz pēc aptumšošanās 25 grādu leņķī visu eksperimentālo procedūru laikā. Mūsu dati liecināja, ka CT(Cistanche Tubulosa)papildināšana var pagarināt gan tēviņu, gan mātīšu mušu mūžu. Kā parādīts attēlā. 1A, mušu tēviņu dzīves ilgums tika pagarināts ar visām CT devām(Cistanche Tubulosa). Vidējais mūža ilgums grupām, kas papildinātas ar 5,4, 10,8 un 21,6 mg/ml CT, ievērojami palielinājās attiecīgi par 18,9%, 10,3% un 9,9%. CT(Cistanche Tubulosa)arī ievērojami palielināja visu CT grupu maksimālo mūža ilgumu, salīdzinot ar kontroles grupu, no 88 līdz 102, 98 un 102 dienām pēc ārstēšanas ar 5,4, 10,8 un 21,6 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa), attiecīgi. Sievietēm CT(Cistanche Tubulosa)ievērojami palielināja CT grupu vidējo dzīves ilgumu, salīdzinot ar kontroles grupu (1.B att.). Vidējais dzīves ilgums palielinājās līdz 18,8 procentiem ar 5,4 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa)un 5,5 procenti un 6,7 procenti ar attiecīgi 10,8 un 21,6 mg/ml CT. Mēs arī novērojām, ka maksimālais dzīves ilgums tika ievērojami pagarināts no 91 dienas (kontroles) līdz 109, 98 un 102 dienām pēc ārstēšanas ar 5,4, 10,8 un 21,6 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa), attiecīgi; maksimālā mūža ilguma palielināšanās maksimālais lielums bija 19,8 procenti pie 5,4 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa). Mūsu rezultāti liecina, ka CT(Cistanche Tubulosa)uztura papildināšana ievērojami pagarina gan tēviņu, gan mātīšu mušu mūžu. Kurkumīns (10 μM) tika izmantots kā pozitīva kontrole un efektīvs mūža pagarināšanā, kā parādīts 1. papildu attēlā.

CT papildināšana palielina izturību pret badu un oksidatīvo stresu

Dzīves ilguma pagarināšana bieži ir saistīta ar pastiprinātu izturību pret oksidatīvo stresu novecošanās procesa laikā. Mēs novērtējām, vai CT(Cistanche Tubulosa)papildināšana palielina izturību pret oksidatīvo stresu. Tēviņu un mātīšu mušas tika iepriekš apstrādātas ar dažādām CT devām(Cistanche Tubulosa)20 dienas un novērtēta to izdzīvošana pēc bada (2.A att.). Abu dzimumu vidējais izdzīvošanas laiks un maksimālais mūža ilgums, salīdzinot ar kontroles grupas rādītājiem, uzrādīja ievērojamu pieaugumu 5,4 un 10,8 mg/ml CT grupās, bet ne 21. .6 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa)grupai. Tika novērtēta arī iepriekš apstrādāto mušu izdzīvošana pēc H2O2 un parakvāta iedarbības, kas rada reaktīvās skābekļa sugas (ROS), lai izraisītu šūnu novecošanos un šūnu nāvi. Mēs atklājām, ka CT(Cistanche Tubulosa)aizsargāja gan tēviņus, gan mātītes pret H2O2 toksicitāti un pagarināja to vidējo un maksimālo mūža ilgumu (2.B att., p < 0.01 un 0,001, pie 5,4 un 10,8 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa), attiecīgi). Tika novērota arī līdzīga tendence, kas liecina par paaugstinātu izturību pret parakvāta izaicinājumu. Tēviņi, kas baroti ar visām CT devām, un mātītes, īpaši tās, kas papildinātas ar 5,4 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa) (Cistanche Tubulosa), izdzīvoja ilgāk nekā kontroles (3.A att., p < 0.001).="" attiecībā="" uz="" kāpšanas="" spēju="" gan="" tēviņiem,="" gan="" mātītēm="" tika="" ievadīts="" 10,8="" mg/ml="">(Cistanche Tubulosa)novēroja novājinātu parakvāta izraisītu kustību disfunkciju 16 h pēc parakvačas (3.B att., visi p < 0.05).="" šie="" rezultāti="" atklāj,="" ka="" ct="" papildināšana="" uzlabo="" izturību="" pret="" kādu="" oksidatīvo="" stresu,="" kas="" liecina,="" ka="">(Cistanche Tubulosa)-izraisīta dzīves ilguma pagarināšana ir saistīta ar paaugstinātu antioksidantu aizsardzību.

CT (Cistanche Tubulosa) ietekme uz reproduktīvo spēju

Tā kā novecošanas teorija norāda, ka novecošanās process negatīvi ietekmē reprodukciju, mēs pārbaudījām, vai CT(Cistanche Tubulosa)ietekmēja reproduktīvo piemērotību, analizējot pieaugušo mušu olu dēšanas spēju. Pieaugušas mušas tika savāktas pēc izspiešanas, atdalītas pēc dzimuma un ievadītas 5,4 un 10,8 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa)uz 20 dienām. Jauna vīrišķā vai mātīte mušas, kas ievadītas CT(Cistanche Tubulosa)tika pāroti ar 9-dienu vecām mušām, kurām netika veikta CT(Cistanche Tubulosa). Mēs novērojām no devas atkarīgu pieaugumu dienā izdētu olu skaitā uz vienu mātīti, proti, 30,3% un 57,2% slimu mušu, kas apstrādātas ar 5,4 un 10,8 mg/ml CT.(Cistanche Tubulosa), attiecīgi, salīdzinot ar kontrolēm (4. att., p < 0.05).="" šie="" dati="" liecina,="" ka="">(Cistanche Tubulosa)papildināšana varētu veicināt reproduktīvo spēju mazgadīgām mātītēm, bet, visticamāk, tas nenotiek gados vecākiem vīriešiem.

CT (Cistanche Tubulosa) papildinājums uzlabo kognitīvās spējas

Mēs noteicām, vai CT(Cistanche Tubulosa)Papildināšanai ir labvēlīga ietekme uz mācīšanās un atmiņas spējām, tika veikts viens ožas-asociatīvās apmācības cikls. Mēs novērtējam mācīšanās veiktspēju, kā arī attiecīgi 3- un 24-h atmiņu, kas tika uzskatīta par vidēja termiņa atmiņu un ilgtermiņa atmiņu. Pirmkārt, mušas tika papildinātas ar dažādām CT devām(Cistanche Tubulosa)uz 5 dienām. Mācīšanās spējas bija līdzīgas gan CT, gan kontroles grupās (5.A att.). Kas attiecas uz 3-h atmiņu, 10,8 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa)grupai bija augstāks veiktspējas indekss (PI) nekā kontroles grupām (5.B att., 51,5 ± 3,2 pret 42,6 ± 2,1), lai gan būtiskas atšķirības nav. Turklāt 5,4 un 10,8 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa)ievērojami uzlaboja mušu {{0}}h atmiņu, salīdzinot ar kontrolgrupām (attēls 5C, PI=41,6 ± 3,6 un 45,9 ± 3.0 pret 29,6 ± 2,9, attiecīgi , p < 0,05="" un="" 0,01).="" šie="" rezultāti="" liecināja,="" ka="" ct="" papildināšana="" uzlabo="" atmiņas="" veidošanos="" jaunām="" mušām.="" otrkārt,="" kamēr="">(Cistanche Tubulosa)papildināšana palielināja mušu ilgmūžību un oksidatīvo izturību, mēs tālāk noskaidrojām, vai papildinājums varētu arī uzlabot kognitīvo uzvedību vecām mušām. Mušām tika ievadīta standarta barība ar vai bez 5,4, 10,8 un 21,6 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa)20 dienas, lai imitētu novecošanos; mušas papildinātas ar šīm CT devām(Cistanche Tubulosa)bija ievērojami augstāki mācīšanās PI (attiecīgi 67,6 ± 1,9, 72,5 ± 0,5 un 75,2 ± 1,3) nekā kontroles grupām (58.0 ± 2.0; 5. D attēls). , p < 0.001), kas liecina, ka CT(Cistanche Tubulosa)ir labvēlīga ietekme, aizkavējot ar vecumu saistītu mācību samazināšanos. Līdzīgi rezultāti arī atklāja, ka 5,4 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa)grupai bija efektīvāka atmiņas saglabāšana pēc {{0}}h (5. att. E, 47,5 ± 1,9, salīdzinot ar kontroli37.{{10}} ± 2,9, p < 0,05)="" un="" 24-="" h="" atmiņas="" testi="" (5.f="" att.,="" 31,8="" ±="" 3,8="" pret="" kontroli="" 19,3="" ±="" 2,4,="" p="">< 0,01).="" šie="" rezultāti="" liecina,="" ka="">(Cistanche Tubulosa)Papildināšana ne tikai uzlabo atmiņas veidošanos jaunām mušām, bet arī aizkavē kognitīvās uzvedības traucējumus un saglabā efektīvākas mācīšanās un atmiņas spējas ar vecumu.

Molekulārie ceļi, kas saistīti ar ilgmūžības veicināšanu un CT papildināšanas kognitīvo uzlabošanu

CT(Cistanche Tubulosa)papildināšana gan nomāc AMI, gan pagarina dzīves ilgumu. Tāpēc mēs pamatojām, ka ar AMI un ilgmūžību saistītos gēnus var noteikt, novērtējot diferenciālo ekspresiju starp kontroles un 5, 4 un 10, 8 mg / ml CT grupām, izmantojot qPCR. Ar CT apstrādāto mušu gēnu ekspresijas izmaiņas tika salīdzinātas ar kontroles grupas izmaiņām, kas parādītas 6.A attēlā. Novecošanās procesā var būt iesaistīta vairāku mērķa gēnu, tostarp Sirt6, Sir2, Sod, p38b un Sirt2, paaugstināta ekspresija. Palielinājās arī S6k, raptor, Psn, Rpd3 un N transkripcijas līmeņi, kas liecina, ka CT(Cistanche Tubulosa)papildināšana maina to TOR un Notch ceļu signālu pārraidi. Turklāt CT papildināšana būtiski ietekmēja Nmdar1, Nmdar2 unSkpA mRNS ekspresiju. Lai izceltu ar CT saistītās olbaltumvielu mijiedarbības, kas pagarina dzīves ilgumu un uzlabo mācīšanos un atmiņu, tika izveidots uz literatūru balstīts qPCR pārbaudītu gēnu proteīnu mijiedarbības tīkls (6.B attēls). Katrs mezgls apzīmē vienu proteīnu, savukārt katra mala apzīmē vienu uz literatūru balstītu mijiedarbību. Mezgli ir grupēti atbilstoši KEGG ceļam un gēnu ontoloģijas bioloģiskajam procesam (GOBP). Kā parādīts 6.B attēlā, GOBP neiroaktīvo ligandu-receptoru mijiedarbība, kas ietekmē mācīšanos un atmiņu, un cita GOBPof novecošanās, kas korelē ar dzīves ilgumu, ir gan saistīta ar Notch signalizācijas ceļu. Turklāt novecošanās GOBP ietekmē mTOR signalizācijas ceļš. CT izraisītas gēnu pārmērīgas ekspresijas nozīme šajos GOBP un ​​ceļos ir aprakstīta sadaļā Diskusijas.

6. att. Atšķirīgi izteiktu gēnu tīkla analīze. Mušas, kas iepriekš apstrādātas ar 5,4 un 10,8 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa)un kontroles diētas 25 grādu temperatūrā 20 dienas tika savāktas, lai noteiktu diferenciālo gēnu ekspresiju. (A) Mērķa gēnu relatīvie transkripta līmeņi līdz kontrolei tika kvantificēti, izmantojot qPCR. n=4 katrai grupai. (B) Augšupieregulēti gēni, kas iesaistīti šūnu signālu pārraidē, un to mijiedarbības tīkls. Mezgli apzīmē gēnus. Gēni ar pārmērīgu ekspresiju ir apvilkti zaļā krāsā. Malas atspoguļo mijiedarbību starp gēnu produktiem. Mijiedarbības veidi attēlā ir apzīmēti ar dažādām krāsām. (Lai interpretētu šīs attēla leģendas atsauces uz krāsu, lasītājs ir skatīts šī raksta tīmekļa versijā.)

Diskusija

Nelīdzsvarotība starp brīvo radikāļu veidošanos un izvadīšanu, ko veic endogēnas antioksidatīvas aizsardzības sistēmas, ar vecumu var izraisīt audu oksidatīvus bojājumus; tādējādi tiek uzskatīts, ka brīvajiem radikāļiem ir izšķiroša nozīme novecošanā (Dato et al., 2013). Šeit mēs parādījām, ka CT(Cistanche Tubulosa)papildināšana mušām pagarina dzīves ilgumu un rada augstu toleranci pret oksidatīviem bojājumiem, ko izraisa H2O2 un parakvāts abiem dzimumiem. Pētījumi korelēja ar CT(Cistanche Tubulosa)un pretnovecošanās, ir mazāk pētīti, bet ekstrakti no C. deserticola var pagarināt dzīves ilgumu pelēm ar paātrinātu novecošanos 8 (SAM-P8) pelēm (Zhang et al., 2014) un ehinakozīdu, kas ir viens no galvenajiem savienojumiem, kas pastāv CT. , labvēlīgi ietekmē C. elegans dzīves ilguma pagarināšanu un stresa toleranci (Wang et al., 2015).

Nesenie pētījumi ar dzīvniekiem parādīja, ka ehinakozīdam ir aizsargājoša iedarbība pret bisfenola A izraisītu sēklinieku toksicitāti un tas uzlabo testosterona biosintēzi, inducējot sēklinieku steroīdu enzīmus, tostarp CYP11A1, 3 -HSD un CYP17A1 (Jiang et al., 2016). CT(Cistanche Tubulosa)etanola ekstrakts arī veicina spermas dzīvotspēju un kvalitāti žurkām (Wang et al., 2016). Lai gan korelācija starp CT(Cistanche Tubulosa)un estrogēns vēl ir jāizpēta, viens pētījums ziņoja, ka ehinakozīds ievērojami palielina estrogēnu receptoru ekspresiju, līdzīgi kā grupai, kas ārstēta ar estradiolu žurkām ar olnīcu izņemšanu (Li et al., 2013). Tā kā reproduktīvās spējas negatīvi korelē ar vecumu (Kenyon, 2005), mēs pārbaudījām, vai CT ir ieguvums vecām mušām. Reproduktīvā piemērotība, ko ietekmē CT(Cistanche Tubulosa)tika novērots tikai mātītēm, kas liecina, ka mātītes varētu reaģēt uz CT(Cistanche Tubulosa)papildināšana. Šie rezultāti atklāj, ka CT var būt dzimumhormoniem līdzīga iedarbība un aizkavēt reproduktīvo novecošanos, kas atbilst CT klīniskajai lietošanai.(Cistanche Tubulosa)seksuālās disfunkcijas ārstēšanai cilvēkiem.

Akteozīds var izskaidrot aizsargājošo iedarbību, lai samazinātu neironu apoptozi un atmiņas zudumu novecojošas peles modelī, ko izraisa D-galaktozes un AlCl3 kombinācija, kas liecina, ka CT varētu būt neiroprotektīvas un atmiņas uzlabošanas īpašības (Gao et al., 2015; Peng et al., 2015). Mūsu dati liecināja, ka atmiņas veidošanās uzlabojās ar CT papildinātām jaunajām mušām. Tāpēc mēs novērtējām, vai CT(Cistanche Tubulosa)Papildinājumi ir labvēlīgi atmiņas saglabāšanai novecošanas laikā, jo ir zināms, ka normālas novecošanas laikā kognitīvās funkcijas samazinās. Mūsu rezultāti atklāja, ka vairākus AMI veidus, tostarp mācīšanos, 3- un 24-atmiņu, var uzlabot ar CT.(Cistanche Tubulosa)papildināšana 20 dienas.Saskaņā ar iepriekšminētajiem rezultātiem, CT(Cistanche Tubulosa)Papildinājumi var labvēlīgi ietekmēt ilgmūžību un uzlabot atmiņas veidošanos, kā arī pietiekami aizkavēt AMI.

Dzīvnieku modeļu izmantošana atvieglo iespējamo mehānismu identificēšanu un CT atkarību no ceļa(Cistanche Tubulosa)lai palēninātu smadzeņu novecošanos un atliktu AMI šūnu līmenī. Mēs koncentrējāmies uz molekulārajiem mehānismiem, kas ir pamatā novecošanai, neironu transmisijai un oksidatīvajam stresam, un pamatojām, ka ar AMI un ilgmūžību saistītos gēnus var identificēt, pārbaudot atšķirīgo ekspresiju starp kontroles un CT grupām, izmantojot qPCR. Notch signalizācijas ceļš ir ļoti konservēts starp sugām no Drosophila līdz cilvēkiem; tas izpaužas pieaugušo centrālajā nervu sistēmā, lai nodrošinātu neironu plastiskumu un regulē neironu diferenciāciju kopā ar tās inhibitoriem attīstības laikā (Presente et al., 2001). Pelēm, kurām ir Notch heterozigota mutācija, trūkst telpiskās mācīšanās un atmiņas (Costa et al., 2003). Presenilīns (Psn) ir nepieciešams, lai aktivizētu Notch šķelšanos Notch intracelulārajā domēnā, un Psn izslēgšana izraisa sinaptiskās plastiskuma un atmiņas veidošanās traucējumus (Saura et al., 2004). Mūsu dati atklāja no devas atkarīgu Notch un Psn regulēšanu CT(Cistanche Tubulosa)papildinātas mušas ar nemainīgu nejūtīgu izteiksmes līmeni, kas nozīmē Notch signalizācijas ceļu kā spēcīgu atmiņas uzlabošanas mehānismu ar CT papildinājumu. Papildus Notch signalizācijai, N-metil-D-aspartāta receptors (NMDAR), glutamāta un D-serīna vadīts jonu kanāls neironos, kontrolē sinaptisko plastiskumu un atmiņas funkciju (Furukawa et al., 2005). Drosophila genoms satur divus NMDAR apakšvienībām, Nmdar1 un Nmdar2, un abām ir izšķiroša nozīme atmiņas funkcijā. Nmdar1 notriekšana Drosophilā pasliktina mācīšanos un atmiņu (Xia et al., 2005), savukārt Nmdar2 pārmērīga ekspresija pelēm uzlabo mācīšanos un atmiņu (Tang et al., 2001). Mūsu dati uzrādīja no devas atkarīgu Nmdar1 un Nmdar2 regulējuma palielināšanos ar CT papildinātām mušiņām, kas liecina par citu iespējamu atmiņas uzlabošanas mehānismu ar CT palīdzību.(Cistanche Tubulosa)papildināšana.

Forkhead box transkripcijas faktora (FoxO) ceļa O klase ir saglabājusies starp sugām un ir kritiska vielmaiņas, stresa tolerances un dzīves ilguma pagarināšanā (Lehtinen et al., 2006). Pēctranslācijas modifikācijas, tostarp fosforilēšana, acetilēšana un visuresamība, regulē FoxOs darbību (van der Horst un Burgering, 2007). Klusais informācijas regulators 2 (Sir2; homologs zīdītājiem ir pazīstams kā SIRT1) regulē FoxO aktivitāti, izmantojot deacetilēšanu, un ietekmē dzīvnieku dzīves ilgumu, kas saistīts ar insulīnam līdzīgā augšanas faktora (IGF) ceļu (Lemieux et al., 2005). Sirt6 defosforilē FoxO, lai palielinātu mūža ilgumu peļu tēviņiem (Kanfi et al., 2012). Mūsu dati atklāja Sir2 un Sirt6 augšregulāciju mušām, kas papildinātas ar CT, kas nozīmē, ka FoxO regulēšana ar krekli var būt spēcīgs mehānisms kalpošanas ilguma pagarināšanai ar CT.(Cistanche Tubulosa)papildināšana. Vielmaiņas procesos radītie brīvie radikāļi izraisa DNS un proteīnu bojājumus, tādējādi saīsinot dzīves ilgumu. Sir2 ir arī oksidatīvā stresa reakcijas gēns (Whitaker et al., 2013), un ir ziņots, ka pārmērīgi ekspresēta superoksīda dismutāze (SOD), kas pārvērš O2− par H2O2 un visbeidzot par H2O, izmantojot katalāzi un glutationa peroksidāzi, pagarina mušu mūžu ( Le Bourg, 2001). Mūsu dati atklāja no devas atkarīgu Sod un Sir2 regulēšanu mušām, kas papildinātas ar CT, liekot domāt, ka antioksidantu ceļi var būt spēcīgs mehānisms dzīves ilguma pagarināšanai, izmantojot CT.(Cistanche Tubulosa)papildināšana.

Vēl vienu galveno novecošanas ceļu regulē mTOR kompleksi mTORC1 un mTORC2, kas abi veicina organisma veidošanos evolucionāri konservatīvā veidā. Signāli no insulīna receptora aktivizē mTORC1 caur fosfoinositīda3-kināzes–Akt ceļu, lai veicinātu proteīnu sintēzi un iekaisumu un inhibētu autofagiju un glikolīzi, izmantojot atšķirīgus pakārtotos proteīnus (Johnson et al., 2013). Olbaltumvielu sintēzi aktivizē ribosomu proteīna S6 kināze (S6K), kas veido negatīvas atgriezeniskās saites cilpu, lai kavētu insulīna receptoru signālu pārraidi (Hands et al., 2009). MTORC1 inhibējošais mērķis ir līdzīgais Drosophila proteīns (sima), kura homologs zīdītājiem ir pazīstams kā hipoksijas izraisīts faktors 1 alfa (HIF1). HIF1 ir aizsargājoša loma pret no vecuma atkarīgiem asinsvadu un motoro neironu bojājumiem (Oosthuyse et al., 2001; Rivard et al., 2000). Mūsu dati atklāja nemainīgu mTOR komplekso apakšvienību, tostarp Tor, rictor un raptor, ekspresijas līmeni. tā kā CT(Cistanche Tubulosa)no devas atkarīgi papildināts S6K un sima, kas nozīmē CT aizsargājošu lomu(Cistanche Tubulosa)pret mTOR aktivitāti.

Secinājumi

Neskatoties uz to, ka ir identificēti daži saistītie ceļi, ilgmūžību un augstu intelektu veicināja CT(Cistanche Tubulosa)iejaukšanās var būt apoligēna iezīme, ko ietekmē vairāku gēnu mijiedarbība, un citi ģenētiski faktori, kurus mēs neesam noskaidrojuši, arī var modulēt novecošanās procesu. Vecāka gadagājuma cilvēkiem novecošanas pētījumos svarīgam ieguvumam ir jābūt vēlamās fiziskās sagatavotības un kognitīvo spēju uzturēšanai, lai atliktu vai novērstu demenci un hroniskas slimības. Tā kā CT(Cistanche Tubulosa), kas pazīstams kā "tuksneša žeņšeņs", kam ir izteikta ārstnieciska iedarbība uz nieru nostiprināšanos jaņ, kas baro visus orgānus un papildina tradicionālās ķīniešu medicīnas būtību, mēs uzskatām, ka mūsu pētījums sniedz pierādījumus, kas atbalsta CT klīnisko ārstēšanu.(Cistanche Tubulosa)un varētu sniegt vērtīgu ieskatu jaunu zāļu vai pārtikas piedevu izstrādē, lai ne tikai aizkavētu novecošanos un ar vecumu saistītas slimības, bet arī uzlabotu cilvēku dzīves kvalitāti.

Interešu konflikts

Autori paziņo, ka viņiem nav interešu konfliktu.

Pateicības

Šo darbu atbalstīja Ķīnas Medicīnas universitāte (CMU103-S-25); Ķīnas Medicīnas universitātes slimnīca (DMR-101-065, DMR-103-099); Taivānas Zinātnes un tehnoloģiju ministrija (NSC 102-2632-B-039-001-MY3, MOST 104-2632-B-039-002) ​​un daļēji Taivānas Veselības un labklājības ministrijas klīnisko izmēģinājumu un pētniecības centrs izcilības (MOHW105-TDU-B-212-133019).

Papildu materiāli

Ar šo rakstu saistīto papildu materiālu tiešsaistes versijā var atrast vietnē doi:10.1016/j.phymed.2017.01.006.

No: “Molekulārie ceļi, kas saistīti ar ilgmūžības veicināšanu un izziņas uzlabošanuCistanche tubulosain Drosophila' byWei-Yong Lin et al

--W.-Y. Lin et al. / Fitomedicīna 26 (2017) 37–44

Atsauces

Burke, SN, Barnes, CA, 2010. Senescent sinapses un hipokampu ķēdes dinamika. Trends Neurosci. 33, 153–161.

Costa, RM, Honjo, T., Silva, AJ, 2003. Mācīšanās un atmiņas deficīts Notch mutantu pelēm. Curr. Biol. 13, 1348–1354.

Dato, S., Crocco, P., D'Aquila, P., de Rango, F., Bellizzi, D., Rose, G., Passarino, G., 2013. Exploring the role of genetic variability and lifestyle in oksidative stresa reakcija veselīgai novecošanai un ilgmūžībai. Int. J. Mol. Sci. 14, 16443–16472.

Dubnau, J., Grady, L., Kitamoto, T., Tully, T., 2001. Neirotransmisijas traucējumi Drosophila sēņu ķermenī bloķē atgūšanu, bet ne atmiņas iegūšanu. Daba 411, 476–480.

Frančešini, A., Šklarčiks, D., Frankilds, S., Kūns, M., Simonovičs, M., Rots, A., Lins, J., Mingess, P., Borks, P., fon Merings, K. , Jensen, LJ, 2013. STRING v9.1: proteīna-olbaltumvielu mijiedarbības tīkli ar lielāku pārklājumu un integrāciju. Nucleic Acids Res. 41, D808–D815.

Furukawa, H., Singh, SK, Mancusso, R., Gouaux, E., 2005. Apakšvienību izvietojums un funkcija NMDA receptoros. Daba 438, 185–192.
Gao, L., Peng, XM, Huo, SX, Liu, XM, Yan, M., 2015. Acteoside (Verbascoside) atmiņas uzlabošana novecojošu peļu modelī, ko izraisa D-gal un AlCl3 kombinācija. Fitotēra. Res. 29, 1131–1136.
Guo, Q., Zhou, Y., Wang, CJ, Huang, YM, Lee, YT, Su, MH, Lu, J., 2013. Atklāts, ar placebo nekontrolēts pētījums parCistanche tubulosaglikozīdu kapsulas (Memoregain((R))) vidēji smagas Alcheimera slimības ārstēšanai. Am. J. Alcheimera Dis. Citi Demen. 28, 363–370.
Hands, SL, Proud, CG, Wyttenbach, A., 2009. mTOR loma novecošanā: proteīnu sintēze vai autofagija? Aging (Albany, NY) 1, 586–597.
Jiang, Z., Wang, J., Li, X., Zhang, X., 2016. Ehinakozīds unCistanche tubulosa(Schenk) R. Vaits uzlabo bisfenola A izraisītos sēklinieku un spermas bojājumus žurkām, izmantojot dzimumdziedzeru ass regulētus steroidogēnos enzīmus. J. Ethnopharmacol 193, 321–328.
Jiao, X., Sherman, BT, Huang da, W., Stephens, R., Baseler, MW, Lane, HC, Lempicki, RA, 2012. DAVID-WS: statusful tīmekļa pakalpojums, lai atvieglotu gēnu/proteīnu saraksta analīzi. Bioinformātika 28, 1805–1806.
Johnson, SC, Rabinovitch, PS, Kaeberlein, M., 2013. mTOR ir galvenais novecošanas un ar vecumu saistītu slimību modulators. Daba 493., 338.–345.
Kanfi, Y., Naiman, S., Amir, G., Peshti, V., Zinman, G., Nahum, L., Bar-Joseph, Z., Cohen, HY, 2012. Sirtuīns SIRT6 regulē dzīves ilgumu vīriešiem pelēm. Daba 483, 218–221.
Kenyon, C., 2005. Novecošanās plastiskums: ilgdzīvotāju mutantu atziņas. 120. šūna, 449–460.
Le Bourg, E., 2001. Oksidatīvais stress, novecošana un ilgmūžība Drosophila melanogaster. FEBS Lett. 498, 183–186.
Lehtinens, MK, Yuan, Z., Boag, PR, Yang, Y., Villen, J., Becker, EB, DiBacco, S., de la Iglesia, N., Gygi, S., Blackwell, TK, Bonni, A., 2006. Konservēts MST-FOXO signalizācijas ceļš veicina oksidatīvā stresa reakciju un pagarina kalpošanas laiku. 125. šūna, 987–1001.
Lemieux, ME, Yang, X., Jardine, K., He, X., Jacobsen, KX, Staines, WA, Harper, ME, McBurney, MW, 2005. Sirt1 deacetilāze modulē insulīnam līdzīgā augšanas faktora signalizācijas ceļu zīdītāji. Meh. Aging Dev. 126, 1097–1105.
Li, F., Yang, X., Yang, Y., Guo, C., Zhang, C., Yang, Z., Li, P., 2013. Ehinakozīda antiosteoporotiskā aktivitāte žurkām ar ovariektomiju. Fitomedicīna 20, 549–557.
Li, Z., Lin, H., Gu, L., Gao, J., Tzeng, CM, 2016. Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): viena no labākajām tradicionālās ķīniešu medicīnas farmaceitiskajām dāvanām. Front Pharmacol. 7, 41.
Lin, S., Ye, S., Huang, J., Tian, ​​Y., Xu, Y., Wu, M., Wang, J., Wu, S., Cai, J., 2013. How do Chinese zāles, kas tonizē nieres, kavē dopamīnerģisko neironu apoptozi? Neirāls Regēns. Res. 8, 2820–2826.

Oosthuyse, B., Moons, L., Storkebaum, E., Beck, H., Nuyens, D., Brusselmans, K., Van Dorpe, J., Hellings, P., Gorselink, M., Heymans, S. , Theilmeier, G., Dewerchin, M., Laudenbach, V., Vermylen, P., Raat, H., Acker, T., Vleminckx, V., Van Den Bosch, L., Cashman, N., Fujisawa, H., Drost, MR, Sciot, R., Bruyninckx, F., Hicklin, DJ, Ince, C., Gressens, P., Lupu, F., Plate, KH, Robberecht, W., Herbert, JM, Collen , D., Carmeliet, P., 2001. Hipoksijas-reakcijas elementa dzēšana asinsvadu endotēlija augšanas faktora promotorā izraisa motoro neironu deģenerāciju. Nat. Genet. 28, 131–138.

Peng, XM, Gao, L., Huo, SX, Liu, XM, Yan, M., 2015. Acteoside (Verbascoside) atmiņas uzlabošanas mehānisms Senescent Mouse Model, ko izraisa D-gal un AlCl3 kombinācija. Phytother, Res. 29, 1137–1144.
Presente, A., Andres, A., Nye, JS, 2001. Notch prasība pieaugušā vecumā neiroloģiskai funkcijai un ilgmūžībai. Neuroreport 12, 3321–3325.
Rivard, A., Berthou-Soulie, L., Principe, N., Kearney, M., Curry, C., Branellec, D., Semenza, GL, Isner, JM, 2000. No vecuma atkarīgs defekts asinsvadu endotēlija augšanā faktora ekspresija ir saistīta ar samazinātu hipoksijas izraisīto 1. faktora aktivitāti. J. Biol. Chem. 275, 29643–29647.
Saura, CA, Choi, SY, Beglopoulos, V., Malkani, S., Zhang, D., Rao, Shankaranarayana, Chattarji, BS, Kelleher, S., 3rd, RJ, Kandel, ER, Duff, K., Kirkwood , A., Shen, J., 2004. Presenilīna funkcijas zudums izraisa atmiņas un sinaptiskās plastiskuma traucējumus, kam seko no vecuma atkarīga neirodeģenerācija. Neirons 42, 23-36.
Schimanski, LA, Barnes, CA, 2010. Neironu proteīnu sintēze novecošanas laikā: ietekme uz plastiskumu un atmiņu. Priekšējie novecošanās neirozi. 2. Seok, J., Kim, TS, Kwon, HJ, Lee, SP, Kang, MH, Kim, BJ, Kim, MN, 2015. gada efektivitāte.Cistanche Tubulosaun Laminaria Japonica ekstrakti (MK-R7) papildina rakstura matu izkrišanu un veicina galvas ādas veselību. Clin. Nutr. Res. 4, 124–131.
Tang, YP, Wang, H., Feng, R., Kyin, M., Tsien, JZ, 2001. Bagātināšanas diferenciālā ietekme uz mācīšanos un atmiņas funkciju NR2B transgēnās pelēs. Neirofarmakoloģija 41, 779–790.
van der Horst, A, Burgering, BM, 2007. Uzsverot FoxO proteīnu lomu dzīves ilgumā un slimībās. Nat. Rev. Mol. Šūna. Biol. 8, 440–450.
Vangs, T., Čens, C., Jangs, M., Dens, B., Kirbijs, GM, Džans, X., 2016.Cistanche tubulosaetanola ekstrakts veicina žurku dzimumhormonu līmeni, inducējot sēklinieku steroidgēnos enzīmus. Pharm. Biol. 54, 481–487.
Van, T., Džans, X., Sji, V., 2012.Cistanche deserticolaYC Ma, "Tuksneša žeņšeņs": pārskats. Am. J. Čins. Med. 40, 1123–1141.
Wang, X., Zhang, J., Lu, L., Zhou, L., 2015. Ehinakozīda ilgmūžības efekts Caenorhabditis elegans, ko izraisa daf-16. Biosci. Biotehnoloģija. Biochem. 79, 1676–1683.
Whitaker, R., Faulkner, S., Miyokawa, R., Burhenn, L., Henriksen, M., Wood, JG, Helfand, SL, 2013. Drosophila Sir2 palielināta izpausme pagarina dzīves ilgumu no devas atkarīgā veidā. Aging (Albany, NY) 5, 682–691.
Wu, CR, Lin, HC, Su, MH, 2014. Apvērsums ar ūdens ekstraktiemCistanche tubulosano uzvedības deficīta Alcheimera slimībai līdzīgā žurku modelī: nozīme amiloīda nogulsnēšanā un centrālā neirotransmitera funkcija. BMC papildinājums. Altern. Med. 14, 202.
Xia, S., Miyashita, T., Fu, TF, Lin, WY, Wu, CL, Pyzocha, L., Lin, IR, Saitoe, M., Tully, T., Chiang, AS, 2005. NMDA receptori mediē ožas mācīšanās un atmiņa Drosofilā. Curr. Biol. 15, 603–615.
Džans, K., Ma, X., Viņš, V., Li, H., Han, S., Dzjans, J., Vu, H., Hans, L., Ohno, T., Uotsu, N., Yamaguchi, K., Ma, Z., Tu, P., 2014. Cistanche deserticola ekstrakti var antagonizēt imūnsenescenci un pagarināt dzīves ilgumu senescences paātrinātās peles gadījumā
Guļavas 8 (SAM-P8) Peles. Evid. Pamatots papildinājums. Alternatīva. Med. 2014, 601383.
Zhao, Q., Gao, J., Li, W., Cai, D., 2010. Echinacoside neirotrofiskie un neiroglābšanas efekti Parkinsona slimības subakūtā MPTP peles modelī. Brain Res. 1346, 224–236.